骨唾液酸蛋白基因沉默抑制乳腺癌細胞與骨基質粘附

王麗，王捷，楊德猛，楊傳紅，夏冰，王江濤，冼江

1 華南理工大學生物科學與工程學院，廣州 510006

2 廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院醫(yī)學實驗科，廣州 510010

骨唾液酸蛋白基因沉默抑制乳腺癌細胞與骨基質粘附

王麗1,2，王捷2，楊德猛1,2，楊傳紅2，夏冰2，王江濤2，冼江2

1 華南理工大學生物科學與工程學院，廣州 510006

2 廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院醫(yī)學實驗科，廣州 510010

旨在探索骨唾液酸蛋白 (Bone sialoprotein，BSP) 基因沉默對親骨轉移乳腺癌細胞 (MDA-MB-231BO) 與骨基質粘附能力的影響，為以BSP為靶點的乳腺癌骨轉移預防和靶向治療提供實驗依據(jù)。體外檢測BSP基因沉默對乳腺癌細胞與小鼠骨基質粘附能力的影響，MTS法檢測細胞增殖能力；掃描電鏡觀察骨片表面腫瘤細胞粘附情況和骨吸收狀況；ELISA法檢測骨基質細胞粘附培養(yǎng)上清中TGF-β1和RANKL表達分泌量差異；左心室注射法構建裸鼠骨轉移模型，檢測不同細胞株在裸鼠體內轉移能力。結果提示BSP基因沉默可抑制親骨轉移乳腺癌細胞與骨基質粘附能力和增殖能力。親骨轉移乳腺癌細胞易與骨基質發(fā)生粘附，粘附部位可見骨吸收造成的骨基質破壞。BSP基因沉默引起部分細胞表面形態(tài)的改變，并對TGF-β1和RANKL的表達和分泌具有抑制作用。裸鼠骨組織X線檢查和HE染色結果顯示，沉默BSP基因可在一定程度上抑制骨轉移發(fā)生和轉移灶發(fā)展。結果證實BSP基因沉默可抑制親骨轉移乳腺癌細胞增殖、骨基質粘附，影響細胞表面形態(tài)，進而抑制骨轉移。

骨唾液酸蛋白，基因沉默，乳腺癌，骨轉移，骨基質粘附

Abstract:We performed this research mainly to explore the effect of bone sialoprotein (BSP) silence by siRNA on the adhesion ability to bone matrix of bone-seeking breast cancer cells (MDA-MB-231BO). Also we aimed to provide experimental data for prevention and treatment of breast cancer bone metastasis by targeting BSP. We explored the effects of BSP gene silence on characteristics of bone-seeking breast cancer cells: proliferation by MTS[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium, inner salt] assay, bone adhesion ability by a mouse bone adhesion model in vitro, morphology of the cells by SEM, and secretion of transforming growth factor-β1(TGF-β1) and receptor activator ofnuclear factor-kappa B ligand (RANKL) by ELISA kits. We performed intra-cardiac injection in nude mice to explore bone metastatic ability of different cell lines. The results showed that knockdown of BSP significantly inhibited the proliferation of MDA-MB-231BO cells and their adhesion to bone matrix. We also observed bone destruction caused by bone resorption around some adhering cells. The appearances of the cells changed in BSP gene silenced group, and the secretion of TGF-β1and RANKL decreased. The results showed BSP gene silence can partial inhibition bone metastasis of breast cancer cells in nude mice by X-ray assay and hematoxylin-eosin staining. Based on our research, siRNA-mediated BSP silencing can inhibit proliferation and adhesion to bone matrix of bone-seeking breast cancer cells and change their surface structure, thus inhibits their bone metastatic ability.

Keywords:bone sialoprotein, gene silencing, breast cancer, bone metastasis, bone matrix adhesion

骨唾液酸蛋白 (Bone sialoprotein，BSP) 是一種高度磷酸化和糖基化的分泌性蛋白，富含唾液酸，平均分子量約 75 kDa，屬于 SIBLINGs (Small integrin-binding ligand N-linked glycoproteins) 家族成員。BSP主要分布在礦質化的組織中，由成骨細胞、破骨細胞以及軟骨細胞表達和分泌。1994年Bellahcence等首次闡述了BSP在易發(fā)生骨轉移的人乳腺癌中表達[1]。多項研究提示BSP在腫瘤的粘附、增殖、侵襲、基質降解、免疫反應 (炎癥和補體逃逸)、血管生成等轉移相關的多個過程中發(fā)揮重要作用。BSP cDNA全片段轉染的人乳腺癌細胞系MDA-MB-231-BAG可使裸鼠體內的乳腺癌轉移灶明顯增大[2]。在高表達 BSP的轉基因小鼠體內，乳腺癌導致的骨和全身性轉移灶明顯增加[3]。而下調BSP可以抑制乳腺癌細胞的骨轉移，減少溶骨性骨損傷面積[4]。轉化生長因子β (TGF-β) 是影響骨轉移進程的重要細胞因子之一，在破骨細胞進行骨吸收時儲存在骨中的TGF-β從骨中釋放，刺激乳腺癌細胞產生破骨細胞的強力趨化因子——甲狀旁腺激素相關蛋白，活化破骨細胞，促進骨吸收[5]。腫瘤細胞與骨基質粘附是乳腺癌骨轉移發(fā)生的關鍵環(huán)節(jié)之一，我們前期研究發(fā)現(xiàn) BSP單克隆抗體對MDA-MB-231BO和骨基質黏附具有特異抑制作用[5]，并通過RNAi技術獲得BSP基因抑制表達的乳腺癌細胞231BO-BSP27[6]。該細胞株BSP基因在mRNA水平和蛋白水平抑制效率分別為 70.8%和69.3%[6]，一段時間后 (超過20代) 再檢測BSP蛋白表達抑制率為 69.3%[7]，由此認為沉默效果基本穩(wěn)定。本研究擬檢測BSP基因沉默對231BO-BSP27與骨基質粘附能力的影響，并通過掃描電子顯微鏡觀察細胞表面形態(tài)及其在骨片表面的粘附情況。為深入研究 BSP在乳腺癌骨轉移中的調控機制，以及 BSP為靶點的乳腺癌骨轉移的預防和治療打下基礎。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與試劑

昆明種雌性小鼠[實驗動物合格證號(KM)060931](20±2)g，BALB/C-nu/nu 雌性裸鼠[實驗動物合格證號：0058418] (14~16) g，SPF級，由廣東中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供。親骨轉移乳腺癌細胞系 (MDA-MB-231BO，簡稱231BO) 由美國德州大學圣安東尼健康科學中心 Yoneda教授惠贈。經(jīng)siRNA重組逆轉錄病毒感染穩(wěn)定沉默 BSP基因表達的親骨轉移乳腺癌細胞系 (MDA-MB-231BO-BSP27，簡稱 231BO-BSP27) 和轉染無關質粒的陰性對照親骨轉移乳腺癌細胞系 (MDA-MB-231BO-Scrambled，簡稱 231BO-Scrambled) 由本實驗室制備[6]。小鼠TGF-β1 ELISA試劑盒購自博士德公司。小鼠RANKL ELISA試劑盒購自R&D公司。Ⅰ型膠原酶(201 U/mg) 購自 Gibco公司。胰蛋白酶購自Invitrogen公司。MTS購自 Promega公司。胎牛血清和DMEM培養(yǎng)液購自Hyclone公司。

1.2 細胞培養(yǎng)

231BO、231BO-BSP27、231BO-Scrambled乳腺癌細胞在含 10%胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)液、5%CO2、37 ℃條件下培養(yǎng)。

1.3 BSP基因沉默對親骨轉移乳腺癌細胞與骨基質粘附能力的影響

在24孔組織培養(yǎng)板中，將膠原酶和胰蛋白酶溶液處理的小鼠頂骨 (Parietal bones) 骨片固定于1%瓊脂表面[5,8]，各孔分別加入1 mL濃度為105個/mL的231BO、231BO-BSP27和231BO-scrambled細胞，對照組無腫瘤細胞。37 ℃、5% CO2孵育48 h。鏡下觀察骨片粘附情況。收集粘附到骨片上的細胞，經(jīng)過甲苯胺藍染色，測定OD488。以OD488值變化間接計算 3株腫瘤細胞與骨片粘附的相對數(shù)量差異，實驗重復4次，總計16組。粘附抑制率%= (1?沉默組 OD488/親代組 OD488) ×100%。

為驗證粘附差異是否由 3株細胞增殖速度不同造成，在無骨片的條件下按上述方法重復實驗，分別于24、48、72 h吸取細胞懸液100 μL轉移到96孔板，并通過MTS法檢測細胞增殖。其中24孔板做3個重復，96孔板做6個重復。增殖抑制率%=(1?沉默組 OD/親代組 OD)×100%，其中 OD=OD490?OD620。

1.4 掃描電鏡觀察腫瘤細胞粘附狀況

按1.3的方法將腫瘤細胞和骨片共培養(yǎng)72 h。經(jīng)3%戊二醛 (pH 7.0) 固定后，梯度脫水、冷凍干燥、濺射，掃描電鏡觀察骨片表面細胞形態(tài)及粘附狀況。以相同條件培養(yǎng)72 h但無腫瘤細胞的空白骨片作對照。

1.5 ELISA 檢測沉默 BSP 對 TGF-β1、RANKL表達的影響

用小鼠 RANKL ELISA檢測試劑盒和小鼠TGF-β1ELISA檢測試劑盒檢測上述48 h培養(yǎng)上清的RANKL和TGF-β1含量，以無腫瘤細胞的空白骨片和不添加骨片的細胞培養(yǎng)上清作對照。在450 nm檢測紫外吸收，以620 nm為參考波長。每個樣品做3個重復。

1.6 BSP基因沉默對乳腺癌細胞體內骨轉移能力的影響

將21只4~6周齡的雌性裸鼠隨機分為3組，每組7只，分別于左心室注射0.1 mL濃度為2.5×106個/mL的231BO、231BO-BSP27和231BO-scrambled細胞。第4周X射線檢查骨損傷程度。處死后取四肢骨組織，經(jīng)固定、脫鈣、石蠟包埋、冷凍切片，HE染色觀察組織切片轉移灶的有無、數(shù)量和大小。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

2 結果與分析

2.1 BSP基因沉默抑制乳腺癌細胞與骨基質粘附

將3種乳腺癌細胞分別與骨片共培養(yǎng)48 h，顯微鏡下可見 3種細胞在骨片表面結團生長，而空白對照組沒有。紫外分光光度計檢測結果顯示231BO-BSP27在488 nm處的吸光值明顯小于其他2組 (表1)。以上數(shù)據(jù)表明穩(wěn)定沉默BSP基因可以抑制親骨轉移乳腺癌細胞與骨基質的粘附，抑制率為48.53% (P＜0.01)，231BO-Scrambled組與 231BO組無顯著差異 (P＞0.05)。而且，BSP基因沉默對細胞粘附的抑制率明顯大于其對細胞增殖的抑制率，即沉默BSP可以抑制乳腺癌細胞與骨基質粘附能力。

表1 BSP基因沉默抑制231BO細胞與骨基質粘附 (n=16)Table 1 BSP silence inhibited the adhesion of 231BO cells to bone matrix (n=16)

MTS檢測 3種乳腺癌細胞 231BO、231BOBSP27、231BO-Scrambled在瓊脂表面的增殖能力，結果顯示 BSP基因沉默對親骨轉移乳腺癌細胞細胞增殖具有抑制作用 (圖1)。0 h各組細胞數(shù)量無明顯差異，在24 h、48 h和72 h的抑制率分別為17.40%、19.55%和 19.54% (P＜0.01)，231BO-Scrambled組與231BO組無顯著差異 (P＞0.05)。

圖1 BSP基因沉默對231BO細胞增殖的影響 (n=6)Fig. 1 BSP silence inhibited the proliferation of 231BO cells(n=6).

2.2 掃描電鏡觀察骨片表面細胞粘附和骨損傷狀況

掃描電鏡觀察可見，接種乳腺癌的骨片表面粘附大量細胞，而對照組沒有 (圖2A~2D)。粘附在骨片表面的 231BO-BSP27沒有其他 2株細胞排列密集，這一結論與前面檢測到的3株細胞的粘附差異相吻合，但因細胞分散不十分均勻，因此不能作為定量指標。部分細胞緊密粘附在骨片表面，并伸展成梭形 (圖 2E左側細胞)；部分細胞在發(fā)生粘附時出現(xiàn)結團現(xiàn)象，低倍鏡下呈現(xiàn)花樣外觀 (圖2A~2C)，高倍鏡下可見底層細胞與骨表面緊密粘附；部分細胞連接緊密，胞間分界不清晰 (圖2E)。乳腺癌細胞表面密布小突起和泡狀結構，通過表面伸出的絲狀結構緊密粘附于骨表面，并可見粘附細胞周圍明顯的骨質破壞 (圖2F)。高倍鏡觀察發(fā)現(xiàn)231BO-BSP27細胞中存在異常的細胞表面形態(tài) (圖 2G)——細胞表面相對光滑，泡狀結構明顯減少，表面凸起皺縮呈絨毛狀，細胞表面出現(xiàn)小孔 (圖 2G箭頭所示)。而 231BO和 231BO-Scrambled則未見此狀(圖 2F~2H)。由此可見BSP基因沉默可能導致細胞表面形態(tài)的改變，進而影響細胞粘附能力和親骨轉移能力。

2.3 BSP基因沉默抑制骨基質分泌 TGF-β1和RANKL

TGF-β1和RANKL的ELISA檢測結果 (圖3) 顯示，沉默BSP基因可以下調乳腺癌細胞與骨基質粘附過程中 TGF-β1和 RANKL的表達和分泌。其對TGF-β1的影響較大，與親代231BO相比抑制率可達51.92% (P＜0.01)，對RANKL也有一定影響，抑制率為 21.15% (P＜0.01)。而 TGF-β1和 RANKL 在另2個骨片細胞共培養(yǎng)組的表達量沒有顯著差異，細胞單獨培養(yǎng)各組差異也不顯著。但細胞和骨片共培養(yǎng)組表達量并不等于相應兩者單獨培養(yǎng)表達量之和，這一現(xiàn)象可能與培養(yǎng)環(huán)境、營養(yǎng)條件等多種因素相關。

圖2 SEM觀察粘附細胞表面超微結構Fig. 2 Surface ultrastructural characteristics of adhering cells as depicted under the SEM. (A) 231BO. (B) 231BO-BSP27. (C)231BO-Scrambled. (D) blank bone matrix. (E) 231BO-Scrambled. (F) 231BO. (G) 231BO-BSP27. (H) 231BO-Scrambled.

圖3 BSP基因沉默降低細胞與骨片共培養(yǎng)上清中TGF-β1(A) 和RANKL (B) 水平Fig. 3 BSP silence decreased the level of TGF-β (A) and RANKL (B) in cell-bone coculture supernatant, detected by the ELISA assay.

2.4 BSP基因沉默抑制乳腺癌細胞骨轉移發(fā)生

左心室注射模型是研究腫瘤細胞體內骨轉移能力的經(jīng)典方法。但心內注射容易引起小鼠死亡，建模難度較大。本研究中231BO組和231BO-scrambled組分別有2只裸鼠在心內注射2 h內死亡，因此未納入數(shù)據(jù)統(tǒng)計 (表2)。

表2 乳腺癌細胞在裸鼠體內的骨轉移率Table 2 Rates of breast cancer bone metastasis in nude mice

本研究X線照片檢查異常表現(xiàn)包括 (圖4)：骨皮質欠連續(xù)或缺損、骨膜反應、周圍軟組織腫脹、蟲蝕樣骨質破壞或大片骨質破壞、甚至病理性骨折。綜合3組裸鼠X光拍攝結果來看，231BO-BSP27組裸鼠比其他2組裸鼠骨損傷數(shù)目少，損傷度低。

正常的骨組織經(jīng)HE染色后可見完整的骨髓腔，腔內分散體積較小且均一的藍色骨髓細胞，以及一些分散的紅色血細胞。出現(xiàn)轉移灶的病理性骨組織中，腫瘤細胞比正常的骨髓細胞核漿比大，部分骨皮質因腫瘤細胞侵襲受到不同程度的損傷，許多腫瘤細胞聚集形成大小不規(guī)則的癌巢 (圖5)。

圖4 裸鼠骨損傷X光照片F(xiàn)ig. 4 X-ray scans of bone lesion of nude mice. (A) Healthy bone tissue. (B?D) Bone tissues with bone lesion.

圖5 骨組織HE染色結果Fig. 5 Results of HE stain of bone tissue. (A) Healthy bone tissue. (B?D) Bone tissues with breast cancer metastasis.

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)BSP與乳腺癌骨轉移密切相關。多項研究證實，下調BSP可以抑制乳腺癌細胞的骨轉移，減少動物模型中的溶骨性骨損傷面積。目前報道的降低BSP水平的方法有：反義核酸技術、BSP抗體抑制法、阻斷BSP的轉錄途徑——如通過氯丙嗪[9]、αvβ3[10]或 TGF-β 抗體[11]阻斷 BSP 表達，通過脂多糖(LPS)[12]或腫瘤壞死因子-α (TNF-α)[13]阻斷/促進蛋白激酶A和酪氨酸激酶依賴的途徑抑制BSP基因轉錄，或利用siRNA和shRNA技術沉默BSP[6]等。上述方法都能夠不同程度地降低細胞內BSP水平，然而，反義核酸技術雖然可以達到較高的沉默效率，僅僅是對BSP的瞬時沉默；雞源和鼠源抗體在人體內的免疫原性、體內運輸性差、毒副作用限制了BSP抗體藥物的發(fā)展。用 RNAi技術沉默親骨轉移乳腺癌細胞中的BSP，可以穩(wěn)定抑制BSP表達，有利于深入研究BSP在乳腺癌骨轉移中的調控機制，并為實現(xiàn)以BSP為靶點的乳腺癌骨轉移的預防和治療打下基礎。

乳腺癌細胞和骨基質的粘附是引起特異性骨轉移的前提之一。BSP可能通過調節(jié)粘附過程影響骨轉移，但目前國內外均未見有關BSP基因沉默與乳腺癌細胞骨基質粘附關系的報道。腫瘤細胞與小鼠顱骨的粘附模型[5,8]可以體外模擬人乳腺癌細胞親骨轉移的粘附過程，用于檢測細胞與骨的粘附能力，同時避免了異種移植引起的免疫反應。本研究將 3株乳腺癌細胞分別置于經(jīng)膠原酶消化的骨片表面培養(yǎng)，體外檢測其粘附能力，證實穩(wěn)定沉默BSP基因可抑制親骨轉移乳腺癌細胞與骨基質粘附，抑制率約48.53%。由于骨基質主要由I型膠原和非膠原蛋白組成，而乳腺癌一般不會發(fā)生以膠原為主要成分的組織轉移 (如韌帶、皮膚) 因此推測乳腺癌骨轉移是通過腫瘤細胞與骨礦物質或破骨細胞結合實現(xiàn)的。小鼠骨片經(jīng) I型膠原酶消化后，骨組織細胞充分暴露，有利于與乳腺癌細胞相互作用，發(fā)生粘附。底層瓊脂的加入可避免腫瘤細胞貼壁發(fā)生，可更好地模擬體內環(huán)境。

掃描電子顯微鏡可用于觀察細胞表面形態(tài)，但未見將其應用于觀察骨表面粘附腫瘤細胞的表面形態(tài)的報道，將之用于BSP基因沉默的親骨轉移乳腺癌細胞及其親代細胞的觀察也屬首次。結果顯示沉默BSP并不能完全抑制親骨轉移乳腺癌細胞粘附到骨基質表面，但是與親代細胞和 Scrambled細胞相比粘附細胞量有所減少。由于細胞分散不是十分均勻，且觀察視野有限，因此不能作為定量指標。部分乳腺癌細胞出現(xiàn)結團粘附，緊密粘附細胞在骨片表面伸展成梭形，底層細胞與骨表面緊密粘附，上層細胞通過與底層細胞的連接固定于骨片表面。乳腺癌細胞表面密布小突起和泡狀結構，通過表面伸出的絲狀結構緊密粘附于骨表面。BSP沉默還導致了部分細胞表面形態(tài)的改變。粘附細胞可造成周圍骨質的明顯破壞，但由于培養(yǎng)時間較短和腫瘤細胞的遮蓋，未見明顯的骨吸收陷窩。

裸鼠體內試驗結果有力地印證了上述結論。乳腺癌骨轉移的發(fā)生包含血管內滲、侵襲和粘附等多個環(huán)節(jié)，通過RNAi技術沉默BSP基因可以有效抑制親骨轉移乳腺癌細胞形成轉移灶。

BSP基因沉默影響其與骨基質粘附可能原因有多種，本實驗用 MTS法證實了BSP基因沉默可抑制乳腺癌細胞增殖。TGF-β和 RANKL是影響骨轉移進程的重要細胞因子，可促進乳腺癌細胞與破骨細胞相互作用，促進溶骨性骨轉移。Nam等[11]用抗TGF-β單克隆抗體處理乳腺癌小鼠模型，發(fā)現(xiàn)肺轉移細胞中BSP表達下調，體外實驗顯示敲除BSP基因能夠抑制TGF-β誘導局部膠原蛋白的降解和腫瘤細胞的侵襲能力。而且BSP Mab[5]和BSP基因沉默對骨基質中TGF-β1和RANKL的分泌均具有抑制作用。因此，對這一環(huán)節(jié)的影響也可能是BSP基因沉默抑制骨基質粘附的重要途徑之一。此外，由于BSP的酸性多聚谷氨酸區(qū)域可提供與礦化基質結合的空間，RGD序列可與αVβ3結合，促進乳腺癌細胞與骨組織粘附發(fā)生，活化破骨細胞產生溶骨性骨吸收，從而促進乳腺癌細胞的骨轉移進程[14]。BSP還能夠促進體外破骨細胞表達并激活破骨細胞分化標志物(如Cathepsin K、TRAP和NFAT2)，加速以自分泌方式進行的破骨細胞分化，進一步促進乳腺癌的溶骨性骨轉移[3]。但是其具體的調控機制目前不是十分清晰，有待進一步研究證實。

REFERENCES

[1] Bellahcène A, Merville MP, Castronovo V. Expression of bone sialoprotein, a bone matrix protein, in human breast cancer. Cancer Res, 1994, 54(11): 2823?2826.

[2] Tu Q, Zhang J, Fix A, et al. Targeted overexpression of BSP in osteoclasts promotes bone metastasis of breast cancer cells. J Cell Physiol, 2009, 218(1): 135?145.

[3] Sharp JA, Waltham M, Williams ED, et al. Transfection of MDA-MB-231 human breast carcinoma cells with bone sialoprotein (BSP) stimulates migration and invasion in vitro and growth of primary and secondary tumors in nude mice. Clin Exp Metastasis, 2004, 21(1): 19–29.

[4] Peterschmitt J, B?uerle T, Berger MR. Effect of zoledronic acid and an antibody against bone sialoprotein II on MDA-MB-231GFPbreast cancer cells in vitro and on osteolytic lesions induced in vivo by this cell line in nude rats. Clin Exp Metastasis, 2007, 24(6): 449?459.

[5] Gong YJ, Wang J, Song HX, et al. Inhibitory effects of bone sialoprotein monoclonal antibody on bone-seeking breast cancer cells adhering to bone matrix. Chin J Cancer Biotherapy, 2007, 14(6): 536?539.

龔應靜, 王捷, 宋惠雪, 等. 骨涎蛋白單克隆抗體對親骨轉移乳腺癌細胞與骨基質黏附的抑制. 中國腫瘤生物治療雜志, 2007, 14(6): 536?539.

[6] Yang ZF, Wang J, Zhang HB, et al. Inhibition of BSP gene expression in breast cancer cells by retrovirally mediated RNAi. J Med Mol Biol, 2009, 6(5): 415?419.

楊自飛, 王捷, 張宏斌, 等. 逆轉錄病毒載體介導的RNAi抑制乳腺癌細胞BSP基因表達. 醫(yī)學分子生物學雜志, 2009, 6(5): 415?419.

[7] Yan H, Wang J, Yang ZF, et al. Effects of BSP RNAi on human breast cancer cell line MDA-MB231BO.Biotechnol Bull, 2010(6): 142?145.

燕慧, 王捷, 楊自飛, 等. BSP基因RNA干擾對乳腺癌MDA-MB-231BO細胞生物學特性的影響. 生物技術通報, 2010(6): 142?145.

[8] Du HY, Wang J, Yang J, et al. Studies on the effects of BSP over-expression in facilitating the metastasis of breast cancer cells to bone. Med J Chin PLA, 2007, 32(8):815?817.

杜紅延, 王捷, 楊靜, 等. 骨唾液蛋白 (BSP) 高穩(wěn)定表達對乳腺癌骨轉移的促進作用. 解放軍醫(yī)學雜志, 2007,32(8): 815?817.

[9] Nakajima Y, Kato N, Nakayama Y, et al. Effect of chlorpromazine on bone sialoprotein (BSP) gene transcription. J Cell Biochem, 2006, 97(6): 1198?1206.

[10] Bellahcène A, Boniean K, Fohr B, et al. Bone sialoprotein mediates human endothelial cell attachment and migration and promotes angiogenesis. Circ Res, 2000, 86(8):885?891.

[11] Nam JS, Suchar AM, Kang MJ, et al. Bone sialoprotein mediates the tumor cell–targeted prometastatic activity of transforming growth factor β in a mouse model of breast cancer. Cancer Res, 2006, 66(12): 6327?6335.

[12] Kato N, Nakayama Y, Nakajima Y, et al. Regulation of bone sialoprotein (BSP) gene transcription by lipopolysaccharide. J Cell Biochem, 2006, 97(2): 368?379.

[13] Samoto H, Shimizu E, MatsudaHonjo Y, et al. TNF-alpha suppresses bone sialoprotein (BSP) expression in ROS17/2.8 cells. J Cell Biochem, 2002, 87(3): 313?323.

[14] Uemura T, Liu YK, Feng Y, et al. The role of sialoprotein in recognition of bone surface by osteoblast via integrin.Mat Sci Eng, 1997, C4(4): 303?309.

Inhibitory effect of bone sialoprotein silencing on the adhesion ability of breast cancer cells to bone matrix

Li Wang1,2, Jie Wang2, Demeng Yang1,2, Chuanhong Yang2, Bing Xia2, Jiangtao Wang2,and Jiang Xian2
1 School of Bioscience and Bioengineering, South China University of Technology, Guangzhou 510006, China
2 Department of Medical Research, Guangzhou General Hospital of Guangzhou Military Command, Guangzhou 510010, China

Received: June 21, 2010; Accepted: September 25, 2010

Supported by: National Natural Science Foundation of China (No. 30700127), Hunan Provincial Natural Science Foundation of China (No. 08JJ3087).

Corresponding author: Zhonghua Liu. Tel: +86-731-8872556; Fax: +86-731-8861304; E-mail: liuzh@hunnu.edu.cn

國家自然科學基金 (No. 30700127)，湖南省自然科學基金 (No. 08JJ3087) 資助。