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    免疫測定血清脂蛋白(a)與臨床意義

    2012-01-24 23:31:02楊金新
    關(guān)鍵詞:洗滌液包被緩沖液

    楊金新

    免疫測定血清脂蛋白(a)與臨床意義

    楊金新

    目的 探討免疫測定血清脂蛋白(a)的方法與臨床意義。方法 對臨床120例冠心病疾病患者的血清Lp(a)行免疫測定及臨床意義。結(jié)果 通常以300 mg/L為分界。高于此水平者冠心病危險性明顯增高。結(jié)論 將Lp(a)值在300 mg/L以上定為病理性增高。Lp(a)可作為動脈硬化性心腦血管疾病的獨立危險因素指標。此外,Lp(a)增高還可見于各種急性時相反應(yīng)、腎病綜合征、糖尿病腎病、妊娠和服用生長激素等。

    血清脂;免疫測定;臨床意義

    血清脂蛋白(a)[Lp(a)]是一種大分子糖蛋白,由于其載脂蛋白[Apo(a)]中唾液酸含量很高,故也是一種急性期反應(yīng)物質(zhì),并在急性反應(yīng)中起重要作用[1]。Lp(a)是致冠心病的一個獨立危險因素;Lp(a)測定在早期診斷和預(yù)防糖尿病并發(fā)冠心病中有一定應(yīng)用價值

    1 資料與方法

    1.1 臨床資料 選取臨床2010年收治的患者120例,男85例,女35例,年齡40~80歲,冠心病52例,糖尿病腎病患者28例,脂肪肝22例,其他炎癥18例。均空腹采血2 d內(nèi)檢測,采取McAb ELISA測定法。

    1.2 試劑 包被緩沖液:0.02 mol/L碳酸鹽緩沖液,PH9.5;包被抗體與酶標抗體:用McAb混合液,以硫酸銨沉淀法制備抗tapo(a)-IgG,部分作包被用,部分以過碘酸鹽法交聯(lián)辣根過氧化物酶(RZ≥3)得酶標抗體,-20℃保存可穩(wěn)定數(shù)月;稀釋/封閉液:pH7.4緩沖液含磷酸鹽0.01 mol/L及氯化鈉0.15 mol/L,臨用前取適量緩沖液,加入適量小牛血清及吐溫-20;底物溶液0.lmol/L檸檬酸及0.2 mol/LNa2HPO4緩沖液,pH5.0,臨用前每100 m l緩沖液中加人鄰苯二胺0.1 g及30%H2O20.1 ml;終止液2 mol/LH2SO4;洗滌液0.15 mol/L NaCl,每升含吐溫一 20 0.5 m l。

    1.3 操作 包被,聚苯乙烯板,96孔。抗apo(a)-IgG用包被液稀釋成10以/m l濃度,每孔加150μl,4℃過夜。包被后的小孔用洗滌液洗3次,每次5 min。每孔中加入封閉液0.15 ml,37℃放置30 min后,再用洗滌液洗3次。校準血清1∶200稀釋起,用稀釋液倍比稀釋8管,作校準曲線用。血清標本1∶500稀釋,吸光度過低或過高的標本可稀釋成1∶100或1∶2000后復(fù)查。

    2 結(jié)果

    正常人Lp(a)數(shù)據(jù)呈明確偏態(tài)分布。80%的正常人<200 mg/L,個別人可高達l000 mg/L以上。通常以300 mg/L為分界線,高于此水平者表明冠心病危險性明顯增高。動脈粥樣硬化患者為31/52占59.6%,糖尿病腎病患者17/28占60%,腦血管病12/22占54%。

    3 討論

    Lp(a)主要在肝臟合成后分泌入血,血漿Lp(a)濃度主要取決于Lp(a)的合成速率,而與分解速率基本無關(guān);人群中Lp(a)濃度個體差異極大,濃度范圍可在0~1000 ml/L,這種差異最主要由ApoA基因位點決定。在個體中Lp(a)的血漿濃度相當穩(wěn)定,這主要由遺傳因素決定,幾乎不受年齡、性別、血脂、飲食等影響,但有報道認為絕經(jīng)后女性的Lp(a)濃度較絕經(jīng)前升高[2]。

    Lp(a)測定標準化研究極為困難,但臨床實驗室又迫切需要有一種可靠的參考血清(二級標準),使不同分析系統(tǒng)及世界各地實驗室測得的數(shù)據(jù)比較接近或有可比性。由于Lp(a)分子高度異構(gòu),要使參考血清組成與一切患者的標本一致是不可能的,但不能不提出一份參考血清作為國際標準化的基礎(chǔ),一般主張選用apo(a)分子大小適中、TG正常的血清。Lp(a)水平主要決定于遺傳因素,家族性高LP(a)與冠心病發(fā)病傾向相關(guān)。男、女之間與不同年齡組間無明顯差異,環(huán)境、飲食與藥物對Lp(a)水平的影響也不明顯,降膽固醇藥洛伐他汀不會使Lp(a)下降,吸煙也無影響,但嚴重肝病時Lp(a)水平下降[3],急性時期反應(yīng)(如急性心肌梗死、外科手術(shù)、急性風濕性關(guān)節(jié)炎)則上升?,F(xiàn)在將高LP(a)水平看作動脈粥樣硬化性疾病(心、腦血管病,周圍動脈硬化)的獨立危險因素,因為它與高血壓、吸煙、高 VLDL-C(高TC)、低HDL-C等因素無明顯相關(guān)。但LDL-C較高時LP(a)的危險性就更高。在動脈粥樣硬化病變形成中,LP(a)與 ApoB起協(xié)同作用。冠狀動脈搭橋手術(shù)者,高LP(a)易于引起血管再狹窄。因為Apo(a)與PMG在結(jié)構(gòu)上有同源性,Apo(a)故可致血凝塊(纖維蛋白)的溶解,促進動脈粥樣硬化形成。

    [1]趙永平.臨床血脂學(xué).長沙:湖南科學(xué)技術(shù)出版社,1997:64.

    [2]王克勤.脂蛋白與動脈粥樣硬化,北京:人民衛(wèi)生出版社,1995:180-183.

    [3]姜春義,呂國良.脂蛋白(a)檢測及其臨床意義心血管康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志,2000,9(2):87-88.

    163001 黑龍江省大慶油田總醫(yī)院

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