COX-2、CD4及CD8在胃癌組織中的表達及其意義

周 瑋 魏海云 牛佳木

目前研究發(fā)現(xiàn)COX-2在多種腫瘤組織及細(xì)胞中存在過度表達，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程密切相關(guān)，已成為腫瘤診斷及治療的1個新靶點[1]。有關(guān)胃癌COX-2表達與CD4、CD8相關(guān)性研究尚未見報道。本研究檢測胃腺癌、癌旁異型增生及正常胃黏膜組織中的COX-2、CD4及CD8表達及其與臨床病理特征的關(guān)系，探討COX-2促進腫瘤發(fā)生的新的分子機制。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集江西省腫瘤醫(yī)院2008年1月至2008年12月間胃癌手術(shù)切除并經(jīng)病理診斷證實的胃腺癌標(biāo)本62例。其中男性39例，女性23例，年齡30～79歲，中位年齡54歲；高分化腺癌5例，中分化腺癌14例，低分化腺癌27例，印戒細(xì)胞癌11例，黏液腺癌5例。臨床分期依據(jù)1997年國際抗癌聯(lián)盟(UICC)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ～Ⅱ期23例，Ⅲ～Ⅳ 39例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例。所有患者術(shù)前均未接受化療、放療及其他治療。同時在標(biāo)本中取胃腺上皮不典型增生22例，正常胃組織20例。

1.2 方法

所有標(biāo)本均經(jīng)過10%甲醛固定，石蠟包埋，制成4 μm厚的切片，采用免疫組化SP法進行COX-2、CD4及CD8染色。兔抗人COX-2多克隆抗體、MAB-0021鼠抗人CD8單克隆抗體、Rev 021602 鼠抗人CD4單克隆抗體，封閉用正常山羊血清工作液、生物素標(biāo)記二抗工作液、過氧化物酶標(biāo)記鏈霉素卵白素工作液?？贵w均為美國Santa Cruz公司產(chǎn)品，購自北京中杉京橋生物技術(shù)有限公司。免疫組化染色按SP試劑盒操作說明進行，工作液濃度均為1∶150。

1.3 結(jié)果判定

COX-2、CD4、CD8均以細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色細(xì)胞顆粒為陽性細(xì)胞。按陽性細(xì)胞比例，組織蛋白表達強度分級：0個細(xì)胞著色為(-)；陽性細(xì)胞數(shù)<25%為(+)；陽性細(xì)胞數(shù)25%～50%為(++)；陽性細(xì)胞數(shù)>50%為(+++)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 胃不同病變組織COX-2 、CD4、CD8蛋白的表達

腺癌組織與腺上皮異型增生組織的COX-2表達高于正常胃上皮組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。胃腺上皮異型增生組織中COX-2表達隨分化程度加重逐漸升高，而高分化、中分化腺癌的COX-2表達顯著高于低分化腺癌(P<0.05)；腺癌組與非典型增生組間COX-2表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。腺癌組織與腺上皮異性增生組織的CD4、CD8表達低于正常胃上皮組織，差異具有顯著意義(P<0.05)，見表1。

表1 COX-2、CD4及CD8在不同胃組織中的陽性表達

2.2 胃癌中COX-2，CD4及CD8表達與臨床病理特征的關(guān)系

有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者較無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者COX-2表達低(P<0.05)。COX-2的表達隨著浸潤深度的增加而逐漸降低，但組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。不同臨床病理特征的胃癌組織中CD4、CD8表達的差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

2.3 胃癌中COX-2，CD4及CD8表達的相關(guān)性分析

在胃腺上皮、非典型增生及腺癌中COX-2表達逐漸增高，而CD4、CD8表達逐漸降低，兩者之間呈負(fù)相關(guān)，其相關(guān)性有統(tǒng)計學(xué)意義(γ=0.73，P<0.05)。

表2 COX-2，CD4及CD8表達與胃癌臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

環(huán)氧化酶(cyclooxgenease，COX)，是前列腺素(PGs)合成過程中的1個主要限速酶，可將花生四烯酸(AA)代謝成各種前列腺素產(chǎn)物，從而參與機體多種病理生理過程，如炎癥、發(fā)熱、凝血機制等。近年來國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，許多癌前病變和惡性腫瘤中COX-2高表達，如胃腸上皮化生、胃癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、食管癌和肺癌等，與正常組織相比有顯著性差異。

有關(guān)胃不同病變組織中COX-2表達的臨床生物學(xué)意義研究結(jié)果不一。Sung等[2]的研究結(jié)果表明胃癌中的COX-2表達與臨床病理特征無關(guān)。Zaridze等[3]研究則認(rèn)為COX-2高表達者組織學(xué)分化差且更具有侵襲性。此外，Akre等[4]的研究提示分化型胃癌的COX-2表達高于低分化者。COX-2高表達在不典型增生階段即已存在，且與正常組織相比，其表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義，因此，COX-2高表達可能是胃癌發(fā)生的早期標(biāo)志。本研究采用免疫組化SP法對胃不同病變組織中COX-2的表達進行檢測，結(jié)果顯示，COX-2在胃腺癌和腺上皮不典型增生中的表達顯著高于胃正常黏膜上皮，提示COX-2可能在胃腺癌發(fā)生中起作用，COX-2表達增高有可能是胃癌變的早期標(biāo)志物。我們研究發(fā)現(xiàn)，高分化及中分化腺癌的COX-2表達顯著高于低分化腺癌，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組的COX-2表達顯著高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組，提示在胃腺癌中，COX-2表達越低，其生物學(xué)行為越差，與Akre等的研究結(jié)果一致，這可能是由于分化差的腺癌細(xì)胞部分已去分化，導(dǎo)致COX-2抗議的表達降低。因此，COX-2表達增高可能是胃黏膜上皮癌變的早期事件。

機體主要通過細(xì)胞免疫機制在發(fā)揮抗腫瘤免疫效應(yīng)。細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)是機體細(xì)胞免疫中重要的效應(yīng)細(xì)胞，參與機體的抗瘤效應(yīng)。CTL主要是CD8T淋巴細(xì)胞，其主要功能是特異性殺傷靶細(xì)胞，細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞TCR特異性識別腫瘤細(xì)胞表面的抗原肽-MHC-I類分子復(fù)合物，被激活后增殖分化為具有特異性殺傷活性的CTL，介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞壞死或凋亡。另外，CD4T淋巴細(xì)胞有著較強的分泌細(xì)胞因子的功能，能分泌IL-2、IL-3、IFNγ、TNF-α、 GM-CSI 等，參與對機體免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)及一些免疫病理過程，其中TNF-α等可直接殺傷靶細(xì)胞；而其他一些細(xì)胞因子可通過促進CD4T細(xì)胞增殖、分化和激活而間接地影響其靶細(xì)胞的殺傷[5～7]。我們的研究發(fā)現(xiàn)胃腺癌組織與腺上皮異型增生組織的CD4、CD8表達低于正常胃上皮組織，差異具有顯著意義(P<0.05)。在胃癌中COX-2，CD4及CD8表達的相關(guān)性分析證實在胃腺上皮、非典型增生及腺癌中COX-2表達逐漸增高，而CD4、CD8表達逐漸降低，兩者之間呈負(fù)相關(guān)，其相關(guān)性有統(tǒng)計學(xué)意義。通過以上研究結(jié)果，在胃黏膜上皮癌變過程中，COX-2表達逐漸增高，而CD4、CD8表達逐漸降低，兩者表達呈負(fù)相關(guān)，可以認(rèn)為COX-2是通過抑制CD4T、CD8T細(xì)胞的細(xì)胞毒反應(yīng)來抑制機體的免疫反應(yīng)。亦可以認(rèn)為抑制機體的免疫反應(yīng)是COX-2促進腫瘤發(fā)生的又一分子機制。

綜上所述，COX-2高表達可能是胃癌變過程中的早期事件。COX-2與CD4及CD8的表達呈負(fù)相關(guān)，COX-2抑制機體CD4及CD8表達的具體機制有待于進一步研究。

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