利用手性固定相高效液相色譜法對焦谷氨酸對映異構體的分離

于海云 宋俊梅 陳志叢

焦谷氨酸是一種具有多種天然生理活性的特殊氨基酸，在醫(yī)藥合成研究方面，它可以作為不對稱合成的手性源及合成中間體，在生物學、精細化工等相關領域研究中亦有重要地位關的報道[1]。但因其存在D、L-焦谷氨酸兩種手性對映異構體，而這兩種手性對映體又存在不同的活性和功能差異，因此對其進行拆分研究對于焦谷氨酸的合成研究和生物提取應用研究有著重要意義。

1 儀器與試藥

Waters型高效液相色譜儀(美國)，PDA檢測器;正己烷為色譜純，異丙醇為色譜純，冰乙酸為分析純，三乙胺為分析純。D-焦谷氨酸(New Jersey，USA);L-焦谷氨酸(四川峨眉山榮高生化制品有限公司)。

2 實驗方法與結果

2.1 溶液的制備 精密稱取D-焦谷氨酸、L-焦谷氨酸，分別加異丙醇溶解并稀釋制成每1 ml中含3 mg的溶液;再精密稱取D-焦谷氨酸、L-焦谷氨酸適量，加異丙醇溶解并稀釋制成每1 ml中各含3 mg的混合溶液。

2.2 色譜條件 色譜柱:CHIRALPAK AD-H(0.46 cm I.D.×25 cm L)，正己烷-異丙醇-冰乙酸-三乙胺(90∶10∶0.1∶0.1)為流動相，進樣量:20ul。

2.3 檢測波長的選擇精密量取供試品溶液20ul，注入液相色譜儀，記錄光譜圖，結果顯示D/L-焦谷氨酸最大吸收在205nm，我們選擇205nm作為本品的測定波長。

2.4 分離度試驗 精密量取取D-焦谷氨酸、L-焦谷氨酸、D、L-焦谷氨酸混合溶液各20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，色譜圖見圖1、圖2、圖3。

圖1 D-焦谷氨酸色譜圖 圖2 L-焦谷氨酸色譜圖 圖3 D、L-焦谷氨酸色譜圖

在該色譜條件下，D、L-焦谷氨酸分離度良好。

2.5 最小檢出限試驗 用顯示基線噪音的分析方法，把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，以信噪比3∶1時確定檢測限為0.06 μg。

2.6 精密度試驗 精密量取D、L-焦谷氨酸混合溶液20 μl，注入液相色譜儀，連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖，D-焦谷氨酸RSD為0.61%，L-焦谷氨酸 RSD為0.78%。精密度試驗良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取D、L-焦谷氨酸混合溶液，置暗處放置，分別于 0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h 精密量取供試品溶液20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。D-焦谷氨酸 RSD為0.73%，L-焦谷氨酸RSD為0.70%。供試品溶液在12 h內穩(wěn)定。

3 結論

利用高效液相色譜法在手型固定相上直接分離焦谷氨酸對映異構體，操作方法快捷簡便，精密度高、穩(wěn)定性好，結果準確可靠，能有效分離焦谷氨酸對映異構體，可用于實際樣品的定量分析，此方法具有較高的實用價值。

[1]范毅，馮鈺锜，彭劍民.焦谷氨酸對映體的手性高效液相色譜分離.藥物分析雜志，2005，25(4).