愈潰生物黏附單向釋藥貼膜的質(zhì)量標準研究Δ

段曉穎，高衛(wèi)芳，平佳宜，張輝（.河南中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院國家中醫(yī)藥管理局中藥制劑三級實驗室，鄭州市 450000；.新鄉(xiāng)醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院，衛(wèi)輝市 45300）

愈潰生物黏附單向釋藥貼膜系由胡黃連、牡丹皮、青黛與冰片4味藥組成，具有清熱解毒、消腫散結(jié)、止痛、化腐生肌之功效，用于治療口腔潰瘍，療效顯著。該貼膜由具生物黏附性的載藥層和在口腔中不溶解的背襯層復合而成，使藥物僅向內(nèi)側(cè)釋放，減輕了藥物不適口味，增大了藥物濃度梯度，使藥物緩慢釋放吸收，達到了長效及加快潰瘍面愈合的目的。為了更有效控制該產(chǎn)品的質(zhì)量，筆者對制劑中青黛、冰片、牡丹皮進行了薄層色譜（TLC）鑒別，并采用高效液相色譜（HPLC）法對胡黃連中胡黃連苷Ⅰ、胡黃連苷Ⅱ進行了含量測定。

1 儀器與試藥

LC-10A HPLC儀、AEL-200電子天平（日本島津公司）；CP225D電子天平（德國賽多利斯公司）。

胡黃連苷Ⅰ（批號：111727-200501）、胡黃連苷Ⅱ（批號：111596-200301）、靛玉紅（批號：110717-200204）、芍藥苷（批號：0736-9913）、冰片（批號：110743-200303）對照品均購自中國食品藥品檢定研究院；愈潰生物黏附單向釋藥貼膜（以下簡稱愈潰貼膜，河南中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院制劑室自制，批號：091222、091212、091218、091228）；牡丹皮、冰片、胡黃連、青黛飲片（安徽亳州濟人藥業(yè)有限公司，批號分別為090306、090503、090306、090412）。

2 定性鑒別

2.1 牡丹皮的TLC鑒別

精密稱取芍藥苷對照品1.37mg，加乙醇1m L溶解，制成每1m L含1.37mg的溶液，作為對照品溶液；取本品50片（批號：091222），剪碎，加乙醇30m L，超聲30m in，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30m L使溶解，濾過，濾液用水飽和的正丁醇萃取3次（20、15、15m L），分別取正丁醇液，蒸干，殘渣加乙醇2m L使溶解，加入0.5 g中性氧化鋁，拌勻，裝入預先裝好的中性氧化鋁柱（氧化鋁100～200目，內(nèi)徑10mm）頂部，以甲醇40m L洗脫，收集洗脫液，揮干，殘渣加乙醇0.5m L使溶解，作為供試品溶液；取缺牡丹皮的處方藥材，按工藝制成缺牡丹皮陰性樣品，同法制備缺牡丹皮陰性對照溶液。照TLC法[1]試驗，吸取上述3種溶液各10μL，點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%的香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。結(jié)果，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；陰性對照無干擾。牡丹皮的TLC見圖1。

2.2 青黛的TLC鑒別

精密稱取靛玉紅對照品0.91mg，加三氯甲烷制成每1m L含0.45mg的溶液，作為對照品溶液；取本品20片（批號：091222），剪碎，加三氯甲烷10m L，超聲30min，濾過，濾液作為供試品溶液；取缺青黛的處方藥材，按工藝制成缺青黛陰性樣品，同法制成缺青黛陰性對照溶液。照TLC法[1]試驗，吸取上述3種溶液各10μL，點于同一硅膠G薄層板板上，以甲苯-三氯甲烷-丙酮（5∶4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，日光下檢視。結(jié)果，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；陰性對照無干擾。青黛的TLC見圖2。

2.3 冰片的TLC鑒別

取冰片對照品2.0mg，加乙醇制成每1m L含2.0mg的溶液，作為對照品溶液；取本品20片（批號：091222），剪碎，加乙醚20 m L，密塞，冷浸30 m in，濾過，濾液揮干，殘渣加乙醇1 m L使溶解，作為供試品溶液；取缺冰片的處方藥材，按工藝制成缺冰片陰性對照，同法制備缺冰片陰性對照溶液。照TLC法[1]試驗，吸取上述3種溶液各5μL，點于同一硅膠G薄層板板上，以石油醚（60～90℃）-苯-乙酸乙酯（9∶4∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%的香草醛硫酸溶液，于105℃加熱至斑點顯色清晰。結(jié)果，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；陰性對照無干擾。冰片的TLC見圖3。

圖1 牡丹皮的TLC 1.芍藥苷對照品；2.陰性對照；3～5.供試品Fig 1 TLC of Paeonia suffruticosa 1.paeoniflorin control；2.negative control；3～5.testsamples

圖2 青黛的TLC 1.靛玉紅對照品；2.陰性對照；3～5.供試品Fig 2 TLC of Indigo Naturalis 1.indirubin control；2.negative control；3～5.test samples

圖3 冰片的TLC 1.冰片對照品；2.陰性對照；3～5.供試品Fig 3 TLC of Borneolum Syntheticum 1.Borneolum Syntheticum control；2.negative sample；3.testsamples

3 含量測定

3.1 色譜條件

色譜柱：Agilent XDB-C18柱（150 mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-水-磷酸（35∶65∶0.1）；檢測波長：275 nm；流速：1m L·min-1；柱溫：25 ℃；進樣量：10μL。

3.2 混合對照品溶液的制備

精密稱取胡黃連苷Ⅰ、胡黃連苷Ⅱ?qū)φ掌?.01、5.02mg，置25m L容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取此溶液1m L，置5m L量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得（每1m L中含胡黃連苷Ⅰ40.08μg、胡黃連苷Ⅱ40.16μg）。

3.3 供試品溶液的制備

取本品30片，剪碎，稱取0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50.0m L，密塞，稱定重量，超聲處理（功率：250W，頻率：50 kHz）30m in，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足失重，搖勻，取續(xù)濾液2.0m L置5m L容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

3.4 陰性對照溶液的制備

取缺胡黃連的陰性樣品，按“3.3”項下方法制備陰性對照溶液。

3.5 專屬性試驗

精密吸取各對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液適量，按上述色譜條件測定。結(jié)果表明，胡黃連供試品色譜中，在與胡黃連苷Ⅰ和胡黃連苷Ⅱ?qū)φ掌飞V相同保留時間處有色譜峰出現(xiàn)，陰性對照無干擾。色譜見圖4。

圖4 高效液相色譜圖A.對照品；B.供試品；C.陰性對照；1.胡黃連苷Ⅱ；2.胡黃連苷ⅠFig 4 HPLC chromatograms A.substance control；B.testsample；C.negative control；1.picrosidⅡ；2.picrosideⅠ

3.6 線性關系考察

精密吸取混合對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0m L，置5m L容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成對照品溶液。分別精密吸取上述溶液各10μL，按上述色譜條件測定。以峰面積積分值（Y）為縱坐標，檢測濃度（X，μg·m L-1）為橫坐標，制備標準曲線，得胡黃連苷Ⅰ、胡黃連苷Ⅱ的回歸方程分別為Y胡黃連苷Ⅰ＝2 408 171.25X胡黃連苷Ⅰ+5 921.7（r＝0.999 9）；Y胡黃連苷Ⅱ＝977 847.69X胡黃連苷Ⅱ+1 007.00（r＝0.999 9）。結(jié)果表明，胡黃連苷Ⅰ、胡黃連苷Ⅱ的檢測濃度分別在0.08～0.40、0.12～0.60μg·m L-1范圍內(nèi)與各自峰面積積分值呈良好線性關系。

3.7 精密度試驗

分別吸取混合對照品溶液10μL，按上述色譜條件測定，重復進樣5次。結(jié)果，胡黃連苷Ⅰ、胡黃連苷Ⅱ峰面積的RSD分別為0.40%、0.28%（n均為5），表明儀器精密度良好。

3.8 穩(wěn)定性試驗

精密量取同一供試品溶液10μL，在室溫下放置0、1、2、4、6、8、12、16、20、24 h，按上述色譜條件測定。結(jié)果，胡黃連苷Ⅰ、胡黃連苷Ⅱ峰面積的RSD分別為1.01%、1.47%（n均為10），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.9 重復性試驗

精密稱取同一批樣品（批號：091228）6份，各約0.2 g，精密稱定，按“3.3”項下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件測定。結(jié)果，胡黃連苷Ⅰ、胡黃連苷Ⅱ含量的RSD分別為1.97%、2.20%（n均為6），表明方法重復性良好。

3.10 加樣回收率試驗

稱取已知含量的愈潰貼膜（胡黃連苷Ⅰ含量：8.3μg·g-1、胡黃連苷Ⅱ含量：20μg·g-1）0.1 g，置具塞錐形瓶中，精密稱定，平行稱取9份，分別精密加入80%、100%、120%的胡黃連苷Ⅰ、胡黃連苷Ⅱ?qū)φ掌罚垂┰嚻啡芤旱闹苽浞椒ú僮?，計算加樣回收率。結(jié)果，胡黃連苷Ⅰ、胡黃連苷Ⅱ的平均回收率分別為100.24%、99.61%，RSD分別為1.72%、1.76%，n均為9。

3.11 樣品含量測定

取3批樣品（批號：091212、091218、091228），按上述方法測定胡黃連苷Ⅰ、胡黃連苷Ⅱ的含量，每個批號平行測定3次。結(jié)果，3批樣品中胡黃連苷Ⅰ、胡黃蓮苷Ⅱ的平均總含量分別為每片0.925、0.904、0.903mg。

4 討論

牡丹皮中主要成分是丹皮酚，采用TLC法對其進行鑒別[2]，供試品色譜中，在與丹皮酚對照品色譜相應位置，陰性對照產(chǎn)生干擾。檢索有關文獻[3，4]，發(fā)現(xiàn)胡黃連中成分香草酸與丹皮酚分子結(jié)構(gòu)式相似，這可能是導致陰性干擾的原因，因此未建立牡丹皮中丹皮酚的TLC鑒別方法，而改為鑒別牡丹皮中芍藥苷。因供試品雜質(zhì)干擾較大，影響芍藥苷斑點的檢視，故用氧化鋁柱對供試品進行洗脫、精制，以消除背景干擾。

采用TLC法鑒別本品中牡丹皮、青黛、冰片，采用HPLC法測定胡黃連苷Ⅰ、胡黃連苷Ⅱ的含量，經(jīng)方法學考察，證明方法靈敏、專屬、快速，可用于愈潰貼膜的質(zhì)量控制。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄34.

[2]段曉穎，張 輝，高衛(wèi)芳.復方牛蒡子含片質(zhì)量標準研究[J].中國藥房，2009，20（15）：1 158.

[3]鄭啟占，董澤紅，余 靖，等.中藥現(xiàn)代研究與應用[M].北京：學苑出版社，1998：3 232.

[4]國家中醫(yī)藥管理局中草藥情報中心站.植物有效成分手冊[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1986：799、1 108.