GC-MS法測(cè)定虎杖膏中龍腦與異龍腦的含量Δ

易學(xué)東，婁方明，蔡義云（1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，遵義市563000；.遵義醫(yī)學(xué)院，遵義市563000）

虎杖膏是我院自制的中藥外用制劑，由虎杖、冰片、麻油等制成，具有清熱解毒、消腫定痛之功效，用于治療紅腫而未潰爛的瘡、癰、疔、癤及無(wú)名腫毒等癥，在院內(nèi)使用20余年，療效明顯，安全可靠[1，2]。方中冰片具有抗菌、抗炎、止痛的功效[3]，是虎杖膏的主要成分之一。為控制該制劑質(zhì)量，筆者參考有關(guān)文獻(xiàn)[4]，采用氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）聯(lián)用法測(cè)定虎杖膏中龍腦與異龍腦的含量（冰片含量以龍腦和異龍腦含量之和計(jì)），取得了滿意效果。

1 儀器與試藥

6890-5973N型GC-MS聯(lián)用儀（美國(guó)Agilent公司）；BS224S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；SG3300H型超聲波清洗機(jī)（上海冠特超聲儀器有限公司）。

龍腦（批號(hào)：110881-200706）、異龍腦（批號(hào)：111512-200201）對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；虎杖膏（批號(hào)：20100608、20100726、20100805）及陰性樣品均由本院制劑室提供；甲醇和乙酸乙酯均為分析純（成都市科龍化工試劑廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液 精密稱取龍腦對(duì)照品15.01 mg，置10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯使溶解并稀釋至刻度，為龍腦對(duì)照品溶液；再精密稱取異龍腦對(duì)照品6.08 mg，置10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯使溶解并稀釋至刻度，為異龍腦對(duì)照品溶液；精密量取上述2種對(duì)照品溶液各2 mL，置同一10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，作為混合對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液 取虎杖膏約1 g，精密稱定，置250 mL具塞錐形瓶中，精密加入乙酸乙酯30 mL，稱定重量，超聲（功率：180 W，工作頻率：40 kHz）處理30 min，放冷，再稱定重量，用乙酸乙酯補(bǔ)足減失的重量，搖勻后靜置。吸取上清液，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，精密吸取1 mL，置10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯定容，進(jìn)樣。

2.1.3 陰性對(duì)照溶液 取缺冰片的陰性樣品約1 g，精密稱定，照“2.1.2”項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照溶液，即得。

2.2試驗(yàn)條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

2.2.1 GC條件 色譜柱：Agilent HP-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；程序升溫：初始溫度為50 ℃，以3 ℃·min-1升至110℃，再以10℃·min-1升至230℃；汽化室溫度：260℃；載氣：高純He，流速：1 mL·min-1；進(jìn)樣量：2 μL；分流比：20∶1。

2.2.2 MS條件 離子源溫度：230℃；四極桿溫度：150℃；電離方式：EI；電子能量：70 eV；溶劑延遲：5 min；質(zhì)量掃描范圍：30～500 amu。

2.2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別精密吸取混合對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液與供試品溶液各2 μL，注入色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果，異龍腦、龍腦的分離度均為2.5，其理論板數(shù)按異龍腦和龍腦峰計(jì)算分別為153 820和116 663。異龍腦對(duì)照品和龍腦對(duì)照品分離完全，陰性對(duì)照無(wú)干擾，供試品圖譜中在相同時(shí)間處出現(xiàn)與對(duì)照品同樣的峰，且基線較平、雜質(zhì)峰較少，并分離完全。GC-MS圖見圖1。

圖1 氣相色譜-質(zhì)譜圖A.混合對(duì)照品；B.陰性對(duì)照；C.供試品；1.異龍腦；2.龍腦Fig 1GC-MSA.mixed control；B.negative control；C.test sample；1.Isoborneol；2.borneol

2.3 線性關(guān)系考察

分別精密吸取混合對(duì)照品溶液0.2、0.5、1、1.5、2、2.5 mL，置10 mL容量瓶中，以乙酸乙酯定容，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以峰面積積分值（Y）對(duì)進(jìn)樣量（X，μg）進(jìn)行線性回歸，得異龍腦的回歸方程為Y＝1.14E+09X+3.54E+06（r＝0.999 7，n＝6），線性范圍為0.005～0.061 μg；龍腦的回歸方程為Y＝1.18E+09X+1.01E+07（r＝0.999 7，n＝6），線性范圍為0.012～0.150 μg。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一混合對(duì)照品溶液適量，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值。結(jié)果，異龍腦的RSD＝0.81%（n＝6），龍腦的RSD＝1.18%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品適量，按“2.1.2”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果，異龍腦含量的RSD＝1.60%（n＝6），龍腦含量的RSD＝1.39%（n＝6），表明該方法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取制備好的同一供試品溶液適量，按上述色譜條件于0、2、4、6、8、10 h測(cè)定峰面積。結(jié)果，異龍腦的RSD＝0.83%（n＝6），龍腦的RSD＝1.21%（n＝6），表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

取同一批號(hào)已知含量的虎杖膏樣品，精密稱取約0.5 g，共6份，分別精密加入異龍腦和龍腦對(duì)照品溶液適量，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.8 樣品含量測(cè)定

取3批虎杖膏適量，分別按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積計(jì)算樣品中異龍腦和龍腦的含量，結(jié)果見表2。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab 1Results of recovery tests（n＝6）

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（mg·g-1，n＝3）Tab 2Results of content determination of samples（mg·g-1，n＝3）

3 討論

虎杖膏中冰片的含量按處方的投料量計(jì)為23.0 mg·g-1，本次樣品含量測(cè)定結(jié)果均在處方投料量的90%以上?？紤]到原料冰片中含一定雜質(zhì)、批量生產(chǎn)過(guò)程中有損耗等因素，建議檢測(cè)虎杖膏中冰片的含量應(yīng)不低于投料量的85%，即不低于19.55 mg·g-1。

冰片是易揮發(fā)性物質(zhì)，在生產(chǎn)、運(yùn)輸、儲(chǔ)存中方法不當(dāng)均易造成其含量下降，從而影響藥品的處方比例組成，進(jìn)而影響藥品的療效，因此測(cè)定冰片的含量對(duì)控制藥品質(zhì)量有重要意義。

綜上，本方法穩(wěn)定、簡(jiǎn)便、靈敏、快速，可用于虎杖膏中龍腦與異龍腦的含量測(cè)定。

[1]黃 怡，王 為，匡菊香，等.虎杖膏的制備及臨床療效觀察[J].貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，30（2）：178.

[2]羅世惜，潘紅平，陳 羽，等.虎杖膏治療化療藥物引起的靜脈炎45例[J].陜西中醫(yī)，2006，27（2）：211.

[3]吳壽榮，程 剛，馮 巖.冰片藥理作用的研究進(jìn)展[J].中草藥，2001，32（12）：1 143.

[4]張開蓮，葉 云，王 俊，等.毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定雪抑樂(lè)中龍腦的含量[J].中國(guó)藥房，2007，18（30）：2 355.