結(jié)合珠蛋白遺傳多態(tài)性與肥胖的關(guān)系

劉國(guó)棟，李艷波，徐 瑩，毛 楠，李 敏

(哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院內(nèi)分泌科，哈爾濱 150001)

肥胖癥是由于遺傳和環(huán)境因素的相互作用所造成的代謝紊亂性疾病，有研究認(rèn)為肥胖是一種慢性全身性輕度炎癥狀態(tài)［1］。Hannerz等［2］的研究指出，結(jié)合珠蛋白(haptoglobin，Hp)可能作為肥胖癥一種新的標(biāo)志物。Hp作為一種重要的脂肪細(xì)胞因子，在肥胖及與肥胖相關(guān)的各種疾病中扮演著重要的角色。本研究旨在于檢測(cè)肥胖患者血中Hp表型和Hp基因頻率的分布，并分析其與肥胖癥之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選自在哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院體檢中心及門(mén)診進(jìn)行體檢的人群，年齡20～62歲，共180例，均為黑龍江地區(qū)居住的漢族人。排除標(biāo)準(zhǔn):①患有可能影響糖脂代謝的其他內(nèi)分泌疾病者。②應(yīng)激、感染，肝、腎功能異常者。③腫瘤、心肌梗死、皮膚病、支氣管哮喘等病理狀態(tài)。④受試前接受過(guò)降糖、調(diào)脂、減肥治療者。根據(jù)2003年4月衛(wèi)生部疾病控制司公布的《中國(guó)成人超重和肥胖癥預(yù)防控制指南》，成人體質(zhì)量指數(shù)≥24 kg/m2為超重，體質(zhì)量指數(shù)≥28 kg/m2為肥胖，將試驗(yàn)人群分為兩組:正常對(duì)照組60例(男性和女性各30例)、肥胖組120例(男性和女性各60例)。正常對(duì)照組和肥胖組的年齡分別為(39.85 ±12.11)歲和(38.85±11.48)歲;體質(zhì)量指數(shù)分別為(22.12 ± 1.17)kg/m2和(28.10 ±1.37)kg/m2;腰圍分別為(78.26 ±6.24)cm和(91.71 ±6.53)cm。

1.2 實(shí)驗(yàn)室檢查 所有受試者禁食10 h后，第2天清晨抽取外周靜脈血標(biāo)本5 mL靜置30 min，然后以每3000 r/min離心 15 min，吸取血清于 1.5 mL Eppendorf管中，標(biāo)記后置于－80℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣本的制備 取外周靜脈血，自然凝血后取血清，在－70℃ 低溫下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 10%(100 g/L)血紅蛋白的制備 移取新鮮抗凝血液，離心后去血漿，以10倍體積的生理鹽水洗滌紅細(xì)胞3～4次，最后一次 3000 r/min離心20 min，盡量移去鹽水成分，然后以等體積蒸餾水及0.5倍體積的四氯化碳混合，劇烈振蕩5 min后，離心20 min(2500 r/min)，吸取上層血紅蛋白溶液，測(cè)定其濃度，并精確稀釋成100 g/L，－20℃ 保存。

1.3.3 樣品的制備 取待檢血清100 μL，加入10%血紅蛋白5 μL，10 min后加入20μL凝膠上樣緩沖液混勻備用。

1.3.4 凝膠的制備 積層膠:5%聚丙烯酰胺凝膠，分離膠:9%聚丙烯酰胺凝膠。

1.3.5 上樣及電泳 將5 μL樣品加樣于凝膠梳孔60 V，10 mA電泳40 min，然后換90 V，10 mA 電泳12 h，電泳槽緩沖液為pH 8.3的Tris-Gly緩沖液。電泳結(jié)束后，取出膠板用考馬斯亮藍(lán)染色液染2 h，然后用蒸餾水漂洗多次，再用脫色液脫色直到蛋白質(zhì)區(qū)條帶清晰。

1.4 結(jié)果判讀 根據(jù)Smithies方法，依據(jù)帶譜的分布情況，判斷Hp的分型。游離血紅蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量小，其遷移率最快，在陽(yáng)極端出現(xiàn)一條粗帶，每個(gè)樣品均有。陽(yáng)極端游離血紅蛋白帶之后，僅有一條粗帶者為Hp1-1型。在陰極端有多條帶，而陽(yáng)極端無(wú)帶者為Hp2-2型。在兩者中間多一條帶者為Hp2-1型(圖1)。

圖1 血清Hp電泳分型

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SAS 9.1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，兩組年齡、體質(zhì)量指數(shù)、腰圍的差異比較，采用t檢驗(yàn);兩組間基因表型和基因頻率的差異比較，采用χ2檢驗(yàn)，組間兩兩比較采用 χ2分割法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05/3=0.017。

2 結(jié)果

正常對(duì)照組與肥胖組基因表型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.0214，P=0.0299)(表 1)。肥胖組的Hp2基因頻率高于正常對(duì)照組(χ2=9.5100，P=0.0020)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表2)。

表1 正常對(duì)照組與肥胖組基因表型比較 ［例(%)］

表2 正常對(duì)照組與肥胖組基因頻率比較 (%)

3 討論

Hp是血清遺傳學(xué)的一個(gè)重要標(biāo)志物，Hp的分子結(jié)構(gòu)類(lèi)似免疫球蛋白，是受遺傳支配的多形性蛋白，由兩條輕鏈(α鏈)和兩條重鏈(β鏈)組成四聚體，Hp的多態(tài)性主要是α鏈的遺傳變異造成α鏈有α1和α2兩種，α1又有α1F和α1S兩種遺傳變異體，呈共顯性遺傳，因此可以形成最常見(jiàn)的三種基因型Hp1-1、Hp2-1 和 Hp2-2［3］。由位于16 號(hào)染色體長(zhǎng)臂上的Hp1和Hp2兩個(gè)等位基因所決定，具有遺傳多態(tài)現(xiàn)象。已有研究證實(shí)，Hp1基因被認(rèn)為在許多疾病，如肝炎、肝癌、肝硬化、肺癌、肺氣腫、白血病中有較高的疾病遺傳易感性［4，5］。但 Hp1基因的作用機(jī)制尚不清楚。有研究認(rèn)為Hp1基因與機(jī)體免疫功能有關(guān)，對(duì)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的功能有調(diào)節(jié)作用，在炎性反應(yīng)中可能有控制組織損傷的功能。

肥胖個(gè)體往往伴有高胰島素血癥和胰島素抵抗［6］。目前，國(guó)外已對(duì)Hp基因多態(tài)性與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(簡(jiǎn)稱(chēng)冠心病)的關(guān)系進(jìn)行了廣泛的研究［7-9］，并取得了眾多Hp基因多態(tài)性與冠心病發(fā)生發(fā)展的研究證據(jù)，如Hp2-2基因是冠心病發(fā)生的促進(jìn)因素，特別是在糖尿病、阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征等高危人群中，Hp2-2基因也是冠心病患者轉(zhuǎn)歸及預(yù)后的不利因素，同時(shí)也影響著抗氧化藥物預(yù)防冠心病的療效等。而肥胖是冠心病發(fā)生的主要危險(xiǎn)因素之一，認(rèn)為Hp表型可能與肥胖癥的發(fā)生有關(guān)，肥胖的發(fā)生具有遺傳易感性。本研究結(jié)果表明，肥胖組Hp2-2基因型高于正常對(duì)照組，表明以Hp2-2基因型為主的人群可能對(duì)肥胖有遺傳易感性。研究結(jié)果表明，與正常對(duì)照組相比，肥胖組患者Hp2基因頻率明顯增高，表明Hp2基因肥胖患者中有聚集現(xiàn)象。肥胖癥的遺傳易感性增加與Hp2基因有某種內(nèi)在聯(lián)系，Hp2基因可能在肥胖癥的發(fā)生中起一定作用。

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