左金丸及反左金丸對寒性功能性胃腸疾病*模型大鼠腦及胃腸組織c-fos表達的影響

馮淑怡，崔海峰，楊 威，周艷華，黃 穎，孫明杰△

(1.中國中醫(yī)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實驗中心，北京 100700;2.中國中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所，北京 100700)

左金丸及反左金丸對寒性功能性胃腸疾病*模型大鼠腦及胃腸組織c-fos表達的影響

馮淑怡1，崔海峰1，楊 威2，周艷華1，黃 穎1，孫明杰1△

(1.中國中醫(yī)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實驗中心，北京 100700;2.中國中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所，北京 100700)

目的:比較研究左金丸與反左金的作用差異。方法:選用SD大鼠將厚樸、枳實、大黃以3∶3∶2比例制成1g/ml水煎劑，隔日灌胃1次，劑量為10g/kg體重，同時隔日喂飼造成寒性功能性胃腸疾病模型。進行肛門直腸內(nèi)壓力測定，比較組間差異并重點考察了左金丸和反左金丸對寒性功能性胃腸疾病模型腦及胃腸組織c-fos陽性表達的影響。結(jié)果:反左金丸能明顯改善寒性功能性胃腸疾病模型動物的狀態(tài)，降低直腸內(nèi)壓力變化值，且能顯著降低胃寒證模型動物腦及胃腸組織中c-fos的陽性表達，而左金丸的作用不明;吳茱萸能表現(xiàn)出與反左金丸相似的藥理作用，而單味黃連的作用不明顯。結(jié)論:左金丸及反左金丸對寒性功能性胃腸疾病模型的作用差異與方劑藥物組成的寒熱屬性有關(guān)。

左金丸;反左金丸;功能性胃腸疾病

左金丸出自《丹溪心法》火方，方中重用黃連苦寒瀉火為君，佐以辛熱之吳茱萸，既能降逆止嘔、制酸止痛，又能制約黃連之過于寒涼;2味藥物配合，一寒一熱，苦降辛開，其功用為清瀉肝火、降逆止嘔。后人仿該方以吳茱萸、黃連比例反用，稱為反左金丸，兩方均常用于治療各種功能性胃腸疾病，療效頗佳。

c-fos是反映細胞活性的一種標志物，近些年隨著對其生物學(xué)功能認識的逐漸深入，c-fos逐漸用于探索內(nèi)臟敏感性異常的起源、胃腸傷害性信號傳遞的神經(jīng)通路等研究［1］。本實驗以高劑量寒性中藥灌服建立寒性功能性胃腸疾病模型，用免疫組化的方法檢測腦部及胃腸組織c-fos的表達，探討疾病病理改變及藥物治療對c-fos表達的影響。

1 材料與方法

1.1 動物及分組

雄性SD大鼠250g±20g，購自維通利華實驗動物中心(合格證號 SCXK(京)2006-0009)。動物隨機分為正常對照組、模型對照組、左金丸組、反左金丸組、黃連組及吳茱萸組共6組，每組10只。

1.2 試驗方法

藥材由將厚樸、枳實、大黃以3∶3∶2比例制成1g/ml水煎劑，隔日灌胃1次，劑量10g/kg體重，同時隔日喂飼，造模6周。所有造模動物按前述方法造模6周后，每天按下述給藥劑量灌喂1次。左金丸治療:2.1g生藥/kg，反左金丸治療:2.1g生藥/kg，吳茱萸治療組:1.8g生藥/kg，黃連治療組:0.3g生藥/kg，各對照組給等量蒸餾水，連續(xù)給藥2周。給藥結(jié)束前用壓力測量管從肛門處插入約6cm，對實驗動物進行直腸內(nèi)壓力檢測。末次給藥后，動物禁食不禁水24h，取靜脈血進行所設(shè)定指標的檢查，同時處死動物，取腦及胃、腸進行組織病理學(xué)和免疫組化檢查。在20×10倍光鏡下統(tǒng)計每張切片陽性表達的光密度值，應(yīng)用 SPSS10.0統(tǒng)計軟件進行分析，組間比較采用單因素方差分析進行統(tǒng)計學(xué)處理。

2 結(jié)果

2.1 大體形態(tài)及HE病理觀察

實驗過程中觀察到，正常對照組動物毛色順滑，狀態(tài)靈活，攝食活動正常。模型組動物狀態(tài)稍差，偶有拉稀便的現(xiàn)象，且活動量減少。反左金丸及吳茱萸干預(yù)組動物整體狀況有改善，左金丸及黃連干預(yù)組改善不明顯。

胃腸組織HE染色觀察可見，正常組動物黏膜上皮排列有序，壁細胞豐富;黏膜下結(jié)構(gòu)致密，有少量散在的淋巴細胞。模型組偶見腺體萎縮變短或腺管間隙增寬，黏液細胞增多，各用藥組變化介于正常對照和模型對照之間。

2.2 肛門直腸內(nèi)壓力測定結(jié)果

表1顯示，各組之間直腸內(nèi)平均壓力未見明顯差異。但模型組較正常組相比，壓力變化明顯增加，而反左金丸及吳茱萸組可顯著降低壓力變化增加的趨勢。

表1 各組直腸內(nèi)平均壓力及壓力變化測定

2.3 組織中c-fos表達的檢測

表2顯示，切片中c-fos蛋白免疫反應(yīng)物質(zhì)呈棕黃色顆粒狀，染色均勻，主要位于細胞核內(nèi)，胞漿內(nèi)也有部分表達，背底呈淡黃或不著色。模型組陽性表達較空白對照組顯著增加，反左金丸可顯著降低寒性功能性胃腸疾病模型組織中c-fos的表達(與模型組比較，P＜0.01)，吳茱萸也有相同的功效，但其作用強度不如反左金丸(對腦組織及胃c-fos的表達與模型組比較，P＜0.05，對腸道中c-fos的表達與模型組比較，P＜0.01)。而左金丸及黃連對模型動物組織中c-fos表達的抑制作用較弱，左金丸對腸道中c-fos的表達作用較強(與模型組比較，P＜0.01)，對腦組織及胃內(nèi)c-fos表達與模型組相比無顯著性差異。單味黃連對腦組織中c-fos表達的抑制左右較強(與模型組比較，P＜0.01)。

表2 各組織中c-fos表達的光密度值比較

3 討論

功能性胃腸病是指具有腹脹、腹痛、腹瀉及便秘等消化系統(tǒng)癥狀，但缺乏器質(zhì)性疾病(如胃炎、腸炎等)或其他證據(jù)的1組疾病，在普通人群的發(fā)生率達到 23.5% ～74%［2、3］。關(guān)于其發(fā)病的病因，歷代醫(yī)家多認為與飲食不節(jié)或飲食偏好有關(guān)。如《醫(yī)學(xué)正傳·胃脘痛》曰:“初致病之由，多因縱恣口腹，喜好辛酸，恣飲熱酒煎，復(fù)餐寒涼生冷，朝傷暮損，日積月深……故胃脘疼痛。”因此，本研究主要模擬這一臨床因素，以寒性偏盛的藥物結(jié)合饑飽失常來建立寒性功能性胃腸疾病模型，從大鼠一般狀況上觀察，模型大鼠出現(xiàn)懶動、飲少、大便稀溏等癥狀。功能性胃腸疾病多伴隨著內(nèi)臟高敏感性，本實驗研究中采用的模型直腸內(nèi)壓力變化顯著增加，也是其內(nèi)臟敏感性增加的一種表現(xiàn)。而內(nèi)臟高敏感的發(fā)病與cfos的表達增強具有一定的相關(guān)性。本實驗主要觀測了左金丸和反左金兩個方劑對于寒性損傷模型動物腦及胃腸組織中c-fos表達的影響。左金丸和反左金是配伍比例相反的2個對藥方。其中左金丸是由黃連、吳茱萸按照6∶1的比例組成，出自元《丹溪心法》，主治肝火犯胃、偏胃火甚者。后世得左金丸之啟發(fā)，顛倒兩藥的用量比例，即黃連、吳茱萸1∶6，是反左金的方法，用治脘痞嘈雜泛酸，又嘔吐清水，畏寒，舌苔白滑，偏于胃寒甚者，因此又稱“反左金丸”(簡稱“反左金”)［4］?？梢?，兩方雖然組方用藥相同，且都可用治嘔吐、吞酸等胃系病證，但由于對藥黃連與吳茱萸的配伍比例不同而引起藥性偏重有差別，臨床應(yīng)用于寒熱病機、證候不同的病證。本研究通過建立寒性功能性胃腸疾病模型，比較左金丸和反左金丸的作用差異。結(jié)果表明，左金丸藥性偏寒，對寒性損傷的治療作用較差，而反左金丸性偏溫熱，對寒性損傷的作用較好，提示兩方的寒熱屬性隨配伍用量不同而發(fā)生變化，其對應(yīng)的證候也隨之發(fā)生改變，為中醫(yī)辨證施治的宗旨提供了科學(xué)實驗依據(jù)。

［1］何海玲，鄧春發(fā)，駱 黎．c-fos與消化系疾病［J］．中華全科醫(yī)學(xué)，2011，9(3):430-431．

［2］陳蔚文主編．消化道藥理與臨床［M］．北京:學(xué)苑出版社，2001:9-10．

［3］王永炎主編．中醫(yī)內(nèi)科學(xué)［M］．上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1997:161．

［4］丁光迪主編．中藥的配伍運用［M］．北京:人民衛(wèi)生出版社，1982:7-8．

△通訊作者:孫明杰，北京東直門內(nèi)南小街16號，中國中醫(yī)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實驗中心，Tel:64014411-3330。

R285．5

B

1006-3250(2011)10-1092-02

中國中醫(yī)科學(xué)院基本科研業(yè)務(wù)費資助項目(ZZ2007013)

2011-05-16

馮淑怡，女，助理研究員，從事中藥藥理方面的研究。