抗棕櫚腐爛病菌的殺菌劑和植物浸提物篩選

佘德松，馮福娟，陳志生

(麗水職業(yè)技術(shù)學(xué)院，浙江麗水 323000)

宛氏擬青霉Paecilomyces varioti Bainier屬半知菌亞門，絲孢綱，叢梗孢目，擬青霉屬，是由李文彪［1］首次報道的引起棕櫚樹 Trachycarpus fortunei腐爛病的一種真菌。為尋找防治由宛氏擬青霉引起的棕櫚科園林植物腐爛病的有效藥劑，探尋無污染、低毒、低殘留的植物性殺菌劑，開展了本次藥劑試驗和抑菌植物物質(zhì)的篩選。

1 材料與方法

1.1 材料 供試病原菌從采自浙江平陽金桂園林工程有限公司苗圃地的加拿利海棗Phoenix canariensis心腐病的受害心葉分離純化獲得。

供試殺菌劑有25%咪鮮胺水乳劑(EW)，2 000，2 500，3 000倍液，揚(yáng)州市蘇靈農(nóng)藥化工有限公司;50%多菌靈可濕性粉劑(WP)，500，800，1 000倍液，江蘇東進(jìn)農(nóng)藥化工有限公司;80%代森錳鋅WP，800，1 000，1 200 倍液，西安近代農(nóng)藥科技股份有限公司;12.5%腈菌唑乳油(EC)，4 000，5 000，6 000倍液，鎮(zhèn)江農(nóng)藥廠有限公司;20%嘧霉胺 WP，600，800，1 000倍液，連云港市金囤農(nóng)化有限公司。

供試植物有構(gòu)樹Broussonetia papyrifera、云南黃馨 Jasminum mesnyi、雪松 Cedrus deodara、杜鵑Rhododendron simsli、馬尾松 Pinus massoniana、玉蘭Magnolia denudate、火炬松 Pinus taeda、南天竹Nandina domestica、八角金盤Fatsia japonica、夾竹桃Nerium oleander、灑金葉珊瑚 Aucuba japonica var.variegata、側(cè)柏 Platycladus orientalis、小檗 Berberis thunbergii的根，香樟 Cinnamomum camphora、火炬松、香椿 Toona sinensis、柏木 Cupressus funebris、銀杏Ginkgo biloba的樹皮，無刺枸骨Ilex Corunta var fortunei、香樟的果實(采自麗水職業(yè)技術(shù)學(xué)院校園)，白花蒿Artemisia lactiflora的全草、草決明Catsia tora的果實、異葉茴芹Pimpinella div^ersifolia的全草及根、千里光Senecio scandens的地上部分、苦參Sophora flavescens的根、白花前胡 Peucedanum praeruptorum的根、何首烏Polygonum multiflorum的藤莖和根、大血藤Sargentodoxa cuneata的藤莖、元胡 Corydalis turtschaninovii的塊莖、半夏Rhizoma pinelliae的根等(藥材購買于麗水老百姓大藥房)。

1.2 殺菌劑抑菌試驗 采用濾紙片法［2］。將顯微鏡高倍鏡下每個視野含宛氏擬青霉分生孢子30～40個的孢子懸浮液1 mL倒入10 mL的PDA培養(yǎng)基，立即搖勻，制成平板。再將直徑1 cm的濾紙片在配好的藥液中浸泡1 min取出，放入平板培養(yǎng)基上，每皿5片。將處理好的培養(yǎng)皿倒置于28℃霉菌箱中培養(yǎng)48 h。測量抑菌圈直徑的大小，以抑菌圈2個垂直直徑的平均值作為抑菌圈大小的指標(biāo)。

懸滴法［3］:將宛氏擬青霉菌制成無菌水及各種藥劑濃度的孢子懸浮液，以顯微鏡高倍鏡下觀察每個視野有30～40個孢子為度。在凹玻片的凹陷處周圍涂上凡士林，在蓋玻片上加一滴孢子懸浮液，將蓋玻片翻轉(zhuǎn)蓋在凹玻片的凹陷處。每種處理重復(fù)5次。將處理好的凹玻片放在28℃霉菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，統(tǒng)計孢子萌發(fā)情況。

1.3 抗宛氏擬青霉植物浸提物的篩選

1.3.1 植物浸提物的制備 用無水乙醇與水2種液體進(jìn)行浸提。將材料洗凈，果實搗碎，植物根、皮用整枝剪剪成片狀或小段。將處理好的每種材料分為2份，分別置于錐形瓶內(nèi)，一份材料加入水，一份加入無水乙醇。水提的先將錐形瓶放入100℃水浴2 h，再放置過夜，第2天將植物材料濾出，剩下的浸提液用水浴加熱至浸膏狀。用無水乙醇提取的只需靜置過夜，在第2天濾出植物材料后用水浴加熱至浸膏狀［4］。

1.3.2 抑菌試驗 將顯微鏡高倍鏡下每個視野含宛氏擬青霉分生孢子30～40個的孢子懸浮液1 mL均勻展布于平板培養(yǎng)基上，用接種針鉤取浸膏狀的浸提物5點(diǎn)(呈梅花狀)接入培養(yǎng)基，放入28℃培養(yǎng)箱內(nèi)倒置培養(yǎng)。每種浸提物設(shè)置5個培養(yǎng)皿，用無菌水作對照。3 d后觀察，測量抑菌圈的大小。

1.3.3 南天竹根浸提物抑菌作用測定 將宛氏擬青霉菌落置于含有南天竹根浸提物的培養(yǎng)基上，觀察病菌生長情況。將不能在培養(yǎng)基上生長的菌塊移接到無浸提液的正常培養(yǎng)基上，繼續(xù)觀察病菌生長情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 殺菌劑抑菌試驗的結(jié)果 用濾紙片法測定藥劑對宛氏擬青霉的菌絲抑制結(jié)果見表1。

從表1看出:5種藥劑中對宛氏擬青霉的菌絲生長都有較好的抑制效果。12.5%腈菌唑EC效果最好，EC50為0.1819 mg/L;其次為25%咪鮮胺EW，EC50為0.9281 mg/L;第3為20%嘧霉胺WP，EC50為2.6230 mg/L;第4為50%多菌靈 WP，EC50為4.0569 mg/L，最差為80%代森錳鋅WP，EC50為6.6600 mg/L。

用懸滴法測定5種農(nóng)藥對孢子萌發(fā)的抑制結(jié)果見表1。

從表1也可以看出，這5種藥劑對宛氏擬青霉孢子的萌發(fā)都有一定的抑制效果。抑制孢子能力由強(qiáng)到弱依次為12.5%腈菌唑EC、25%咪鮮胺EW、50%多菌靈WP、20%嘧霉胺WP、80%代森錳鋅WP，其 EC50依次為 0.540 6，0.910 1，1.354 2，3.193 1，5.950 2 mg/L。

2.2 抗宛氏擬青霉植物浸提物篩選結(jié)果 抑菌試驗表明:構(gòu)樹、云南黃馨、雪松、杜鵑、馬尾松、玉蘭、火炬松、八角金盤、夾竹桃、灑金葉珊瑚、側(cè)柏的根，香樟、火炬松、香椿、柏木、銀杏的樹皮，香樟、無刺枸骨的果實，白花蒿、百路通、千里光、前胡、葉交藤、紅藤、元胡、何首烏、半夏的浸提物的抑菌圈直徑與對照組的無菌水抑菌圈的大小沒有明顯區(qū)別，均為0，說明這些植物材料的醇提物和水提物均對宛氏擬青霉沒有抑制作用。南天竹、小檗根的醇提物和水提物、苦參的醇提物、決明子的水提物對宛氏擬青霉具有較明顯的抑菌作用，抑菌圈直徑分別為1.93和1.53，1.63 和 1.77，1.02，1.90 cm。

表1 5種殺菌劑對擬青霉孢子萌發(fā)的毒力測定結(jié)果

2.3 南天竹根浸提物的抑菌作用 接種于加有南天竹根浸提物的培養(yǎng)基上的宛氏擬青霉菌落一直到第9天仍未見擴(kuò)大，而對照3 d后整個培養(yǎng)基長滿菌落。

把在南天竹根浸提物培養(yǎng)基上不能正常生長的菌落轉(zhuǎn)接到正常的培養(yǎng)基上后，仍能正常生長，這表明南天竹根浸提物能有效抑制宛氏擬青霉的正常生長，但不能殺死。

3 小結(jié)與討論

5種殺菌劑抑制宛氏擬青霉菌落生長和孢子萌發(fā)的試驗均表明:12.5%腈菌唑EC、25%咪鮮胺EW、20%嘧霉胺WP、50%多菌靈WP、80%代森錳鋅WP均有明顯的抑制作用。抑制菌絲生長和抑制孢子萌發(fā)的EC50最低的是12.5%腈菌唑EC，分別為0.181 9，0.540 6 mg/L，最高的是80%代森錳鋅WP，分別為6.660 0，5.950 2 mg/L。因此，生產(chǎn)上5種殺菌劑都可以作為防治由宛氏擬青霉引起的棕櫚科植物腐爛病的防治藥劑。

在所試驗的31種植物及中藥材中只有苦參的醇提物、小檗根及南天竹根的醇提和水提物、決明子的水提物對宛氏擬青霉有明顯的抑制作用，其余的植物材料沒有抑菌效果。南天竹根浸提物僅具有抑制作用，并不能殺死該菌?？鄥?、小檗根、南天竹根、決明子所含的抑菌有效成分有待進(jìn)一步探明。

［1］ 李文彪，葉櫟，周寧一．棕櫚腐爛病的研究［J］．浙江林學(xué)院學(xué)報，1988，5(1):8 －15．

［2］ 丁愛云．植物保護(hù)學(xué)實驗［M］．北京:高等教育出版社，2004:83．

［3］ 方中達(dá)．植病研究方法［M］．3版．北京:農(nóng)業(yè)出版社，1998:152．

［4］ 蘇學(xué)友，李疆，師光祿，等．核桃青皮提取物對6種植物病原真菌的抑菌活性研究［J］．北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報，2008，23(1):42－44．