• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    鄭氏比蜢線粒體基因組全序列的測定與分析

    2011-12-25 08:04:06輝,
    Zoological Research 2011年4期
    關(guān)鍵詞:鄭氏密碼子結(jié)構(gòu)域

    楊 輝, 黃 原

    (陜西師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院, 陜西 西安 710062)

    鄭氏比蜢線粒體基因組全序列的測定與分析

    楊 輝, 黃 原?

    (陜西師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院, 陜西 西安 710062)

    采用長距PCR 擴(kuò)增及保守引物步移法測定并注釋了鄭氏比蜢(Pielomastax zhengi)的線粒體基因組全序列。鄭氏比蜢的線粒體基因組全長15 602 bp, A+T 含量為71.8%, 37個基因位置與飛蝗的一致, 基因間隔序列共計10處47 bp, 間隔長度從1~20 bp不等; 有14對基因間存在52 bp重疊, 重疊堿基數(shù)在1~8 bp之間。蛋白質(zhì)基因的起始密碼子均為昆蟲典型的起始密碼子ATN。ND5 基因使用了不完全終止密碼子T, 其余基因均為典型的TAA或TAG。除 tRNASer(AGN)的 DHU 臂缺失外, 其余21個tRNA 基因的二級結(jié)構(gòu)均屬典型的三葉草結(jié)構(gòu), 但在鄭氏比蜢中有5個tRNA(tRNACys、tRNALys、 tRNAPhe、 tRNAProtRNAArg)基因變異較大, 無法采用常規(guī)算法預(yù)測出來, 表現(xiàn)在這5個tRNA 二級結(jié)構(gòu)的TψC臂僅有3~4對配對堿基, tRNALys和tRNAArg的反密碼臂僅有4對配對堿基。預(yù)測的 lrRNA 二級結(jié)構(gòu)總共有 6 個結(jié)構(gòu)域(結(jié)構(gòu)域Ⅲ缺失), 44 個莖環(huán)結(jié)構(gòu)。預(yù)測的 srRNA 的二級結(jié)構(gòu)包含3 個結(jié)構(gòu)域, 30 個莖環(huán)結(jié)構(gòu)。比較鄭氏比蜢、西藏飛蝗(Locusta migratoria tibetensis)和疑鉤額螽(Ruspolia dubia)rRNA二級結(jié)構(gòu)后,發(fā)現(xiàn)鄭氏比蜢與西藏飛蝗的更相似。A+T 豐富區(qū)中存在一個被認(rèn)為與復(fù)制及轉(zhuǎn)錄起始有關(guān)的 Ploy(T)結(jié)構(gòu)。

    蜢總科; 鄭氏比蜢; 線粒體基因組; RNA二級結(jié)構(gòu)

    后生動物線粒體基因組通常是編碼 37個基因(13個蛋白質(zhì)基因、22個tRNA基因及2個rRNA基因)和1個控制區(qū)(也稱A+T豐富區(qū))的細(xì)胞器基因組(Wolstenholme, 1992; Ding et al, 2007)。線粒體DNA具有多拷貝數(shù)、母系遺傳、突變率高、極少發(fā)生重組等特性, 已被廣泛地運(yùn)用于分子進(jìn)化、系統(tǒng)地理學(xué)和系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系等方面的研究(William et al,2001)。根據(jù) NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov/genomes/ORGANELLES/mztax_short.html)的統(tǒng)計, 截至2010年 11月, 已測出全線粒體基因組的昆蟲綱種類有223種, 其中直翅目昆蟲34種。由于測序的類群相對較少, 所選物種的特殊進(jìn)化模式及系統(tǒng)樹中可能的長枝吸引等問題, 利用線粒體基因組數(shù)據(jù)推斷直翅目系統(tǒng)發(fā)育和進(jìn)化地位還存在一定的困難(Gao et al, 2009)。另外, 已測的34種直翅目昆蟲大部分是螽斯總科和蝗總科的, 還缺乏蜢總科的代表種類, 因而增加這些類群中有關(guān)線粒體基因組全序列數(shù)據(jù)將有利于建立比較穩(wěn)健的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系。

    鄭氏比蜢(Pielomastax zhengi)屬于直翅目蜢總科(Eumastacoidea)枕蜢科(Episactidae)。蜢總科是一類較罕見而又原始的小型昆蟲, 其中一些種類還被認(rèn)為是第三紀(jì)的孑遺種類。它們的大多數(shù)種類生活在熱帶和亞熱帶的灌木叢或林區(qū)內(nèi)(Huang et al,2009)。本文測定并注釋了鄭氏比蜢線粒體基因組全序列, 并對其編碼的22個tRNA和大小亞基rRNA的二級結(jié)構(gòu)做了預(yù)測和分析, 以期為直翅目昆蟲線粒體譜系基因組學(xué)提供新的數(shù)據(jù)資料。

    1 材料和方法

    1.1 標(biāo)本采集及總DNA的提取

    鄭氏比蜢標(biāo)本于2009年8月采集于河南內(nèi)鄉(xiāng)縣寶天曼自然保護(hù)區(qū), 保存于無水乙醇??侱NA采用酚-氯仿抽提法:將后足股節(jié)肌肉置于 600 μL 勻漿緩沖液(0.01 mol/L Tris, pH 7.8; 5 mmol/L EDTA,5% SDS, 50 ng proteinase K/μL)中研磨, 65 ℃水浴消化 3~5 h。用平衡酚(pH 7.6~7.8)提純2次, 再用 CI(氯仿∶異戊醇=24∶1)提純一次。最后用?20 ℃預(yù)冷的 100%乙醇沉淀和 70%乙醇洗滌總DNA, 保存于?20 ℃。

    1.2 PCR擴(kuò)增及測序

    本研究所采取的測序策略是長 PCR產(chǎn)物步移法測序, 如有測序效果不佳或不能夠測通的區(qū)域,再做 sub-PCR來補(bǔ)齊缺口。首先, 通過四對長距PCR(L-PCR)引物將線粒體基因組擴(kuò)增為 4條相互重疊的片段(片段A、A2、B1和B2), 4個片段的上下游引物序列見表1(Liu et al, 2006), 長距PCR反應(yīng)體系的總體積是 15 μL, 包括 10×反應(yīng)緩沖液 1.5 μL、25 mmol/L MgCl22 μL、2.5mmol/L dNTPs 3 μL,10 μmol/L 上、下游引物各 2μL、5 U/μL LA-TaqDNA聚合酶0.15~0.35 μL、總DNA為模板1 μL。然后,加ddH2O至終體積15 μL。PCR反應(yīng)循環(huán)條件如下:93 ℃預(yù)變性 2 min→(92 ℃10 s, 48 ℃ 30 s, 68 ℃8 min)共 15 個循環(huán)→(92 ℃ 10 s, 48 ℃30 s, 68 ℃8 min +20 s)共 15個循環(huán)→68 ℃ 7 min→4 ℃保存。其次, 用 12對保守引物以片段 A、A1、B1和 B2為模板再擴(kuò)增320~3 175 bp的短片段, 具體信息見表2 (Simon et al, 2006)。短片段擴(kuò)增體系總體積為25 μL, 包括 10×反應(yīng)緩沖液 2.5 μL、25 mmol/L MgCl23 μL、2.5 mmol/L dNTPs 2 μL, 10 μmol/L 上、下游引物各4 μL、5 U/μL TaqDNA聚合酶0.15~0.35 μL和長片段產(chǎn)物(作為DNA模板)1 μL。然后,加ddH2O至終體積25 μL。PCR 反應(yīng)程序?yàn)? 94 ℃2 min→(94℃×30 s+38~55 ℃×30 s+72 ℃×1 min)共 30 個循環(huán)→72 ℃×7 min→4 ℃ forever。最后, 通過12條sub-PCR產(chǎn)物測序?qū)⑷笨谘a(bǔ)齊, 使基因組連接成環(huán)。

    表1 長PCR擴(kuò)增引物序列Tab. 1 Primer sequences for long PCR amplication

    表2 補(bǔ)充擴(kuò)增片段的引物對Tab. 2 The partial pair primers for the mitogenome complement fragment amplification

    1.3 序列拼接、注釋和分析

    使用Staden Package 1.7 (Bonfield et al, 1995)進(jìn)行序列拼接和注釋, 通過與威廉劍角蝗Acrida_willemsei(NC_011303)線粒體 DNA序列進(jìn)行比對確定蛋白質(zhì)基因、tRNA基因和rRNA基因的位置,使用 MEGA 4.0 統(tǒng)計線粒體基因組堿基組成、蛋白質(zhì)基因密碼子使用頻率等。使用 tRNAScan-SE ver.1.21進(jìn)行 tRNA 二級結(jié)構(gòu)預(yù)測。參考已發(fā)表的李氏大足蝗 srRNA二級結(jié)構(gòu)和 lrRNA二級結(jié)構(gòu),對鄭氏比蜢線粒體基因組 srRNA和lrRNA的二級結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(Gao et al, 2009)。

    2 結(jié) 果

    2.1 線粒體基因組組成與基因排列

    鄭氏比蜢線粒體基因組序列已提交到GenBank,登錄號為JF411955。本研究共測得41條可用序列,拼接后的序列總長度為 1 5618 bp, 序列覆蓋度1.98倍, 除去兩端重疊序列得到鄭氏比蜢線粒體基因組的總長度為 1 5602 bp。它由13個蛋白質(zhì)編碼基因(protein-coding genes, PCGs)、22 個 tRNA 基因、2 個 rRNA 基因(lrRNA 和 srRNA)組成, 基因排列順序(圖 1)與蝗總科昆蟲的排列順序相同, 也存在tRNAAsp(D)和tRNALys(K)的倒置現(xiàn)象(Huang et al, 2010)。 基因排列非常緊密, 存在 14 處共 52 bp的基因重疊, 重疊區(qū)長度 1~8 bp 不等; 基因間隔序列總長度為47 bp, 共計10 處, 大小 1~20 bp之間, 基因間隔最大的在 tRNALys與 ATP8之間和ND5與 tRNAHis之間, 分別是 20 bp和10 bp; 既沒有重疊, 也沒有間隔的基因?qū)灿?4 處。其中tRNAGln、tRNACys、tRNATyr、tRNAPhe、tRNAHis、tRNAPro、tRNALeu、tRNAVal和 ND1、ND4、ND4L、ND5 以及16s rRNA、12srRNA基因位于N鏈上, 其余23 個基因位于J 鏈上, 具體信息見表3。

    圖1 鄭氏比蜢線粒體基因組結(jié)構(gòu)Fig. 1 The map of the Pielomastax zhengi mitogenome

    2.2 線粒體基因組的堿基組成及密碼子使用

    鄭氏比蜢線粒體基因組的堿基組成具有很強(qiáng)的AT 偏向性, 在4種堿基中, A含量最多, G含量最少。J鏈的堿基含量為: A(39.4%) > T(32.4%) >C(15.6) > G(12.6%), AT(71.8%)遠(yuǎn)大于 CG(28.2%),這種現(xiàn)象普遍存在于蛋白質(zhì)基因、tRNA和 rRNA基因, 尤其在A+ T 富集區(qū)。鄭氏比蜢的13個蛋白質(zhì)基因最常用的起始密碼子是 ATG, 其次是 ATC和 ATT。除COⅢ、ND3、CytB和ND1以TAG作為終止密碼子, ND5的終止密碼子為不完全的T外,其 8個蛋白質(zhì)基因的終止密碼子都為完整的 TAA,具體信息見表 3。鄭氏比蜢線粒體基因組兩條鏈上編碼的蛋白質(zhì)密碼子使用情況存在差異, 即 J 鏈編碼基因偏向于使用第3位點(diǎn)為A的密碼子, 而N鏈偏向于使用第3位點(diǎn)為U的密碼子。

    表3 鄭氏比蜢線粒體基因組組成Tab. 3 Gene organization of the Pielomastax zhengi mitochondrial genome

    2.3 tRNA二級結(jié)構(gòu)

    鄭氏比蜢線粒體基因組有 22種 tRNA, 其中14種位于重鏈上, 8種位于輕鏈上。用 tRNAScan-SE 1.21 預(yù)測出鄭氏比蜢16個 tRNA 的二級結(jié)構(gòu),其余 6 個 tRNA 二級結(jié)構(gòu)是通過與威廉劍角蝗Acrida willemsei(NC_011303)比對確定其在整個基因組上的位置后繪出。在所預(yù)測的22 種tRNA二級結(jié)構(gòu)中總共出現(xiàn)了37處錯配, 其中有32對為GU錯配; 其余 5對錯配中:2對 UU 錯配發(fā)生在tRNAAla和 tRNAPhe的氨基酸接受臂和反密碼子臂;1對AC錯配發(fā)生在tRNAMet的氨基酸接受臂; 1對AA錯配發(fā)生在tRNALys的氨基酸接受臂; 1對 UC錯配發(fā)生在 tRNAPro的氨基酸接受臂。除了tRNAAsp、tRNAVal和tRNASerAGN(S)的反密碼環(huán)是9個堿基外, 其余的反密碼環(huán)均為7個堿基(圖2)。

    圖2 鄭氏比蜢線粒體基因組tRNA二級結(jié)構(gòu)Fig. 2 The tRNA secondary structures of the Pielomastax zhengi mitogenome

    2.4 rRNA二級結(jié)構(gòu)

    鄭氏比蜢線粒體基因組的lrRNA和srRNA分別位于tRNALeu(L-CUN)和tRNAVal(V), 以及tRNAVal(V)和D-loop之間, 其長度分別是1 301 bp和795 bp。兩個rRNA 基因的A+T含量為75.2%, 高于整個基因組的平均A+T含量(71.8%), G含量(15.1%)是C含量(9.8%)的近兩倍。以短額負(fù)蝗和西藏飛蝗的lrRNA和srRNA二級結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)對鄭氏比蜢的二級結(jié)構(gòu)進(jìn)行了預(yù)測。結(jié)果顯示, 鄭氏比蜢 lrRNA二級結(jié)構(gòu)總共有6個結(jié)構(gòu)域(結(jié)構(gòu)域Ⅲ缺失)和44個莖環(huán)結(jié)構(gòu)。srRNA的二級結(jié)構(gòu)包含3個結(jié)構(gòu)域和30個莖環(huán)結(jié)構(gòu)(圖2)。鄭氏比蜢的lrRNA和srRNA二級結(jié)構(gòu)與短額負(fù)蝗和西藏飛蝗基本相似, 只在少數(shù)位置存在差異。

    2.5 A+T豐富區(qū)

    鄭氏比蜢的 A+T豐富區(qū)位于 srRNA與tRNAIle(I)之間, 全長 839 bp, A+T 含量為 82.1%,明顯高于全基因組的平均水平(71.8%)。在鄭氏比蜢的A+T豐富區(qū)發(fā)現(xiàn)一段 Poly(T)(T stretch), 且能形成一個莖環(huán)結(jié)構(gòu)(圖4)。

    3 討 論

    3.1 基因排列順序

    圖3 鄭氏比蜢rRNA(lrRNA和 srRNA)二級結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果Fig. 3 The secondary structures of mitochondrial rRNAs (lrRNA and srRNA)of Pielomastax zhengi

    圖4 A+T富集區(qū)Poly(T)及附近序列所形成的莖環(huán)結(jié)構(gòu)Fig. 4 Stem-loop structure at the poly- T stretch in the A+T rich region of Pielomastax zhengi mitogenome

    在直翅目昆蟲線粒體基因組的研究中發(fā)現(xiàn)蝗亞目的蝗總科、蚤螻總科和蚱總科基因排列次序相同, 都發(fā)生了 KD 倒置現(xiàn)象, 即 tRNAAsp(D)排在tRNALys(K)基因上游(DK 排列) (Ballard & Dean,2001)。蜢總科的變色烏蜢為 KD 排列, 與蝗亞目其他總科不同, 而與多數(shù)螽亞目昆蟲的排序方式相同(Huang et al, 2010)。然而, 本研究所測得鄭氏比蜢的基因排列順序仍然與蝗總科的排列順序相同,即也發(fā)生了KD 倒置現(xiàn)象, 形成這種排列方式的原因是由于DK這二個基因所對應(yīng)的 DNA片段發(fā)生了倒置。目前關(guān)于 DNA片段倒置產(chǎn)生的原理, 最有說服力的是Mark和Nick的觀點(diǎn), 即雙鏈斷裂和重新結(jié)合模型(Zhong et al, 2005; Ye et al, 2008)。關(guān)于蜢總科昆蟲的線粒體基因組排列順序有三種可能:(1)大部分蜢總科線粒體基因組排列順序與蝗亞目的相同; (2)大部分蜢總科線粒體基因組排列順序與螽亞目的相同; (3)蜢總科昆蟲的線粒體基因組排列順序是隨機(jī)的。蜢總科昆蟲線粒體基因組排列究竟屬于那種可能, 還有待研究更多蜢總科物種的線粒體基因組進(jìn)一步證實(shí), 但偏向第一種情況的可能性更大, 因?yàn)轵炜偪评ハx無論從形態(tài)上分類還是從分子系統(tǒng)上劃分都表明與蝗亞目昆蟲的親緣關(guān)系更近。

    3.2 tRNA二級結(jié)構(gòu)

    圖5 鄭氏比蜢、西藏飛蝗和疑鉤額螽rRNA二級結(jié)構(gòu)的比較Fig. 5 The comparison of rRNA secondary structures among Pielomastax zhengi, Locusta migratoria tibetensis and Ruspolia dubia

    大部分直翅目昆蟲線粒體基因組通過 tRNAScan-SE 1.21可以預(yù)測出20個tRNA基因。本研究的鄭氏比蜢只能預(yù)測出16個tRNA基因, 除了在大部分直翅目昆蟲都不能預(yù)測出來的 tRNAser(UCN)以外,還有5個tRNA 基因沒有預(yù)測出來。通過比較分析發(fā)現(xiàn), 除了 tRNAser(UCN)不具有典型的三葉草二級結(jié)構(gòu)外, 鄭氏比蜢其余的5個tRNA二級結(jié)構(gòu)雖然具有典型的二級結(jié)構(gòu), 但是也存在一些差異, 即典型的三葉草結(jié)構(gòu)的T¢C臂有5對配對堿基, 而這5個tRNA 二級結(jié)構(gòu)的T¢C臂只有3~4對配對堿基; 另外, tRNALys和tRNAArg的反密碼臂只有4對配對堿基。這些結(jié)構(gòu)特征可能是導(dǎo)致5個tRNA基因沒能預(yù)測出來的原因。另外, 預(yù)測的 22種tRNA二級結(jié)構(gòu)中總共出現(xiàn)了 37處錯配, 其中 32對為GU錯配。有人認(rèn)為線粒體基因組tRNA基因的部分錯配可以通過 RNA編輯校正, 不會引起氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)上的障礙(Yokobori & P??bo, 1995; Dang et al, 2008)。

    3.3 rRNA二級結(jié)構(gòu)

    rRNA二級結(jié)構(gòu)模型對于理解核苷酸的替換模式和評估 rRNA系統(tǒng)發(fā)育信息的可靠性非常重要(Shi et al, 2008)。預(yù)測的鄭氏比蜢 lrRNA二級結(jié)構(gòu)總共有 6 個結(jié)構(gòu)域(結(jié)構(gòu)域Ⅲ缺失)和44 個莖環(huán)結(jié)構(gòu)(圖2 B); srRNA的二級結(jié)構(gòu)包含 3 個結(jié)構(gòu)域和30 個莖環(huán)結(jié)構(gòu)(圖2 A)。lrRNA二級結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)域IV和V比較保守, srRNA二級結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)域I和II變異比較大。本文將鄭氏比蜢的rRNA二級結(jié)構(gòu)與蝗亞目西藏飛蝗的rRNA二級結(jié)構(gòu)和螽亞目疑鉤額螽的rRNA二級結(jié)構(gòu)(Zhou et al, 2007; Jiang, 2010)進(jìn)行了比較, 結(jié)果發(fā)現(xiàn)它們lrRNA的二級結(jié)構(gòu)有四處存在明顯差異(圖3), srRNA的二級結(jié)構(gòu)有6處存在明顯差異。由此可見lrRNA要比srRNA更保守一些。另外, 通過它們rRNA二級結(jié)構(gòu)的比較發(fā)現(xiàn),鄭氏比蜢rRNA二級結(jié)構(gòu)與疑鉤額螽rRNA二級結(jié)構(gòu)之間的差異明顯大于鄭氏比蜢rRNA二級結(jié)構(gòu)與西藏飛蝗rRNA二級結(jié)構(gòu)之間的差異(圖5)。因而,鄭氏比蜢與西藏飛蝗的親緣關(guān)系可能更近, 也就是與蝗亞目昆蟲的親緣關(guān)系更近。

    3.4 A+T富集區(qū)

    目前對 A+T 富集區(qū)域的研究關(guān)注主要集中于所包含的復(fù)制相關(guān)的調(diào)控信息?,F(xiàn)在公認(rèn)的是昆蟲的線粒體 N鏈的復(fù)制起點(diǎn)(ON)位于控制區(qū)內(nèi), J鏈的復(fù)制則是在輕鏈的復(fù)制完成97%之后才開始, 即認(rèn)為OJ(J 鏈的復(fù)制起點(diǎn))位于距離ON97% mtDNA長度的位置上(Goddard & Wolstenholme, 1978; Saito et al, 2005)。Saito et al(2005)以果蠅為主要研究對象,同時也對10個目的20種昆蟲的A+T富集區(qū)進(jìn)行了研究。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果, 前期的相關(guān)研究認(rèn)為, 由于ON位于控制區(qū)內(nèi), 加之其上游的一段 Poly(T)結(jié)構(gòu),它可能與復(fù)制起點(diǎn)的識別有關(guān)(ye et al, 2008)。本研究所分析的鄭氏比蜢 A+T 富集區(qū)也有那樣一段Poly(T)結(jié)構(gòu), 應(yīng)該也與復(fù)制起點(diǎn)的識別有關(guān)。

    Ballard JWO, Dean MD. 2001. The mitochondrial genome: mutation,selection and recombination[J].Curr Opin Genet Dev, 11: 667-672.

    Bonfield JK, Smith KF, Staden R. 1995. A new DNA sequence assembly program [J].Nucleic Acids Res, 24: 4992-4999.

    Dang JP, Liu N, Ye W, Huang Y. 2008. Complete mitochondrial genome sequence ofGastrimargus marmoratus(Thunberg) (Orthoptera :Acridoidea) [J].Acta Entomol Sin, 51(7): 671-680. [黨江鵬, 劉 念,葉 偉, 黃 原. 2008. 云斑車蝗線粒體基因組全序列測定與分析.昆蟲學(xué)報, 51(7): 671-680.]

    Ding FM, Shi HW, Huang Y. 2007. Complete mitochondrial genome and secondary structures of lrRNA and srRNA ofAtractomorpha sinensis(Orthoptera, Pyrgomorphidae) [J].Zool Res, 28(6): 580-588. [丁方美,師紅雯, 黃 原. 2007. 短額負(fù)蝗線粒體基因組及其 lrRNA 和srRNA 二級結(jié)構(gòu)分析. 動物學(xué)研究, 28(6): 580-588]

    Gao J, Cheng CH, Huang Y. 2009. Analysis of complete mitochondrial genome sequence ofAeropus licentiChang [J].Zool Res, 30(6):603-612. [高佳, 程春花, 黃原. 2009. 李氏大足蝗線粒體全基因組序列分析. 動物學(xué)研究, 30(6):603-612].

    Goddard JM, Wolstenholme DR. 1978. Origin and direction of replication in mitochondrial DNA molecules fromDrosophila melanogaster[J].Proc Natl Acad Sci USA, 75(8): 3886-3890.

    Huang Y, Liu N, Lu HM, 2010. Research progress in mitochondrial genomes of the Orthoptera insects [J].Acta Entomol Sin, 53(5) :581-586. [黃原, 劉念, 盧慧甍. 直翅目昆蟲線粒體基因組研究進(jìn)展.昆蟲學(xué)報, 53(5) : 581-586.]

    Huang JH, Huang Y, Zhou SY. 2009. Check list of Chinese species of superfamily Eumastacoidea (Orthoptera: Caelifera) [J].J Guangxi Normal Univ, 27(1): 84-87. [黃建華, 黃 原, 周善義. 2009. 中國蜢總科昆蟲名錄. 廣西師范大學(xué)學(xué)報, 27(1): 84-87.]

    Jiang DY. 2010. Determination and analysis of four complete mitochondrial genome sequences of locust populations [D]. College of Life Sciences,Xi’an Shaanxi Normal University. [江東洋. 2010. 中國四種飛蝗線粒體基因組序列的測定與分析 [D]. 西安: 陜西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院.]

    Liu N, Hu J, Huang Y. 2006. Amplification of grasshoppers complete mitochondrial genomes using long PCR [J].Chn J Zool, 41: 61-65.[劉念, 胡 靖, 黃 原. 2006. 應(yīng)用長 PCR 擴(kuò)增蝗蟲線粒體全基因組.動物學(xué)雜志, 41: 61-65.]

    Saito S, Tamura K, Aotsuka T. 2005. Replication origin of mitochondrial DNA in insects[J].Genetics, 171(4): 1695-1705.

    Shi HW, Ding FM, Huang Y. 2008. Complete sequencing and analysis of mtDNA inPhlaeoba albonemaZheng [J].Chn J Biochem Mol Biol, 24(7): 604-611.

    Simon C, Buckley TR, Frati F, Stewart JB, Beckenbach AT. 2006.Incorporating molecular evolution into phylogenetic analysis, and a new compilation of conserved polymerase chain reaction primers for animal mitochondrial DNA [J].Annu Rev Ecol Evol Syst, 37:545–579.Wolstenholme DR, 1992. Animal mitochondrial DNA: structure and evolution [J].Int Rev Cytol, 141: 173-216.

    Yokobori S, P??bo S. 1995. Transfer RNA editing in land snail mitochondria [J].Proc Natl Acad. Sci USA, 92: 10432-10435.

    Ye W, Dang JP, Xie LD, Huang Y. 2008. Complete mitochondrial genome ofTeleogryllus emma(Orthoptera: Gryllidae) with a new gene order in Orthoptera [J].Zool Res, 29(3): 236-244. [葉 偉, 黨江鵬, 謝令德,黃 原. 2008. 黃臉油葫蘆線粒體基因組:一種新的基因排列方式.動 物 學(xué) 研 究, 29(3):236-244.]

    Zhong J, Li G, Liu ZQ, Li QW, Wang YQ. 2005. Gene rearrangement of mitochondrial genome in the vertebrate [J].Acta GenetSin, 32(3):322-330. [鐘 婧, 李 光, 劉忠權(quán), 李慶偉, 王義權(quán). 2005. 脊椎動物線粒體DNA 的基因重排. 遺傳學(xué)報, 32 (3): 322-330.]

    Zhou ZJ, Huang Y, Shi FM. 2007. The mitochondrial genome ofRuspolia dubia(Orthoptera: Conocephalidae) contains a short A+T-rich region of 70 bp in length [J].Genome, 50: 855-866.

    Analysis of the complete mitochondrial genome sequence ofPielomastax zhengi

    YANG Hui, HUANG Yuan?

    (School of Life Sciences,Shaanxi Normal University,Xi’an710062,China)

    The complete mitochondrial genome sequence ofPielomastax zhengiwas determined by using long PCR and conserved primer walking approaches. The results showed that the entire mitochondrial genome ofPielomastax zhengiis 15 602 bp long with A+T content of 71.8%. All 37 genes are conserved in the positions observed in those ofLocusta migratoria. All the genes are closely assembled by leaving 10 intergenic spacers in between. Those intergenic spacers are 47 bp in total (excluding the A+T rich region), with individual size ranges from 1 bp to 20 bp. In addition,there are a total of 52 bp overlapping sequences among 14 genes, ranging from 1?8 bp. All protein-coding genes start with a typical initiation codon in insects, ATN. Twelve protein-coding genes use the usual TAA and TAG termination codons, whereas, the ND5 genes have an incomplete termination codon (T). Except the tRNASer (AGN), whose DHU arm is absent; all the other 21 tRNA genes have typical clover-leaf secondary structures. But inPielomastax zhengi, the secondary structures of five tRNA (tRNACys, tRNALys, tRNAPhe, tRNAPro, tRNAArg) genes can not be predicted by the conventional methods as they have only 3?4, rather than 5 base pairs in the TψC arm, while, the tRNALysand tRNAArghave only 4 base pairs in the anticode arm. The predicted secondary structures of lrRNA and srRNA have 6 domains with 44 helices and 3 domains with 30 helices, respectively. The results of the rRNA secondary structure comparison showed thatPielomastax zhengiis more closely related withLocusta migratoria tibetensisthanRuspolia dubia. Like most insects, the mitochondrial genome ofPielomastax zhengihas a non-coding A+T rich region containing a polythymidine stretch, which may be involved in the replication and/or translation initiation of other genes.

    Eumastacoidea;Pielomastax zhengi; Mitochondrial genome; RNA secondary structure

    Q969.26; Q754

    A

    0254-5853-(2011)04-0353-10

    10.3724/SP.J.1141.2011.04353

    2011-01-06;接受日期:2011-03-28

    自然基金資助項(xiàng)目(30670279;30970346)

    ?通訊作者(Corresponding author),E-mail: yuanh@snnu.edu.cn

    楊輝,碩士研究生,研究方向:基因組學(xué)

    猜你喜歡
    鄭氏密碼子結(jié)構(gòu)域
    Efficacy observation of acupuncture for dry eye syndrome of lung-yin deficiency pattern
    密碼子與反密碼子的本質(zhì)與拓展
    Therapeutic observation of ‘warming-unblocking needling technique’ for knee osteoarthritis due to deficiency of liver and kidney
    鄭氏富貴黃金屋
    蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域劃分方法及在線服務(wù)綜述
    恐龍科普秀——鄭氏曉廷龍
    10種藏藥材ccmFN基因片段密碼子偏好性分析
    中成藥(2018年7期)2018-08-04 06:04:10
    重組綠豆BBI(6-33)結(jié)構(gòu)域的抗腫瘤作用分析
    組蛋白甲基化酶Set2片段調(diào)控SET結(jié)構(gòu)域催化活性的探討
    泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域與泛素化信號的識別
    毛片一级片免费看久久久久| 日本欧美国产在线视频| 熟女电影av网| 韩国高清视频一区二区三区| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 国产在线一区二区三区精| 国产成人免费观看mmmm| 蜜桃在线观看..| 人妻人人澡人人爽人人| 制服诱惑二区| 两个人免费观看高清视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 精品午夜福利在线看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 人成视频在线观看免费观看| 久久婷婷青草| 2021少妇久久久久久久久久久| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 波野结衣二区三区在线| 亚洲美女搞黄在线观看| 在现免费观看毛片| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 日本午夜av视频| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 精品亚洲成a人片在线观看| 一区二区三区四区激情视频| 国产精品一国产av| 永久网站在线| 秋霞伦理黄片| 一边摸一边做爽爽视频免费| 男男h啪啪无遮挡| 日本vs欧美在线观看视频| 国产成人精品一,二区| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 老司机影院毛片| av在线app专区| 国产男人的电影天堂91| 亚洲一区二区三区欧美精品| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产乱来视频区| 欧美另类一区| 女人久久www免费人成看片| 国模一区二区三区四区视频| 2022亚洲国产成人精品| 国产在线一区二区三区精| 精品一区在线观看国产| 欧美人与善性xxx| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产不卡av网站在线观看| 国产 精品1| 亚洲情色 制服丝袜| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 18在线观看网站| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 成年av动漫网址| 亚洲四区av| 国产高清国产精品国产三级| 日本黄大片高清| 日本黄色片子视频| 一区二区三区四区激情视频| 黑人猛操日本美女一级片| 2022亚洲国产成人精品| 男女边摸边吃奶| 国产精品不卡视频一区二区| 午夜福利视频在线观看免费| 日本黄色片子视频| 亚洲欧美清纯卡通| av免费在线看不卡| 亚洲精品aⅴ在线观看| 日日啪夜夜爽| 国产精品一区www在线观看| 亚洲精品日本国产第一区| 成人漫画全彩无遮挡| 欧美精品国产亚洲| 亚州av有码| 国产成人精品婷婷| 久久精品久久精品一区二区三区| 春色校园在线视频观看| 国产日韩欧美视频二区| 欧美成人午夜免费资源| 国产色婷婷99| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 欧美少妇被猛烈插入视频| 最近2019中文字幕mv第一页| 考比视频在线观看| 国产精品成人在线| 日韩av免费高清视频| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产精品久久久久久精品古装| 精品久久久噜噜| 国产不卡av网站在线观看| 99视频精品全部免费 在线| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产国语露脸激情在线看| 在线观看国产h片| 五月天丁香电影| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产高清三级在线| 亚洲在久久综合| 大话2 男鬼变身卡| 亚洲精品色激情综合| 久久久久久久精品精品| 三级国产精品片| 久久久国产欧美日韩av| 女性生殖器流出的白浆| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 水蜜桃什么品种好| 国产色婷婷99| 久久99一区二区三区| 日韩伦理黄色片| 亚洲国产精品专区欧美| 亚洲色图综合在线观看| 久久精品夜色国产| 国产日韩欧美在线精品| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 男人操女人黄网站| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 三上悠亚av全集在线观看| 人妻 亚洲 视频| 五月开心婷婷网| 蜜臀久久99精品久久宅男| 亚洲内射少妇av| 99九九在线精品视频| 999精品在线视频| 精品视频人人做人人爽| 国产av精品麻豆| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 一边亲一边摸免费视频| 我要看黄色一级片免费的| 三上悠亚av全集在线观看| 熟女av电影| 母亲3免费完整高清在线观看 | 午夜激情福利司机影院| 美女中出高潮动态图| 亚洲av二区三区四区| 超色免费av| 在线观看三级黄色| 高清欧美精品videossex| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 99国产精品免费福利视频| 国产免费福利视频在线观看| av免费在线看不卡| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 中文字幕制服av| 如何舔出高潮| 香蕉精品网在线| 久久久精品区二区三区| 一级黄片播放器| 亚洲成人一二三区av| 亚洲人成网站在线播| 人人澡人人妻人| 午夜免费鲁丝| 亚洲情色 制服丝袜| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 2021少妇久久久久久久久久久| 日韩 亚洲 欧美在线| 丰满饥渴人妻一区二区三| 内地一区二区视频在线| 免费看av在线观看网站| 亚洲av在线观看美女高潮| 亚洲不卡免费看| 久久久久久人妻| 久久久精品免费免费高清| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 国产精品久久久久久av不卡| 亚洲人成网站在线播| 亚洲在久久综合| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 亚洲综合色网址| av国产久精品久网站免费入址| 香蕉精品网在线| 久久精品国产亚洲av涩爱| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产精品一区二区在线不卡| 一区二区三区乱码不卡18| 久久精品国产亚洲av天美| 十八禁网站网址无遮挡| 精品国产一区二区久久| videossex国产| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 精品国产乱码久久久久久小说| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 国产片内射在线| av电影中文网址| 精品亚洲成国产av| 天天操日日干夜夜撸| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产av国产精品国产| 啦啦啦啦在线视频资源| 蜜桃在线观看..| 免费高清在线观看视频在线观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 一级黄片播放器| 两个人免费观看高清视频| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 自线自在国产av| 亚洲少妇的诱惑av| 免费少妇av软件| 久久鲁丝午夜福利片| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 欧美xxⅹ黑人| 大陆偷拍与自拍| 国产极品天堂在线| 99热国产这里只有精品6| 啦啦啦在线观看免费高清www| 青青草视频在线视频观看| 能在线免费看毛片的网站| 日韩亚洲欧美综合| 亚洲欧美日韩另类电影网站| a级毛色黄片| av视频免费观看在线观看| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲av欧美aⅴ国产| 只有这里有精品99| 国产一区二区在线观看av| 欧美国产精品一级二级三级| 嫩草影院入口| 色吧在线观看| 母亲3免费完整高清在线观看 | 免费黄网站久久成人精品| 午夜影院在线不卡| 欧美激情 高清一区二区三区| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 久久免费观看电影| 日韩制服骚丝袜av| 国产片内射在线| 一本大道久久a久久精品| 丝袜脚勾引网站| 日本欧美国产在线视频| 少妇熟女欧美另类| 亚洲少妇的诱惑av| 国产欧美亚洲国产| 亚洲综合色惰| 欧美日韩av久久| kizo精华| 成人手机av| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 日韩三级伦理在线观看| 亚洲四区av| 精品一品国产午夜福利视频| 亚洲精品自拍成人| 人人澡人人妻人| 丝袜在线中文字幕| 精品一品国产午夜福利视频| 亚洲国产日韩一区二区| 国产免费福利视频在线观看| 国产精品偷伦视频观看了| 人人妻人人澡人人看| 国产亚洲最大av| 精品久久久精品久久久| 午夜激情福利司机影院| 在线观看人妻少妇| 91精品三级在线观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | av女优亚洲男人天堂| 国产一区二区三区综合在线观看 | 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 9色porny在线观看| av国产久精品久网站免费入址| 三级国产精品片| 精品久久久噜噜| 亚洲国产日韩一区二区| 美女大奶头黄色视频| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 欧美性感艳星| 亚洲四区av| 91精品国产九色| 国产淫语在线视频| 插逼视频在线观看| 亚洲国产av影院在线观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| av线在线观看网站| 黄色一级大片看看| 在线观看免费日韩欧美大片 | av视频免费观看在线观看| 亚洲美女黄色视频免费看| xxxhd国产人妻xxx| 久久精品国产亚洲网站| 免费大片黄手机在线观看| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产精品久久久久久精品电影小说| 尾随美女入室| av福利片在线| 老司机影院成人| 亚洲精品国产av成人精品| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 永久免费av网站大全| 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲精品成人av观看孕妇| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 久久久久人妻精品一区果冻| 99热这里只有精品一区| 日韩人妻高清精品专区| 热re99久久国产66热| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 91国产中文字幕| 精品国产国语对白av| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲欧洲国产日韩| 51国产日韩欧美| 九草在线视频观看| 97超视频在线观看视频| 亚洲五月色婷婷综合| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 久久久午夜欧美精品| 卡戴珊不雅视频在线播放| 精品人妻一区二区三区麻豆| 日韩av不卡免费在线播放| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 搡女人真爽免费视频火全软件| 久久97久久精品| 天天影视国产精品| 成人黄色视频免费在线看| 婷婷色综合www| 另类亚洲欧美激情| 日韩精品有码人妻一区| 熟女人妻精品中文字幕| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 精品一区在线观看国产| 亚洲av不卡在线观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 成人国产麻豆网| 最近手机中文字幕大全| 欧美激情 高清一区二区三区| 亚洲国产av影院在线观看| 精品一区二区三区视频在线| 人妻一区二区av| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 男人爽女人下面视频在线观看| 国产午夜精品一二区理论片| 国产免费福利视频在线观看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 超碰97精品在线观看| 精品国产一区二区三区久久久樱花| √禁漫天堂资源中文www| 特大巨黑吊av在线直播| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 99热这里只有是精品在线观看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 丰满乱子伦码专区| 日本91视频免费播放| 大香蕉久久成人网| 99久国产av精品国产电影| 久久av网站| av免费在线看不卡| 丰满饥渴人妻一区二区三| 在线天堂最新版资源| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 99久久精品一区二区三区| 欧美日韩精品成人综合77777| 成年人午夜在线观看视频| 伊人久久精品亚洲午夜| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产男女超爽视频在线观看| 一级毛片电影观看| 亚洲人成77777在线视频| 18+在线观看网站| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 日本欧美视频一区| 久久人人爽人人爽人人片va| 成年女人在线观看亚洲视频| 国产视频首页在线观看| a级片在线免费高清观看视频| 一级毛片电影观看| 国产成人一区二区在线| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产成人freesex在线| 久久97久久精品| 五月开心婷婷网| 精品少妇内射三级| 久久国产精品大桥未久av| 99九九在线精品视频| 99视频精品全部免费 在线| 一本久久精品| 欧美xxⅹ黑人| 国产成人aa在线观看| 视频在线观看一区二区三区| 青春草国产在线视频| 中文欧美无线码| 国产成人aa在线观看| .国产精品久久| 日韩成人av中文字幕在线观看| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲精品自拍成人| 天堂8中文在线网| 赤兔流量卡办理| 激情五月婷婷亚洲| 在线精品无人区一区二区三| 国精品久久久久久国模美| 亚洲中文av在线| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 制服丝袜香蕉在线| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 亚洲欧美清纯卡通| 男的添女的下面高潮视频| 人妻少妇偷人精品九色| 久久久午夜欧美精品| 国产69精品久久久久777片| 亚洲美女黄色视频免费看| 晚上一个人看的免费电影| 久久精品国产自在天天线| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国产成人91sexporn| videos熟女内射| 97超视频在线观看视频| 人妻 亚洲 视频| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲在久久综合| 91久久精品国产一区二区成人| 性高湖久久久久久久久免费观看| 美女cb高潮喷水在线观看| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产乱来视频区| 日本色播在线视频| av在线app专区| 在线观看三级黄色| 亚洲精品一二三| xxxhd国产人妻xxx| 精品国产露脸久久av麻豆| 色婷婷久久久亚洲欧美| 2022亚洲国产成人精品| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | av在线app专区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 人妻 亚洲 视频| 国产精品女同一区二区软件| 国产免费现黄频在线看| 国产精品嫩草影院av在线观看| 日韩av不卡免费在线播放| 啦啦啦啦在线视频资源| 亚洲国产av影院在线观看| 欧美精品高潮呻吟av久久| 亚洲欧洲日产国产| 国产探花极品一区二区| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 交换朋友夫妻互换小说| 久久99热6这里只有精品| 久久精品国产自在天天线| 国产日韩欧美亚洲二区| 少妇的逼好多水| 在线观看免费高清a一片| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产精品蜜桃在线观看| 成人黄色视频免费在线看| 999精品在线视频| 婷婷色综合大香蕉| 久热久热在线精品观看| av福利片在线| 内地一区二区视频在线| 精品久久久久久久久亚洲| 欧美 日韩 精品 国产| 26uuu在线亚洲综合色| 亚洲图色成人| 亚洲伊人久久精品综合| 国产精品久久久久久精品古装| 国产熟女午夜一区二区三区 | 男女啪啪激烈高潮av片| 免费黄色在线免费观看| 久久人妻熟女aⅴ| 一本一本综合久久| 亚洲av二区三区四区| 亚洲国产最新在线播放| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 热99国产精品久久久久久7| 男女免费视频国产| 男人爽女人下面视频在线观看| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲精品久久午夜乱码| 18+在线观看网站| 一本色道久久久久久精品综合| 国产在线一区二区三区精| 欧美日韩在线观看h| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产精品一区二区在线观看99| 久久国产亚洲av麻豆专区| 99精国产麻豆久久婷婷| 午夜福利视频精品| 亚洲在久久综合| 亚洲精品久久午夜乱码| 久久亚洲国产成人精品v| 97在线视频观看| 在线观看免费视频网站a站| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 在线免费观看不下载黄p国产| 在线天堂最新版资源| 好男人视频免费观看在线| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 亚洲精品久久午夜乱码| 午夜福利,免费看| 精品久久国产蜜桃| 黄色欧美视频在线观看| av在线观看视频网站免费| 免费黄色在线免费观看| 永久免费av网站大全| 中文字幕av电影在线播放| 99re6热这里在线精品视频| 久久久久人妻精品一区果冻| 人妻 亚洲 视频| 一边亲一边摸免费视频| 夜夜爽夜夜爽视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 伊人久久国产一区二区| 少妇丰满av| 婷婷色av中文字幕| 精品人妻偷拍中文字幕| 热99国产精品久久久久久7| 99视频精品全部免费 在线| 春色校园在线视频观看| 免费高清在线观看日韩| 免费黄色在线免费观看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 久久婷婷青草| 视频中文字幕在线观看| 永久网站在线| 妹子高潮喷水视频| av又黄又爽大尺度在线免费看| 高清视频免费观看一区二区| 大片免费播放器 马上看| 久久99一区二区三区| 青春草国产在线视频| 国产成人免费观看mmmm| 国产免费又黄又爽又色| 日韩成人av中文字幕在线观看| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 精品国产一区二区久久| 午夜免费男女啪啪视频观看| 99九九在线精品视频| 这个男人来自地球电影免费观看 | 一边亲一边摸免费视频| 少妇高潮的动态图| 亚洲欧美一区二区三区国产| 极品人妻少妇av视频| 97超碰精品成人国产| 精品卡一卡二卡四卡免费| 久久久午夜欧美精品| 国产日韩欧美亚洲二区| 黄片播放在线免费| 男女免费视频国产| 三上悠亚av全集在线观看| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲人成77777在线视频| 在线免费观看不下载黄p国产| 极品人妻少妇av视频| 熟女av电影| 99久久精品国产国产毛片| 国产 一区精品| 成人综合一区亚洲| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 边亲边吃奶的免费视频| 欧美成人午夜免费资源| 国产高清国产精品国产三级| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲精品中文字幕在线视频| 2018国产大陆天天弄谢| 色94色欧美一区二区| 少妇熟女欧美另类| 一本色道久久久久久精品综合| 91精品三级在线观看| 精品一区二区三区视频在线| 日韩精品有码人妻一区| 国产精品人妻久久久久久| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲精品日韩av片在线观看| h视频一区二区三区| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 日本与韩国留学比较| 国产免费又黄又爽又色| 91精品伊人久久大香线蕉| 一级,二级,三级黄色视频| av在线app专区| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲精品美女久久av网站| 大片免费播放器 马上看| 欧美一级a爱片免费观看看| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 毛片一级片免费看久久久久| 国产高清不卡午夜福利| 国产在视频线精品| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产精品国产三级国产专区5o| 久久精品国产自在天天线| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产精品免费大片| 国产毛片在线视频| 2021少妇久久久久久久久久久| av网站免费在线观看视频| 国产69精品久久久久777片| 亚洲美女视频黄频| 男人添女人高潮全过程视频| 成人漫画全彩无遮挡| 少妇高潮的动态图| 99久国产av精品国产电影| 18在线观看网站| 中文字幕免费在线视频6| 亚州av有码| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 男人操女人黄网站| 国产在线一区二区三区精| 夫妻午夜视频| 最近中文字幕2019免费版| 飞空精品影院首页| a级毛片免费高清观看在线播放| 夫妻性生交免费视频一级片| 蜜桃国产av成人99| 激情五月婷婷亚洲|