IGF-1R、EGFR、VEGF、HER2在胃癌組織中的表達(dá)及與其預(yù)后的關(guān)系

王 進(jìn) 曾 祥 胡偉民

胃癌是常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率占所有腫瘤的第4位，而死亡率卻占第2位[1]。根據(jù)中國國家癌癥預(yù)防控制辦公室的估計(jì)，2005年我國胃癌新發(fā)病例數(shù)約為376 000例，死亡約為295 000例[2]。50%～80%的患者首次就診時(shí)，已經(jīng)屬于Ⅲ、Ⅳ期患者，失去了最佳的手術(shù)時(shí)機(jī)。胃癌5年生存率較低，影響胃癌預(yù)后的臨床病理因素很多，如患者年齡、性別、腫瘤發(fā)生部位、手術(shù)方式、腫瘤病理類型、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、分期、腫瘤大小、術(shù)后化療等。目前公認(rèn)TNM分期是影響胃癌預(yù)后重要的因素，但是具有相同TNM分期的胃癌，其預(yù)后也不盡相同，除TNM分期外，可能還有其它因素影響胃癌的預(yù)后。本研究通過回顧性分析，摘錄醫(yī)院病例及相關(guān)檢查記錄、隨訪記錄，選取胃癌患者的石蠟切片，經(jīng)免疫組化處理，統(tǒng)計(jì)IGF-1R、EGFR、HER2、VEGF陽性表達(dá)率，采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件探討影響胃癌的預(yù)后因素，旨在為制定胃癌的個(gè)體化治療方案提供可靠依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集我院2003年1月至2005年12月手術(shù)切除的胃癌組織蠟塊，共108例。其中男性77例，女性31例，男：女比例為2.5∶1，年齡18～88歲，平均年齡(57±10.8)歲。其中胃竇癌61例(56%)，胃體癌12例(12%)，胃底賁門癌35例(32%)。大體分型：BorrmannⅠ型10例(9%)，Ⅱ型35例(33%)，Ⅲ型43例(40%)，Ⅳ型20例(18%)。108例患者低分化腺癌71例(65%)，中分化腺癌23例(22%)，高分化腺癌14例(13%)。術(shù)后病理分期：Ⅰ期4例(4%)，Ⅱ期59例(55%)，Ⅲ期36例(33%)，Ⅳ期9例(8%)。

1.2 治療方法

本組108例胃癌患者行胃癌根治術(shù)99例，姑息性手術(shù)9例，術(shù)后均輔助化療，方案為FOLFOX4(奧沙利鉑 85 mg/m2，靜滴，d1；5-Fu 3000 mg/m2·d，泵滴，48 h；CF 200 mg/m2，靜滴，d1、2)。化療療程均在6個(gè)周期以上(平均7.8個(gè)周期)。

1.3 主要材料和試劑

IGF1Rα亞單位試劑盒 ab78405，Ab-1購于德國lab Vison 公司；EGFR pharmDX kit GT209302 購于丹麥 DAKO公司，a HercepTest kit GA048502 購于丹麥 DAKO公司；VEGF M727329 購于丹麥 DAKO公司；DAB Liquid System K346 購于丹麥 DAKO公司；羊抗鼠IgGCodeK 4 000 購于丹麥 DAKO公司。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

常規(guī)石蠟標(biāo)本切片，厚4 μm。嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行免疫組化操作，IGF-1R、EGFR、VEGF與HER2均以細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)均勻一致的棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。

1.5 隨訪

隨訪方式以查閱病例、電話、信件隨訪相結(jié)合方式進(jìn)行。隨訪截止日期為2010年12月31日。3個(gè)月隨訪1次，連續(xù)隨訪2次未能聯(lián)系到則記為失訪。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

IGF-1R、EGFR、VEGF、HER2的相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析研究；臨床病理因素及IGF-1R、EGFR、VEGF、HER2采用Kaplan-Meier法描繪其生存率曲線圖，生存曲線采用Log-rank檢驗(yàn)評(píng)價(jià)其統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。應(yīng)用Cox危險(xiǎn)率比例模型，評(píng)價(jià)IGF-1R、EGFR、VEGF、HER2蛋白表達(dá)情況及其對(duì)胃癌患者預(yù)后的意義。

2 結(jié)果

2.1 IGF-1R、EGFR、VEGF、 HER2在胃癌組織中的表達(dá)

108例胃癌組織中IGF-1R陽性67例(62%)，EGFR陽性55例(51%)，VEGF陽性46例(44%)，HER2陽性22例(20%)，聯(lián)合表達(dá)情況見表1。

2.2 IGF-1R、EGFR、HER2與VEGF表達(dá)的相關(guān)性

在胃癌組織中IGF-1R表達(dá)與EGFR、VEGF、HER2表達(dá)均呈正相關(guān)性，R>0，P<0.05。相關(guān)性由強(qiáng)到弱順序?yàn)椋篒GF-1R與HER2；IGF-1R與EGFR；IGF-1R與VEGF，其中以IGF-1R與HER2相關(guān)性最強(qiáng)，見表1。

表1 IGF-1R、EGFR、VEGF、HER2聯(lián)和表達(dá)及相關(guān)性(例，%)

2.3 IGF-1R對(duì)胃癌患者生存期影響

108例胃癌組織中IGF-1R表達(dá)陽性66例(61.11%)，陰性42例(38.89%)，其中位生存時(shí)間分別為19.1和24.7個(gè)月，兩者比較有顯著性差異，P=0.02，見圖1。

圖1 IGF-1R表達(dá)對(duì)胃癌患者生存期的影響

2.4 EGFR對(duì)胃癌患者生存期影響

108例胃癌組織中EGFR表達(dá)陽性55例(50.93%)，陰性53例(49.07%)，其中位生存時(shí)間分別為20.1和25.4個(gè)月，兩者比較無顯著性差異，P=0.103，見圖2。

圖2 EGFR表達(dá)對(duì)胃癌患者生存期的影響

2.5 VEGF對(duì)胃癌患者生存期影響

108例胃癌組織中VEGF表達(dá)陽性48例(44.44%)，陰性60例(55.56%)，其中位生存時(shí)間分別為19.5和24.5個(gè)月，兩者比較無顯著性差異，P=0.252，見圖3。

圖3 VEGF表達(dá)對(duì)胃癌患者生存期的影響

2.6 HER2對(duì)胃癌患者生存期影響

108例胃癌組織中HER2表達(dá)陽性22例(20.37%)，陰性86例(79.63%)，其中位生存時(shí)間分別為14.2和25.5個(gè)月，兩者比較有顯著性差異，P=0.024，見圖4。

2.7 影響胃癌的COX分析

應(yīng)用COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行多因素分析，結(jié)果顯示，PTNM病理分期[EXP(B)=2.185，P<0.001]、IGF-1R [EXP(B)=1.755，P=0.0255]和Borrmann分型[EXP(B)=1.174，P=0.0261]為胃癌預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素，見表2。

圖4 HER2表達(dá)對(duì)胃癌患者生存期的影響

3 討論

EGFR是1種受體酪氨酸激酶，能夠介導(dǎo)多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，EGFR是原癌基因cerbB-1的產(chǎn)物，HER2(c-erbB-2)與EGFR具有約50%的同源性,通過參與激活Ras/Raf/Mek/ERK/MAPK、P13K/PDKl/Akt ( PKB )、PLC7、JAK/STAT 等細(xì)胞信號(hào)通路[3]，從而介導(dǎo)細(xì)胞分化、生存、遷移、侵襲、黏附、損傷修復(fù)等重要功能。研究[4,5]發(fā)現(xiàn),EGFR過表達(dá)參與腫瘤發(fā)生、增殖和轉(zhuǎn)移。

VEGF是1種多肽類細(xì)胞因子，也是1種高度特異性的有絲分裂原，能為血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移及新生血管的形成提供基質(zhì)支架，因而VEGF成為腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中調(diào)節(jié)和促進(jìn)血管生成的最重要的細(xì)胞因子，也是在胃癌等實(shí)體瘤生長和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用的因子。

胰島素受體與胰島素樣生長因子(IGF)受體有交叉，高胰島素還可以通過IGF的受體，通過AKT及MTOR等途徑[6]，引發(fā)促有絲分裂和抗凋亡作用，促進(jìn)腫瘤發(fā)生。由于正常上皮細(xì)胞和癌細(xì)胞均可表達(dá)IGF-1受體，IGF-1可同時(shí)作用于癌變前期和癌變階段，IGF-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的過度增加是癌變細(xì)胞存活的關(guān)鍵性因素。此外，IGF-1R還可以刺激腫瘤細(xì)胞表達(dá)VEGF，從而誘發(fā)血管形成[7]。

IGF-1R是具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白，能夠與IGF-1R結(jié)合的配體有2種，即IGF-1和IGF-2，它們與受體結(jié)合后可激活受體，并引起一系列的生物學(xué)效應(yīng)，包括促進(jìn)細(xì)胞增殖、浸潤和轉(zhuǎn)移的效應(yīng)。在一些細(xì)胞中，IGF-1R可引起信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)并使轉(zhuǎn)錄活化蛋白(STAT)激活因子磷酸化，抑制細(xì)胞的增殖和凋亡。

表2 影響胃癌預(yù)后的多因素分析

此外，IGF-1R的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)還可引起細(xì)胞的惡性化以及細(xì)胞黏附性的改變[5]。因此，IGF-IR被認(rèn)為是治療腫瘤的有效靶點(diǎn)。IGF-1R表達(dá)持續(xù)增高是乳腺癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、肺癌發(fā)生的危險(xiǎn)因子[6]。Carboni等[7]將具有IGF-IR活性的融合受體轉(zhuǎn)染小鼠，融合受體以二聚體形式在轉(zhuǎn)基因鼠體內(nèi)具有持續(xù)活性，小鼠在8周齡發(fā)展成乳腺癌。然而有關(guān)IGF-1R在胃癌中表達(dá)情況及4種因子與胃癌術(shù)后預(yù)后的多因素風(fēng)險(xiǎn)分析，鮮有報(bào)道。

日本國家癌癥研究中心的Matsubara等[8]報(bào)道IGF-1R與EGFR聯(lián)合表達(dá)率為55%，IGF-1R與HER2聯(lián)合表達(dá)為18%，EGFR與HER2聯(lián)合表達(dá)率為15%，本研究中IGF-1R與HER2聯(lián)合表達(dá)結(jié)果與之相近，但其他兩項(xiàng)均低于此篇報(bào)道，考慮可能的原因?yàn)槿虢M條件不一樣，免疫結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)不一樣，Junichi Matsubara的研究是選用半定量法評(píng)分系統(tǒng)，本研究采用雙評(píng)分半定量法，即以陽性細(xì)胞百分比計(jì)分和染色強(qiáng)度計(jì)分之和所得總分進(jìn)行結(jié)果判定，結(jié)果更加客觀、準(zhǔn)確。對(duì)于VEGF聯(lián)合表達(dá)率此篇文獻(xiàn)未提及，但是大量文獻(xiàn)報(bào)道VEGF在胃癌中表達(dá)率較高，且分子生物學(xué)方面提示VEGF與IGF-1R、EGFR、HER2在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中具有相互協(xié)同[9]。本研究Spearman相關(guān)分析顯示，在胃癌組織中的IGF-1R與EGFR、VEGF、HER2呈正相關(guān)性，進(jìn)一步說明4種因子在胃癌組織中存在某種聯(lián)系，這提示對(duì)于抗EGFR、VEGF、HER2分子靶向藥物產(chǎn)生耐藥的胃癌晚期患者，抗IGF-1R靶向藥物可能具有一定的療效。

本研究單因素分析結(jié)果顯示，IGF-1R、HER2、IGF-1R與EGFR，IGF-1R與VEGF，IGF-1R與HER2，IGF-1R與EGFR、VEGF、HER2三者及四者均呈陽性表達(dá)的胃癌患者預(yù)后較差，多因素分析結(jié)果顯示僅IGF-1R為獨(dú)立的胃癌預(yù)后因素。雖然IGF-1R、EGFR、VEGF、HER2聯(lián)合表達(dá)不能成為胃癌獨(dú)立的預(yù)后因素，但是所有聯(lián)合陽性表達(dá)的患者生存期均較陰性表達(dá)者短，而且隨選擇的聯(lián)合研究因素增加，預(yù)后越差，尤其是IGF-1R、EGFR、VEGF、HER2均為陽性的3例患者，生存時(shí)間僅為5個(gè)月，是本研究中最短的生存時(shí)間，說明聯(lián)合表達(dá)可能為預(yù)后的判斷指標(biāo)，但需進(jìn)一步研究。

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