HPLC法測定黃白鼻用凝膠中歐前胡素的含量

孫志強，陳修梅

(1.濟南三源藥業(yè)有限公司，山東 濟南250014;2.山東青年政治學(xué)院，山東濟南250103)

黃白鼻用凝膠中含有黃芪、白芷、白術(shù)等藥物，我們將提取、精制后的藥物提取物與卡波姆基質(zhì)混合制成了鼻用凝膠，用于治療鼻塞、鼻流涕、前額頭痛等鼻炎癥狀.制成鼻用凝膠劑，使其方便涂布于鼻腔黏膜上，并延長藥物與黏膜的接觸時間，充分發(fā)揮了藥物的療效.在對黃白鼻用凝膠的質(zhì)量研究中我們對君藥黃芪中黃芪甲苷的含量進行了測定，鑒于現(xiàn)代中藥需要多指標(biāo)控制制劑質(zhì)量的要求，故我們又重點研究了以HPLC法測定白芷中的歐前胡素的含量測定方法.

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC－2010A型高效液相色譜儀(日本島津SPD－10AVP檢測器，CLASS－VP工作站);AB135－S電子天平(瑞士梅特勒－托利多公司).

1.2 試藥 歐前胡素對照品(批號110826－200712)，購自中國藥品生物制品檢定所;乙腈、磷酸為色譜純;水為重蒸水;其余試劑均為分析純;黃白鼻用凝膠(批號20101105、20101106、20101107，自制).

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 色譜柱:島津C18柱(4.6 mm ×150 mm，5 μm);流動相:乙腈 －0.2%磷酸(60∶40)，流速為 1.0 mL·min－1;檢測波長為 300 nm［1，2］;進樣量 10 μL;理論板數(shù)按歐前胡素峰計應(yīng)不低于3 000.

2.2 對照品溶液的制備方法 精密稱取歐前胡素對照品適量，加甲醇使溶解，制成每1 mL含20 μg的溶液，混勻，即得.

2.3 供試品溶液的制備方法 取本品2.0 g，精密稱定，加入2 g硅藻土拌和均勻，置具塞三角瓶中，精密加甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理(功率300 W，頻率25 kHz)30 min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得.

2.4 陰性對照試驗 按制備工藝制備不含白芷的空白凝膠樣品，取2 g，照供試溶液的制備方法制備，按上述色譜條件測定，陰性對照溶液色譜中，在與歐前胡素峰相同保留時間處，無吸收峰.結(jié)果表明本品陰性對照無干擾，見圖1.

2.5 線性關(guān)系考察 精密稱取歐前胡素對照品10.33 mg，加甲醇制成每1 mL含20.66 μg的溶液，分別精密量取5，10，15，20，25 μL，進樣，測得峰面積，計算回歸方程為:Y=2 436 399.81X+17 751.90(r=0.999 9) .結(jié)果表明，歐前胡素進樣量在0.103 3～0.516 5 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好.

2.6 精密度試驗 取歐前胡素對照品溶液(20.66 μg·mL－1)，進樣 10 μL，連續(xù)進樣 5 次，結(jié)果峰面積平均值508 242，RSD=0.34%，表明儀器精密度良好.

圖1 HPLC色譜圖

2.7 穩(wěn)定性試驗 取樣品(批號20101105)，按前述方法制成供試品溶液，分別在第 0，4，8，12，18，24 h 進樣測定，計算含量，結(jié)果歐前胡素峰面積平均值為629 586，RSD=0.76%，表明供試樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定.

2.8 重現(xiàn)性試驗 取樣品(批號20101105)，分別5份，按前述方法制成供試品溶液，進樣測定，計算含量，結(jié)果歐前胡素含量平均值為0.304 6 mg·g－1， RSD 為0.68%，表明含量測定方法重現(xiàn)性良好.

2.9 加樣回收試驗 取樣品(批號20101105)5份(歐前胡素含量為 0.304 6 mg·g－1)，各 1.0 g，精密稱定，加入 2 g 硅藻土拌和均勻，置具塞三角瓶中，分別精密加入歐前胡素對照品的甲醇溶液(0.006 4 mg·mL－1)各 50 mL，再按前述方法制成供試品溶液，進樣，測定，計算回收率.結(jié)果平均回收率99.50%，RSD 為1.02%，結(jié)果見表1.

2.10 樣品含量測定 取20101105、20101106、20101107三批樣品，各取2 g，精密稱定，按前述方法制成供試品溶液，進樣，測定，結(jié)果見表2.

表1 加樣回收率結(jié)果

表2 三批樣品含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 對歐前胡素對照品溶液作光譜圖測定，結(jié)果在248 nm和300 nm處有兩個主要吸收峰;再以供試品溶液進液相測定，結(jié)果表明歐前胡素的吸收值在248 nm和300 nm波長下基本相當(dāng)，但在300 nm波長下樣品中歐前胡素峰分離度較好，故確定本品檢測波長為300 nm.

3.2 凝膠基質(zhì)對色譜柱的影響 黃白鼻用凝膠中以卡波姆940為凝膠基質(zhì)，卡波姆為高分子材料，為防止其對色譜柱的損害，參照文獻(xiàn)方法［3］，實驗中先以硅藻土吸附樣品，再以甲醇超聲提取的方法制備供試品溶液，則能避免卡波姆基質(zhì)進入液相系統(tǒng)中，經(jīng)多次試驗發(fā)現(xiàn)對色譜柱無影響.

［1］孫秀芝，吳艷軍，姜慧禎.HPLC法測定活絡(luò)鎮(zhèn)痛片中歐前胡素的含量［J］.齊魯藥事，2008，27(2):94 －96.

［2］張筱芳，沈敏，暢婕.RP－HPLC測定通竅鼻炎片中歐前胡素的含量［J］.解放軍藥學(xué)學(xué)報，2008，24(4):358 －360.

［3］邵珠民，呂冬梅，王濤，等.尿囊素凝膠的制備及含量測定［J］.中國藥房，2007，18(28):2205 －2207.