度冷丁溶液對成年大鼠臀肌攣縮癥的影響

吳 興，韓永臺，趙建勇，陳廣先，于從海，杜志國，王華柱，史繼軍

河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院骨五科（滄州 061000）

臀肌攣縮癥（gluteal muscle contracture，GMC）又稱臀肌纖維化，是由多種原因引起的臀肌及筋膜纖維攣縮變性，導(dǎo)致髖關(guān)節(jié)功能受限，表現(xiàn)出特有的步態(tài)、體征、髖關(guān)節(jié)功能障礙，特別是髖內(nèi)收困難和髖外展畸形的臨床綜合征[1]。確切的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。苯甲醇做青霉素溶媒是最危險的因素[2]，近年來隨著對苯甲醇副作用的認(rèn)識，臨床上已棄用苯甲醇作為青霉素的溶媒，減少了臀肌攣縮癥患者的數(shù)量。但近些年來一些有長期度冷丁注射史的臀肌攣縮癥患者逐漸增多。為研究長期肌肉注射度冷丁對臀肌纖維化的影響作用，進(jìn)行了此項(xiàng)動物實(shí)驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 材料 健康成年Wistar大鼠90只，8周齡，體重（200±20）g，由河北醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供。度冷丁購自沈陽第一制藥廠，規(guī)格為2 mL：100 mg。苯甲醇注射液購自河南華利藥業(yè)有限責(zé)任公司，規(guī)格為2 mL：40 mg。生理鹽水購自石家莊制藥廠，規(guī)格為250 mL/袋。青霉素購自石家莊制藥廠，規(guī)格為160萬U/瓶，批號：X1110402。

1.2 分組及模型制備

大鼠用標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)1 周，按照機(jī)械抽樣法隨即分為3組：A組為陽性對照組30只，注射苯甲醇青霉素溶液8周；B組為陰性對照組30只，注射生理鹽水青霉素溶液8周；C組為實(shí)驗(yàn)組30只，注射度冷丁溶液8 周。3 組均再飼養(yǎng)2 周后處死。均選用左臀部注射相應(yīng)藥物，每日注射2 次，每次0.1 mL，中間間隔6 h以上。

1.3 觀察指標(biāo) 每日觀察大鼠步態(tài)變化，下肢畸形，髖關(guān)節(jié)被動活動時彈響情況。動物處死后取注射側(cè)臀肌觀察肌肉顏色，攣縮帶、出血點(diǎn)等，觸摸肌肉彈性變化。

顯微鏡下仔細(xì)將臀部肌肉完整取出，剔除表面的軟組織，立即置入福爾馬林固定液中固定，梯度乙醇脫水：80%、90%、100%、100%乙醇各1 h，二甲苯透明2 h，浸蠟2 h，石蠟包埋。將包埋好的組織塊在切片機(jī)上連續(xù)切片，厚度為4 μm，從每塊標(biāo)本中央?yún)^(qū)的連續(xù)切片中選取1張裱于蛋白甘油處理的載玻片上，然后在60 ℃溫箱內(nèi)干燥24 h。將切片置于二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ脫蠟各15 min，浸入蘇木素3 min，自來水沖洗。用1%鹽酸分色，浸入伊紅2 min，自來水沖洗。梯度乙醇脫水：70%乙醇3 min、80%乙醇5 min、90%乙醇5 min、100%乙醇Ⅰ15 min、100%乙醇Ⅱ15 min，二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ透明各15 min。中性樹膠封片后MASSON 染色。顯微鏡下觀察肌肉纖維排列情況，膠原纖維數(shù)量，結(jié)締組織數(shù)量，細(xì)胞核大小，中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞數(shù)量等。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 多組間計量資料用行×列χ2比較，如組間有差異（P ＜0.05），進(jìn)一步用bonferoni法進(jìn)行多重比較，P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 步態(tài)觀察 A 組注射8 周后，21 只跛行十分嚴(yán)重；B 組在第7 周時1 只有步態(tài)異常表現(xiàn)，行走稍跛行，停止注射2 周后恢復(fù)。其余注射期間未發(fā)現(xiàn)步態(tài)異常。C 組在注射8 周后11 只步態(tài)異常，停止注射后未見明顯恢復(fù)。3組間比較P均小于0.05，三組間比較均有統(tǒng)計學(xué)差異。

2.2 臀肌病理學(xué)變化

2.2.1 肉眼觀察 A組8周后21只大鼠臀肌色澤蒼白，可見攣縮帶，累及臀大肌全層，肌肉無彈性，呈腱樣組織，髖關(guān)節(jié)活動受限（圖1的1、2）。B組8周后可見肌肉顏色紅潤，未見攣縮帶，肌肉彈性好。1只發(fā)現(xiàn)纖維攣縮束帶。C組8周后11只大鼠臀肌色澤蒼白，肌肉顏色紅潤，部分可見攣縮帶，未累及臀大肌全層，肌肉彈性差，停止注射后未見恢復(fù)（圖1 的3、4）。3 組間比較P 均小于0.05，3 組間比較均有統(tǒng)計學(xué)差異。

圖1 各組大鼠臀肌改變?nèi)庋厶攸c(diǎn)

2.2.2 光鏡觀察 A組8周后21只可見肌纖維排列紊亂卷曲，肌細(xì)胞明顯萎縮，胞核增多并延肌纖維呈串珠樣排列，肌纖維間隙明顯增高，較多中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞浸潤，大量膠原纖維增生，纖維化區(qū)域可見大片致密膠原纖維結(jié)締組織，粗大膠原束內(nèi)可見一些細(xì)長梭形的纖維細(xì)胞，與膠原纖維平行走向，同肌腱結(jié)構(gòu)相似（圖2 的A1、A2）。B 組8 周后可見肌纖維排列整齊，核大小適中，染色質(zhì)著色均勻；可見中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞浸潤。C組8周后11只肌纖維排列紊亂，胞漿著色較淡，核固縮，肌纖維間間隙明顯增寬，中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞浸潤，肌纖維間及肌束間可見膠原纖維。其它肌纖維正常（圖2的B1、B2）。

3 討論

圖2 各組大鼠臀肌改變的鏡下特點(diǎn)

大鼠臀肌注射苯甲醇青霉素溶液注射8周后大部分大鼠出現(xiàn)GMC的癥狀，停止注射2周后癥狀無改善。大體觀察可見肌肉顏色蒼白，彈性差，膠原纖維增生，纖維化區(qū)域可見致密膠原纖維結(jié)締組織。光鏡下可見粗大膠原束內(nèi)可見一些細(xì)長梭形的纖維細(xì)胞，與膠原纖維平行走向，同肌腱結(jié)構(gòu)相似。研究發(fā)現(xiàn)，大鼠臀肌注射苯甲醇青霉素溶液8 周可導(dǎo)致GMC，在停止注射后，GMC 不可恢復(fù)。大鼠臀肌注射生理鹽水青霉素溶液2 個月，并未在全部鼠制作出GMC模型。只有1只大鼠出現(xiàn)了行走跛行，大體觀察臀肌可見攣縮帶，肌肉彈性稍差，髖關(guān)節(jié)活動無明顯差異，光鏡下可見肌纖維排列較規(guī)則，胞漿著色尚均勻，肌纖維間隙增寬，肌纖維間及肌束間均可見綠染膠原纖維，可見頻繁肌肉注射生理鹽水青霉素溶液是GMC 的一個影響因素。但對影響因素的大小，本實(shí)驗(yàn)因?qū)嶒?yàn)時間較短，未得出結(jié)論。大鼠在注射度冷丁溶液8周后11只步態(tài)異常，停止注射后未見明顯恢復(fù)。大體觀察臀肌色澤蒼白，肌肉顏色紅潤，部分可見攣縮帶，未累及臀大肌全層，肌肉彈性差。光鏡下可見肌纖維排列紊亂，胞漿著色較淡，核固縮，肌纖維間間隙明顯增寬，中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞浸潤，肌纖維間及肌束間可見膠原纖維。其它肌纖維正常。研究發(fā)現(xiàn)，臀肌注射度冷丁溶液8 周可導(dǎo)致大鼠GMC，在停止注射后，GMC 不可恢復(fù)。通過幾種藥物對大鼠臀肌影響作用的比較，認(rèn)為苯甲醇青霉素注射對大鼠GMC 的影響作用大于度冷丁和生理鹽水青霉素注射，度冷丁注射對大鼠GMC的影響作用大于生理鹽水青霉素注射。

在本實(shí)驗(yàn)中，注射苯甲醇青霉素溶液造成的患GMC大鼠最多，生理鹽水青霉素溶液對大鼠GMC的影響最為輕微。苯甲醇作為溶媒可以在注射時起到止痛的作用，因此在上個世紀(jì)八十年代應(yīng)用較多，隨后長期注射苯甲醇溶液可以導(dǎo)致兒童及成人GMC被發(fā)現(xiàn)，國內(nèi)諸多學(xué)者對此做過相應(yīng)的臨床及實(shí)驗(yàn)室研究[3]。因此苯甲醇溶液現(xiàn)在已基本不再作為溶媒使用[4]。本實(shí)驗(yàn)再次證明了苯甲醇作為溶媒肌注引起GMC的危險性，所以在臨床上應(yīng)避免使用苯甲醇溶液作為溶媒使用。目前普遍使用的生理鹽水溶媒有無導(dǎo)致GMC的作用，在本實(shí)驗(yàn)中未得出陽性結(jié)果，有待于進(jìn)一步研究。近年來有長期度冷丁注射史的成人患者逐漸增多。長期臀肌注射度冷丁是不是GMC 的影響因素，國內(nèi)外未查及此方面相關(guān)報道。通過本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，長期注射度冷丁溶液有可能是GMC的一個危險致病因素。因此在臨床工作中，遇到GMC的患者應(yīng)詢問有無長期度冷丁注射史，并告知需長期臀肌注射杜冷丁溶液的患者，長期臀肌注射杜冷丁溶液有GMC的風(fēng)險。

總之，長期肌肉注射度冷丁溶液有可能是GMC的一個危險致病因素，臨床上尚應(yīng)避免使用苯甲醇溶液作為溶媒使用。

[1]盧浩浩,劉國輝,楊述華,等.臀肌攣縮癥病因及診斷的研究進(jìn)展[J]. 中國矯形外科雜志,2007,15(3):207-209.

[2]唐學(xué)陽,劉利君,辛文瓊,等.取消苯甲醇肌注對預(yù)防臀肌攣縮癥的初步評價[J]. 現(xiàn)代預(yù)防雜志,2009,36(19) :3789-3791.

[3]李群偉,景學(xué)安,吳多文,等.青霉素溶液對大鼠臀肌纖維化影響的實(shí)驗(yàn)觀察[J]. 泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2002,23(4):334-336.

[4]王劍,孔繁增,蘇峰,等.臀肌攣縮發(fā)病聚集區(qū)人群干預(yù)效果的前瞻性觀察[J]. 河北北方學(xué)院學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2007,24(2):5-8.