不同基質(zhì)對復方卡力孜然凝膠劑主要活性成分體外透皮吸收的影響

邢建國， 趙 媛， 王新春，， 薛桂蓬， 袁 勇，， 馬建紅， 陳衛(wèi)軍

(1．新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所，新疆 烏魯木齊830004;2．石河子大學藥學院，新疆 石河子832002;3．石河子大學醫(yī)學院一附院，新疆石河子832008)

復方卡力孜然是維吾爾民族用于治療白癜風的經(jīng)典名方［1-3］，由補骨脂、蛇床子、驅蟲斑鳩菊、何首烏等十味藥材組成。具有祛風燥濕、活血化瘀、舒經(jīng)活絡之功效［4-6］。凝膠劑作為中藥制劑的外用劑型具有性能穩(wěn)定、質(zhì)量可控、黏附性強、易于清潔、不污染衣物等特點，適合用于皮膚、黏膜及腔道給藥［7-8］。本實驗以補骨脂素、異補骨脂素和蛇床子素的累積透過量和透皮速率為指標，考察不同基質(zhì)凝膠劑的體外透皮特性，為凝膠劑基質(zhì)處方研究的合理性提供一定的依據(jù)。

1 儀器與試藥

補骨脂素、異補骨脂素和蛇床子素(批號分別為:110739-200613，110738-200511，110822-200406均由中國藥品生物制品檢定所提供);復方卡力孜然提取物浸膏(新疆自治區(qū)要物研究所提供);卡波姆940(Cp，武漢銀河化工有限股份公司);羧甲基纖維素鈉(CMC-Na，山東聊城阿華制藥有限公司)聚乙烯吡咯烷酮(PVP，德國BASF，批號:061010);甲醇為色譜純，其余試劑為分析純;水為超純水;皮膚來源:昆明種小鼠(新疆醫(yī)科大學動物實驗中心，新醫(yī)動字第2003-0001號)。

SPD-10AVP型高效液相色譜儀(日本島津);BP211D型十萬分之一電子天平(Sartorius);Millipore simplicity-185超純水器(美國密理博公司);KQ-100DE型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);ZTY智能透皮試驗儀TP3A(鞏義市英峪予華儀器廠)。

2 方法和結果

2．1 凝膠劑的制備 分別稱取處方量的提取物浸膏與巴布劑基質(zhì)混合后過100目篩，加入處方量的甘油、無水乙醇及適量蒸餾水，攪拌均勻后放置過夜，最后加入氮酮、吐溫-80等其他輔料，攪拌均勻后即得。(以卡波姆為基質(zhì)的凝膠最后用適量的三乙醇胺，調(diào)節(jié)pH至6～7即得)。

2．2 補骨脂素、異補骨脂素及蛇床子素分析方法的建立

2．2．1 色譜條件［9］色譜柱:SHIMADZU VP-ODS(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流動相為甲醇(A)-0．4%磷酸(B)，梯度洗脫(0 min，51%A;15 min，51%A;21 min，74%A;40 min，74%A);雙波長檢測:245 nm(檢測補骨脂素、異補骨脂素)，322 nm(檢測蛇床子素);體積流量:1 mL/min;柱溫為35℃;進樣量:10μL。色譜圖見圖1～2。

圖1 對照品A、樣品B及陰性C(缺補骨脂)

圖2 對照品D(蛇床子素)、樣品E及陰性F(缺蛇床子)

2．2．2 標準曲線的制備 精密吸取含有11．5μg/mL補骨脂素和9．6μg/mL異補骨脂素的混合對照品貯備液 1、3、5、7、10 mL，分別置 10 mL 棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得補骨脂素及異補骨脂素系列對照品溶液。精密吸取10．2μg/mL蛇床子素對照品貯備液 1、2．5、5、7．5、10 mL，分別置10 mL棕色量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得蛇床子素系列對照品溶液。分別精密吸取上述溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，以對照品濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，分別得到補骨脂素、異補骨脂素及蛇床子素的線性回歸方程:Y補骨脂素=70 771X+3 335(r=0．999 9)，Y異補骨脂素=87 318X+5 963．3(r=0．999 6);Y蛇床子素=39 080X+7 326(r=0．999 5)。補骨脂素1．15 ～11．50 μg/mL、異補骨脂素0．96～9．60 μg/mL、蛇床子素 1．02 ～10．20 μg/mL與峰面積線性關系良好。

2．2．3 供試品溶液制備 取凝膠劑約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2．2．4 陰性對照溶液制備 按凝膠劑制備方法分別制備不含補骨脂和蛇床子的樣品凝膠劑，按2．2．3項的方法制成相應的陰性樣品溶液，在上述色譜條件下進樣，記錄色譜圖。

2．3 體外透皮擴散試驗

2．3．1 離體鼠皮的制備 體質(zhì)量(20±2)g健康小鼠，用剪刀小心剪去小鼠腹部的絨毛，再用剃須刀刮干凈，注意別弄破皮膚。脫頸處死小鼠，迅速剝離小鼠腹部皮膚，清理殘余的皮下組織和脂肪，浸在生理鹽水中，備用。

2．3．2 試驗方法 采用透皮擴散試驗儀的立式玻璃擴散池，容積為 17．0 mL，擴散面積為 1．3 cm2，將鼠皮置于擴散池與接收池之間，皮膚真皮面向接收池。接收液為40%乙醇生理鹽水，透皮擴散試驗儀溫度為(37±0．2)℃，磁攪拌子轉速為(300．0±1．0)r/min。將凝膠劑均勻涂抹于皮膚角質(zhì)層上，分別于2、4、6、8、10、12 h 吸取接收液 1．0 mL，0．45 μm微孔濾膜濾過，同時于接受池中補充1．0 mL接收液。用2．2項下方法分別測定補骨脂素、異補骨脂素和蛇床子素。按下式計算累積滲透量Q和透皮速率J。

其中:Qn為累積滲透量，Cn，Ci為第n和i次取樣點藥物濃度(μg/mL)，V為擴散池體積，Vi為取樣液體積，A為滲透面積。

2．3．3 基質(zhì)材料的篩選 以成型性為指標，進行單因素試驗，確定制備凝膠劑的基質(zhì)材料分別為2%CP、8%HPMC、2%CMC-Na、2%CP+1%PVP。分別配制4種基質(zhì)材料的復方卡力孜然凝膠劑。將制得的凝膠劑分別按2．3．2項中的方法進行體外滲透實驗，計算12 h累積滲透量Q，將累積滲透量對t進行回歸，繪制Q-t曲線，得復方卡力孜然凝膠劑中補骨脂素、異補骨脂素和蛇床子素的體外透皮動力學方程及滲透速率。結果，補骨脂素、異補骨脂素和蛇床子素3種有效成分從4種凝膠基質(zhì)中的透皮特性均符合Higuchi方程，其中以2%CP和2%CP+1%PVP的凝膠中透皮速度較快，8%HPMC透皮速度次之，而2%CMC-Na的透皮速度最慢。4種凝膠基質(zhì)中3種有效成分的累積滲透量Q均與t1/2呈良好線性關性，提示體外滲透藥動學均符合符合Higuchi方程。見表1～表3。

表1 不同基質(zhì)材料對補骨脂素滲透率的影響

表2 不同基質(zhì)材料對異補骨脂素滲透率的影響

表3 不同基質(zhì)材料對蛇床子素滲透率的影響

3 討論

3．1 卡波姆是一種由丙烯酸與烯丙基蔗糖交聯(lián)而成的高分子聚合物，是一種多用途的高分子材料和藥用輔料。其中卡波姆940是外用凝膠劑的理想材料，具有釋藥快、無油膩性、易于涂展、對皮膚及黏膜無刺激性等特點［10-11］。PVP具有吸水膨脹性，與卡波姆伍用可以使生成的凝膠網(wǎng)狀結構相對疏松，孔道增多，從而增加藥物溶出［12］，本實驗的研究與文獻報道一致，2%CP940與1%PVP伍用，較單用CP940更能提高3種有效成分的經(jīng)皮透過率。結合該實驗結果，兼顧成本、制備工藝等其他因素，最終選用卡波姆為復方卡力孜然凝膠劑的基質(zhì)材料。

3．2 凝膠劑常用基質(zhì)包括:卡波姆(CP)、羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)、羥丙甲纖維素(HPMC)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯醇(PVA)等。各種基質(zhì)的性質(zhì)不同，對藥物從凝膠中釋放的影響不同。弱酸弱堿藥物以分子和離子的形式存在，決定于基質(zhì)的酸堿性，以分子形式存在，有利于藥物的體外釋放和透皮吸收［12］。本實驗所用原料藥浸膏粉pH值約為4．2，在弱酸性卡波姆基質(zhì)中，3種有效成分大多以分子形式存在，因此，與基質(zhì)HPMC和CMC-Na相比，具有較高的累積釋放量和透皮速率。

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