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    慢性神經(jīng)痛大鼠鞘內(nèi)聯(lián)合應(yīng)用嗎啡和氯胺酮在脊髓上水平的抗傷害性作用及對嗎啡耐受的影響

    2012-01-25 03:52:18崔健君
    實用藥物與臨床 2012年11期
    關(guān)鍵詞:海馬

    呂 金,陳 華,崔健君

    疼痛產(chǎn)生的中樞機制涉及中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)多個腦區(qū)對疼痛信號的整合。以往對其機制的研究大多集中于脊髓水平,而在脊髓以上水平的研究較少。一氧化氮(NO)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)重要的生物活性物質(zhì),參與神經(jīng)病理性疼痛脊髓水平的發(fā)病機制[1],但在腦組織各區(qū)的變化尚不清楚。本文擬通過研究嗎啡和氯胺酮對神經(jīng)病理性痛大鼠腦組織各區(qū)(大腦皮質(zhì)、海馬、腦干)NO濃度和一氧化氮合酶(NOS)活性的影響,探討其脊髓上水平抗傷害性作用的機制及對嗎啡耐受的影響。

    1 材料與方法

    1.1 材料 選健康雄性Wistar大鼠(由中國醫(yī)科大學盛京醫(yī)院動物實驗中心提供),體質(zhì)量200~250 g。鹽酸嗎啡注射液(沈陽第一制藥廠);鹽酸氯胺酮注射液(江蘇恒瑞藥業(yè)股份有限公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 模型的建立 參照楊建平等[2]的方法進行大鼠鞘內(nèi)置管:大鼠腹腔注射10%水合氯醛麻醉后,俯臥位固定,在L3-4間隙處縱切口暴露并分離L3與L4棘突間隙,向頭側(cè)置入導(dǎo)管,插管深度2 cm,見清亮腦脊液從導(dǎo)管內(nèi)緩慢流出,證實導(dǎo)管在蛛網(wǎng)膜下腔,導(dǎo)管開口頭端引出于頸背部,外露1 cm固定。參照 Bennett等[3]的方法制備大鼠右側(cè)坐骨神經(jīng)結(jié)扎(CCI)模型:取右后肢外側(cè)切口,在股骨后找到坐骨神經(jīng)主干,用4條腸線(4-0號腸線)分別相距約1 mm的間距做松弛結(jié)扎,直到神經(jīng)外膜稍稍受壓為止,結(jié)扎標準為使坐骨神經(jīng)支配區(qū)域的肌肉出現(xiàn)暫短的收縮為止[4]。

    1.2.2 分組 大鼠隨機分為5組(B、C、K、M、KM組),每組8只,其中C、K、M、KM組制備CCI模型并進行鞘內(nèi)置管。B組為空白對照組,不實施任何手術(shù),不用藥;C組鞘內(nèi)注射0.9%鹽水10 μL;K組鞘內(nèi)注射氯胺酮50 μg;M組鞘內(nèi)注射嗎啡20 μg;KM組鞘內(nèi)注射嗎啡10 μg和氯胺酮25 μg。CCI術(shù)后第4天開始鞘內(nèi)給藥,1次/d,連續(xù)7 d。所有藥品均用生理鹽水溶解至10 μL,注藥后用生理鹽水10 μL沖管。各組動物鞘內(nèi)給藥7 d后斷頭處死,冰上迅速取出大腦,分離大腦皮質(zhì)、海馬、腦干組織,采用硝酸還原酶法測定NO濃度和NOS活性,NO和NOS測試劑盒由南京建成生物和工程研究所提供。

    1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 10.5統(tǒng)計軟件進行處理,計量資料以±s表示,組間比較采用單因素方差分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié)果

    2.1 各組大鼠用藥7 d后腦組織各區(qū)NO濃度的比較 與B組比較,C和K組腦干NO濃度升高,M組皮質(zhì)、海馬、腦干中均升高;與C組比較,M組皮質(zhì)、海馬NO濃度升高,KM組海馬、腦干中降低;與M組比較,KM組皮質(zhì)、海馬、腦干NO濃度均升高(P<0.05或0.01)。見表1。

    表1 各組大鼠用藥7 d后腦組織各區(qū)NO濃度的比較(μmol/g prot,n=8,±s)

    表1 各組大鼠用藥7 d后腦組織各區(qū)NO濃度的比較(μmol/g prot,n=8,±s)

    注:與B組比較,*P<0.05,**P<0.01;與C組比較,$P<0.05,$$P<0.01;與M組比較,#P<0.05,##P<0.01

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    2.2 各組大鼠用藥7 d后腦組織各區(qū)NOS活性的比較 與B組比較,C、K和M組皮質(zhì)、海馬、腦干中NOS活性均升高;與C和M組比較,KM組皮質(zhì)、海馬、腦干中NOS活性均降低(P<0.05或0.01)。見表2。

    3 討論

    研究發(fā)現(xiàn),內(nèi)源性NO是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)重要的神經(jīng)遞質(zhì),在腦內(nèi)主要來源于血管內(nèi)皮細胞,其次為含NOS的神經(jīng)纖維、神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞。NO產(chǎn)生后直接向四周擴散,透過細胞膜進入組織內(nèi)發(fā)揮作用[4]。

    表2 各組大鼠用藥7 d后腦組織各區(qū)NOS活性的比較(U/mg prot,n=8,±s)

    表2 各組大鼠用藥7 d后腦組織各區(qū)NOS活性的比較(U/mg prot,n=8,±s)

    注:與B組比較,*P<0.05,**P<0.01;與C組比較,$P<0.05,$$P<0.01,與M組比較,#P<0.01

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    本研究結(jié)果顯示,慢性坐骨神經(jīng)結(jié)扎產(chǎn)生痛覺過敏后,大鼠皮質(zhì)、海馬、腦干組織中NOS活性均增加,腦干NO濃度也高于B組,Onal等[5]的研究結(jié)果與本研究相似,他們認為慢性疼痛刺激使腦干NO濃度明顯增加,但并沒有對其他腦區(qū)進行觀察。解剖學研究證實,NOS陽性神經(jīng)元在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)多個腦區(qū)都有定位,而且存在腦干及下丘腦NOS陽性神經(jīng)元向海馬的投射[6]。腦干中線結(jié)構(gòu)是機體內(nèi)源性痛覺調(diào)制系統(tǒng)的中心結(jié)構(gòu),海馬長時程增強是中樞可塑性變化的機制之一[7],且由于大腦皮質(zhì)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的最高級中樞,慢性疼痛使這三個腦區(qū)NOS活性均明顯增加,由此可見,NO與NOS參與了脊髓上水平的痛覺調(diào)制,NO在脊髓上水平主要是疼痛的易化遞質(zhì)。這其中的具體機制尚不清楚,推測可能與NMDA受體的激活有關(guān)。

    本研究證實,嗎啡單獨鞘內(nèi)用于CCI大鼠在早期可產(chǎn)生較好的鎮(zhèn)痛作用,但長時間應(yīng)用鎮(zhèn)痛效果下降,可產(chǎn)生耐受;鞘內(nèi)聯(lián)合應(yīng)用嗎啡和氯胺酮既可減少嗎啡的用量,又具有良好的抗傷害性作用,且隨時間延長鎮(zhèn)痛效果優(yōu)于嗎啡組[8]。本研究發(fā)現(xiàn),鞘內(nèi)單獨應(yīng)用嗎啡使大鼠皮質(zhì)、海馬、腦干NO濃度和NOS活性升高,這可能是嗎啡耐受產(chǎn)生的機制之一。有研究認為,NOS抑制劑能有效阻止嗎啡鎮(zhèn)痛耐受,而NO供體可加速嗎啡耐受的進程,認為NO是導(dǎo)致嗎啡耐受的關(guān)鍵因素[9]。嗎啡和氯胺酮聯(lián)合應(yīng)用可使各腦區(qū)NO濃度和NOS活性低于嗎啡組,這可能與兩者合用能夠抑制嗎啡耐受的形成有關(guān)。有學者認為,小劑量氯胺酮對NMDA受體的作用不應(yīng)該認為是傳統(tǒng)意義上的“鎮(zhèn)痛”,而應(yīng)該考慮為“抗疼痛過敏”、“抗異常痛”和“對耐受的防護作用”[10]。

    綜上所述,神經(jīng)病理性痛大鼠鞘內(nèi)聯(lián)合應(yīng)用嗎啡和氯胺酮可在脊髓上水平產(chǎn)生抗傷害性作用,并可抑制嗎啡耐受的形成,這可能與大腦皮質(zhì)、海馬、腦干的NO水平和NOS活性有關(guān)。

    [1] 陳華,張錦,崔健君.鞘內(nèi)聯(lián)合應(yīng)用嗎啡和氯胺酮對神經(jīng)痛大鼠脊髓NOS活性和NO產(chǎn)量的影響[J].中華麻醉學雜志,2004,24(3):203-205.

    [2] 揚建平,蔣豪,吳玨.大鼠蛛網(wǎng)膜下腔埋管并長期留置操作的改進[J].中華麻醉學雜志,1993,13(2):110-112.

    [3] Bennett GJ,Xie YK.A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man[J].Pain,1988,33(1):87-107.

    [4] Okuducu H,Onal SA.Is nitric oxide involved in the antinociceptive activity of tramadol Findings in a rat model of neuropathic pain[J].Agri,2005,17(4):31-40.

    [5] Onal A,Delen Y,Ulker S,et al.Agmatine attenuates neuropathic pain in rats:Possible mediation of nitric oxide and noradernergic activity in the brainstem and cerebellum[J].Life Sci,2003,73(4):413-428.

    [6] 熊克仁,馬同軍,郭平石,等.腦干及下丘腦內(nèi)一氧化氮合酶(NOS)陽性神經(jīng)元向海馬的投射[J].四川解剖學雜志,1998,6(2):69-71.

    [7] Wakasugi M,Hirota K,Roth H,et al.The effect of general anesthetics on excitatory and inhibitory synaptic transmission in area CA1 of the rat hippocampus in vitro[J].Anesth Analg,1999,88(3):676-680.

    [8] 陳華,張錦,孟凌新,等.鞘內(nèi)聯(lián)合應(yīng)用嗎啡和氯胺酮對神經(jīng)痛大鼠痛行為的影響[J].中國醫(yī)科大學學報,2005,34(4): 304-305.

    [9] Kielstein A,Tsikas D,Galloway GP,et al.Asymmetric dimethylarginine(ADMA)-A modulator of nociception in opiate tolerance and addiction[J].Nitric Oxide,2007,17(2):55-59.

    [10] 劉國凱,黃宇光,羅愛倫.小劑量氯胺酮用于術(shù)后鎮(zhèn)痛的研究及其臨床價值[J].中華麻醉學雜志,2003,23(3):238-240.

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