新輔助化療對局部進展期乳腺癌患者T淋巴細胞亞群及NK細胞免疫功能的影響

白海亞 馬秀芬 (甘肅省婦幼保健院乳腺科，蘭州730050)

近年來，乳腺癌發(fā)病率呈上升趨勢，約占女性惡性腫瘤的30%，占女性惡性腫瘤致死率的15%左右［1］。新輔助化療具有降低腫瘤分期、提高可手術率、減少細胞耐藥性等作用，目前已成為局部晚期乳腺癌的常規(guī)治療手段。然而，輔助化療在殺滅腫瘤細胞的同時，亦可以影響機體的免疫功能［2］。據(jù)報道，乳腺癌患者尤其是局部進展期乳腺癌和轉移性乳腺癌患者中T淋巴細胞數(shù)量明顯低于正常人組［3］，然而，T淋巴細胞數(shù)量依賴于乳腺癌患者腫瘤分期，輔助化療可以改變乳腺患者外周血中淋巴細胞亞群數(shù)量，Lissoni等［4］研究發(fā)現(xiàn)乳腺患者中降低的CD4+/CD8+比值在使用有效的輔助化療1周期后恢復正常。本研究以正常女性人外周血為對照，對54例局部進展期浸潤性導管癌患者新輔助化療前后外周血T淋巴細胞亞群及NK細胞進行測定，旨在了解乳腺癌患者新輔助化療前、后免疫功能變化情況，并觀察其與新輔助化療療效之間的關系，為臨床上判斷患者免疫水平、指導臨床治療提供參考?，F(xiàn)分析如下：

1 資料與方法

1.1臨床資料 實驗組為2010年1月至2011年1月在我院進行首次治療的54例女性乳腺癌患者，AJCC腫瘤分期為Ⅱb期(僅T3N0MO)和Ⅲ期(不包括N3)，年齡40～70歲，平均年齡51歲，所有患者住院前沒有接受過免疫抑制藥物及診斷過病毒性疾病，均無化療禁忌證，化療前血象、肝腎功能正常，其中有4例患者合并冠心病，但心功能正常，無其他系統(tǒng)疾病。化療方案采用CEF方案：表阿霉素(EPI)80 mg/m2，第1天，靜脈注射;環(huán)磷酰胺(CTX)500 mg/m2，第1 天，靜脈滴注;5-氟尿嘧啶(5-Fu)500 mg/m2，第1天和第8天，靜脈滴注，3周為1個周期，共3個療程。新輔助化療前經穿刺病理證實均為乳腺浸潤性導管癌，對照組40例為體檢健康女性，年齡38～65歲，中位年齡50歲。新輔助化療前后采用臨床查體、乳腺B超和(或)乳腺鉬靶等方法測量腫瘤最大徑和垂直徑，同一患者在新輔助化療開始及第3周期末用以上方法監(jiān)測，主要以臨床查體及乳腺超聲為主。每周期化療前常規(guī)檢查血常規(guī)、肝、腎功能和心電圖，化療后每周查血常規(guī)及評價全身狀況。

1.2試劑和儀器 單克隆抗體抗 CD3FITC、抗CD4PE、抗CD8PE及CD16、CD56PE，均由美國Becton Dickinson 公司生產，CD3+、CD4+、CD8+、CD16+CD56+分別代表 T、TH、TS、NK細胞。紅細胞裂解液由BD公司生產。FASCCan流式細胞儀為美國Becton Dickinson公司產品。

1.3檢測方法 對照組及實驗組均采清晨空腹血，使用流式細胞術檢測病例組化療前及新輔助化療3個療程后和對照組T淋巴細胞亞群及NK細胞。

1.4療效評價標準［5］采用WHO可測量實體瘤療效統(tǒng)一標準：CR：臨床檢查腫瘤完全消失;PR：腫瘤最大直徑與其最大垂直徑的乘積減少＞50%以上;SD：腫瘤最大直徑與其最大垂直徑的乘積減少＜50%或增加＜25%;PD：腫瘤最大直徑與其最大垂直徑的乘積增加＞25%及其他轉移征象。

1.5數(shù)據(jù)處理 所有數(shù)據(jù)均采用SAS9.2統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析和比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

表1 病例組新輔助化療前后T淋巴細胞亞群及NK細胞結果比較(±s)Tab．1 The contrast of T lymphocyte subsets and NK cells between pre or post-chemotherapy groups(±s)

表1 病例組新輔助化療前后T淋巴細胞亞群及NK細胞結果比較(±s)Tab．1 The contrast of T lymphocyte subsets and NK cells between pre or post-chemotherapy groups(±s)

Note：Between control group and pre or post-chemotherapy group：1)P＜0.01，2)P＜0.05.

Groups Case CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+ CD16+56+Pre-chemotherapy 54 64.35±6.20 28.15±5.471) 32.56±6.411) 1.04±0.222) 15.23±4.462)Post-chemotherapy 54 65.54±8.38 30.24±6.371) 33.54±6.831) 1.08±0.442) 16.22±3.342)Control group 40 65.88±5.64 35.45±4.23 24.36±4.12 1.34±0.23 19.42±5.27

表2 病例組新輔助化療前后T淋巴細胞亞群及NK細胞結果比較(±s)Tab．2 The contrast of T lymphocyte subsets and NK cells between pre or post-chemotherapy groups(±s)

表2 病例組新輔助化療前后T淋巴細胞亞群及NK細胞結果比較(±s)Tab．2 The contrast of T lymphocyte subsets and NK cells between pre or post-chemotherapy groups(±s)

Note：Between control group and pre or post-chemotherapy group：1)P＜0.01，2)P＜0.05;Between pre or post-chemotherapy groups：3)P＜0.05.

Groups N CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+ CD16+56+Response group 38 Pre-chemotherapy 65.35±7.24 29.35±4.471) 33.32±5.311) 1.08±0.322) 16.18±4.462)Post-chemotherapy 69.46±6.873) 34.35±5.473) 26.12±4.453) 1.55±0.673) 20.45±2.453)Non-response group 16 Pre-chemotherapy 65.44±7.38 28.59±4.561) 32.34±5.121) 0.98±0.562) 15.45±3.412)Post-chemotherapy 61.37±8.792)3) 24.31±5.111)3) 37.54±4.831)3) 0.76±0.211)3) 12.27±2.381)3)Control group 40 65.88±5.64 35.45±4.23 24.36±4.12 1.34±0.23 19.42±5.27

病例組中CD4+、CD4+/CD8+、NK細胞數(shù)量在化療前、化療后均低于對照組(P＜0.05)，CD8+T淋巴細胞較對照組明顯升高(P＜0.01)，見表1。

病例組中54例乳腺癌患者，其中38例為化療有效的患者(CR 7例，PR 31例)新輔助化療后較化療前CD3+、CD4+T淋巴細胞及NK細胞均升高(P＜0.05)，其中 CD4+/CD8+顯著升高(P＜0.01)。16例化療無效的患者(SD 14例，PD 2例)輔助化療后CD3+T淋巴細胞、CD4+T淋巴細胞、CD4+/CD8+及NK細胞較治療前下降(P＜0.05)，與對照組比較各項指標均有顯著性差異(P＜0.05，見表2)。

3 討論

現(xiàn)代免疫學表明，腫瘤的發(fā)生發(fā)展與腫瘤宿主的免疫狀態(tài)有關，腫瘤免疫中起主要作用的是細胞免疫，在細胞免疫中，各種細胞亞群及其產物相互作用，相互調節(jié)，維持正常的免疫應答能力。

機體的免疫由T淋巴細胞介導，T淋巴細胞在腫瘤免疫中起調控作用，按照不同的分類標準，T細胞可以分為不同亞群，其中根據(jù)表面標志和分化抗原的不同，可以將T細胞分為CD4+T淋巴細胞和CD8+T淋巴細胞，而CD3 T淋巴細胞代表總T淋巴細胞。CD4+T細胞可以分泌大量細胞因子輔助CD8+T細胞及NK細胞殺傷腫瘤，而且CD4+T淋巴細胞在腫瘤免疫中具有免疫記憶和直接殺傷腫瘤細胞的功能［6］，CD8+抑制性T淋巴細胞，具有抑制體液和細胞免疫的功能。NK細胞是機體天然免疫的主要承擔者，具有細胞毒性效應，可以直接殺傷腫瘤細胞、病毒感染細胞及移植的組織細胞和進行免疫調節(jié)，但對正常組織無殺傷作用，所以NK細胞是免疫應答中最早發(fā)揮作用的效應細胞，是人體抗腫瘤和抗感染的第一道防線。人類NK細胞為CD16和CD56陽性，少部分NK細胞可以為CD8陽性。正常情況下，CD4+T細胞與CD8+T細胞所代表的兩大類最主要的T細胞亞群處于一種動態(tài)平衡狀態(tài)，CD4+/CD8+比值基本恒定在1.5 ～2.0 之間［7］，二者互相協(xié)調，相互制約，共同參與對機體免疫應答的調節(jié)作用，只有在比值正常時，才能發(fā)揮抗腫瘤作用［8］。

惡性腫瘤患者因T淋巴細胞數(shù)量減少、功能不全、CD4+/CD8+比例失調，從而出現(xiàn)細胞免疫功能低下［9］。本次研究中，54例乳腺癌患者與40例正常女性的T淋巴細胞比較，CD3+、CD4+T淋巴細胞及NK細胞較正常組明顯降低，而CD8+細胞升高，與國內報道基本一致［10］，提示本組中乳腺癌患者細胞免疫功能發(fā)生紊亂，可能與惡性腫瘤在發(fā)生發(fā)展中分泌大量免疫抑制因子有關。

有文獻報道，惡性腫瘤患者經過有效的治療后，其免疫功能可能恢復［11］。本組中54例乳腺癌患者治療前免疫功能較正常對照組低，經過3周期CEF化療后，化療有效者38例，無效者16例，其中化療有效的38例患者經新輔助化療治療后，CD3+、CD4+T淋巴細胞及NK細胞較治療前明顯提高，而CD8+細胞較治療前降低CD4+/CD8+比值較治療前升高，提示有效的治療使腫瘤負荷減少，腫瘤分泌的免疫抑制因子數(shù)量減少，細胞免疫功能有所恢復，而16例化療無效的患者，治療后CD3+、CD4+T淋巴細胞及NK細胞較前明顯下降，CD8+細胞較治療前升高，提示本組中乳腺癌患者免疫功能低下，可能原因是對化療方案藥物有耐藥，腫瘤惡性程度高，腫瘤細胞數(shù)量增加產生免疫抑制因子抑制了CD4+T淋巴細胞及NK細胞形成，最終導致患者細胞免疫功能下降。

本研究表明局部進展期乳腺癌患者存在免疫功能低下，有效的新輔助化療可以使患者的免疫功能有所恢復。因此，筆者認為定期監(jiān)測乳腺癌患者的免疫功能，對于了解患者免疫水平及指導臨床治療有一定價值。

1 Jemal A，Siegel R，Xu J et al．Cancer Statistics［J］.CA Cancer J Clin，2010;60：277-300.

2 沈鎮(zhèn)宙，邵志敏.現(xiàn)代乳腺腫瘤學進展［M］.上海：上?？茖W技術文獻出版社，2002：181-184.

3 McCluskey D R，Roy A D，Abram W P.T lymphocyte subsets inthe peripheral blood of patients with benign and malignant breast disease［J］.Br J Cancer，1983;47(2)：307-309.

4 Lissoni P，Tancini G，Archili C et al.Changes in T lymphocyte subsets after single dose epirubicin［J］.Eur J Cancer，1990;26(6)：767-768.

5 徐兵河.乳腺癌［M］.北京：北京大學醫(yī)學出版社，2005：174-176.

6 黃 輝，俞 紅，林云璐.CD4+T細胞的抗瘤作用［J］.國外醫(yī)學·免疫學分冊，2000;23(1)：51-53.

7 何球藻，吳厚生，曹雪濤.細胞與分子免疫學［M］.上海：上?？茖W技術文獻出版社，1997：146-149.

8 郎江明主編.臨床免疫診斷學［M］.廣州：廣東科技出版社，2003：365-368.

9 Studnicka M，Wirnsberger R，Neumann M et al．Peripheral blood lymphocyte subsets and survival in small-cell lung cancer［J］.Chest，1994;105(6)：1673-1676.

10 展富琴，馮 萍.惡性腫瘤患者化療前后免疫功能的變化［J］.中國血液流變學雜志，2007;17(1)：137-139.

11 Hemberg M，Muhonen T，Pyrhonen S.Can the CD4+/CD8+ratio predict the outcome of interferon-alpha therapy for renal cell carcinoma［J］.Ann Oncol，1997;8(1)：71-75.