參芪扶正注射液紅外光譜質(zhì)量控制方法研究Δ

肖樹(shù)雄，周清，鐘桂雄，溫金蓮（1.廣東省藥品檢驗(yàn)所，廣州市510180；.廣東藥學(xué)院藥科學(xué)院，廣州市510006；.麗珠集團(tuán)利民制藥廠，韶關(guān)市 5108）

參芪扶正注射液紅外光譜質(zhì)量控制方法研究Δ

肖樹(shù)雄1＊，周清2，鐘桂雄3，溫金蓮2（1.廣東省藥品檢驗(yàn)所，廣州市510180；2.廣東藥學(xué)院藥科學(xué)院，廣州市510006；3.麗珠集團(tuán)利民制藥廠，韶關(guān)市 512028）

目的：建立參芪扶正注射液質(zhì)量控制的新方法。方法：采用傅里葉變換紅外光譜（FTIR）技術(shù)獲取圖譜，并利用數(shù)學(xué)軟件對(duì)圖譜進(jìn)行求導(dǎo)及相關(guān)系數(shù)比對(duì)。結(jié)果：獲得了10批次參芪扶正注射液、4批次黨參/黃芪藥材及各藥材提取物、陰性注射液等的紅外光譜圖，找出了參芪扶正注射液的特征吸收峰；各批次間參芪扶正注射液的相關(guān)系數(shù)均＞0.99。結(jié)論：該方法取樣量小、簡(jiǎn)便、迅速、特征性強(qiáng)，有一定的推廣應(yīng)用價(jià)值。

參芪扶正注射液；紅外光譜法；質(zhì)量控制；黨參；黃芪

中藥制劑的組成十分復(fù)雜，其紅外光譜是其中多個(gè)組分光譜的疊加。中藥中各種化學(xué)成分只要在質(zhì)和量方面相對(duì)穩(wěn)定，并且樣品處理方法按統(tǒng)一要求進(jìn)行，其紅外光譜就應(yīng)該具有一定的穩(wěn)定性和可重復(fù)性。紅外光譜的宏觀指紋性可以反映中藥混合物中各種成分的疊加譜，不同種的混合物其相應(yīng)的化學(xué)組成不同也就引起分子光譜整體譜圖的變化，憑借這些變化特征直接或稍作數(shù)學(xué)處理就可以直接用在質(zhì)控上[1，2]。參芪扶正注射液的主要組分為黨參和黃芪[3]，通過(guò)中藥制劑常用的“水提醇沉”法制得。它具有益氣扶正之功效，用于氣虛證肺癌、胃癌的輔助治療，能提高氣虛患者免疫功能，與化療合用有助于提高化療效果。目前，該產(chǎn)品雖有高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜定性鑒別等方法，但該法前處理過(guò)程耗時(shí)、操作煩瑣。本試驗(yàn)試圖利用紅外光譜法的優(yōu)勢(shì)建立一種簡(jiǎn)便、快捷的方法，以作為該產(chǎn)品日常生產(chǎn)的內(nèi)部質(zhì)控方法。

1 儀器與試藥

Spectrum 110型傅里葉變換紅外光譜（FT-IR）儀（美國(guó)Perkin Elmer公司）。

黨參、黃芪（膜莢黃芪）對(duì)照藥材（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)分別為121057-200805、121462-200702）；藥材提取物、參芪扶正注射液（批號(hào)：0810530、0903126、0909445、0909446、0909447、0909448、090652、0904153、0907249、0907248）、陰性注射液及注射液中其他添加物等均由麗珠集團(tuán)利民制藥廠提供；KBr為光譜純。

2 方法

2.1 樣品處理方法

2.1.1 液體樣品處理 采用KBr吸附法。取0.15mL參芪扶正注射液置于蒸發(fā)皿中，加80mg KBr，于水浴鍋上蒸干，刮下，再加70mg KBr混合研磨充分均勻后壓片，置FT-IR儀中進(jìn)行檢測(cè)，收集掃描得到的譜圖。

2.1.2 固體樣品處理 用粉碎機(jī)將藥材粉碎，研磨，取樣品粉末約3mg與150mg KBr（碎晶）混合研磨充分均勻后壓片，其余同“2.1.1”項(xiàng)下。

2.2 測(cè)試及數(shù)據(jù)處理方法

2.2.1 儀器條件 光譜范圍：4000～400cm-1；檢測(cè)器：中紅外氘化三甘氨酸硫酸酯（DTGS）檢測(cè)器；分辨率：4cm-1；掃描信號(hào)累加16次；掃描實(shí)時(shí)扣除H2O和CO2的干擾。

2.2.2 譜圖處理 使用美國(guó)Perkin Elemer公司Spectrum軟件和相似度分析軟件進(jìn)行譜圖處理。

2.2.3 二階導(dǎo)數(shù)譜 采用Spectrum軟件中的求導(dǎo)數(shù)功能，13點(diǎn)平滑，獲得各樣品的紅外二階導(dǎo)數(shù)光譜圖。

3 結(jié)果

3.1 藥材的紅外吸收?qǐng)D譜

取黨參和黃芪對(duì)照藥材各4批次，于60℃干燥2h，按“2.1.2”項(xiàng)下方法處理后繪制紅外吸收?qǐng)D譜，分別見(jiàn)圖1、圖2。

4批黨參藥材紅外圖譜的相關(guān)系數(shù)分別為0.9999、0.9842、0.9707、0.9665，均在 0.96以上；特征峰值在779、818、868、936、1056、1257、1408、1637、1735cm-1附近，特別是779、818、868、936cm-1處對(duì)應(yīng)的峰值非常明顯，經(jīng)與文獻(xiàn)對(duì)比發(fā)現(xiàn)其特征性強(qiáng)，不容易被混淆，說(shuō)明黨參藥材均一穩(wěn)定。

4批黃芪藥材紅外圖譜的相關(guān)系數(shù)分別為0.9999、0.9520、0.9652、0.9483，均在0.94以上；特征峰值在850、867、1050、1104、1240、1637cm-1附近，其中1050、1104、1240cm-1處對(duì)應(yīng)的峰值比較明顯，可作為鑒別的依據(jù)，說(shuō)明黃芪藥材均一穩(wěn)定。

3.2 藥材提取物的紅外吸收?qǐng)D譜

3.2.1 未精制及精制黨參提取物、未精制及精制黃芪提取物

取各藥材提取物，分別按“2.1.2”項(xiàng)下方法處理后繪制紅外吸收?qǐng)D譜，分別見(jiàn)圖3、圖4（圖中a、b、c分別代表該藥材未精制、精制提取物及藥材的紅外吸收?qǐng)D譜）。

圖1 黨參藥材的紅外吸收?qǐng)D譜Fig 1 IR absorption spectrum of Codonopsis pilosula

圖2 黃芪藥材的紅外吸收?qǐng)D譜Fig 2 IR absorption spectrum ofAstrogalus mongholicus

圖3 未精制、精制黨參提取物及黨參藥材的紅外吸收?qǐng)D譜Fig 3 IR absorption spectrum of unrefined，refined extracts and C.pilosula

圖4 未精制、精制黃芪提取物及黃芪藥材的紅外吸收?qǐng)D譜Fig 4 IR absorption spectrum of unrefined，refined extracts andA.mongholicus

由圖3可見(jiàn)，黨參提取物是否精制，與黨參藥材的紅外圖譜均基本一致，說(shuō)明提取對(duì)黨參紅外光譜的影響很小。對(duì)黃芪，由圖4也可以得出同樣的結(jié)論。

3.2.2 未精制及精制參芪提取物 取參芪藥材提取物，按“2.1.2”項(xiàng)下方法處理后繪制紅外吸收?qǐng)D譜，詳見(jiàn)圖5。

由圖5可見(jiàn)，參芪提取物是否精制，與參芪扶正注射液的紅外圖譜均基本一致，同樣也說(shuō)明制作工藝不同對(duì)參芪扶正注射液紅外光譜的影響很小。

從圖3～圖5的分析可知，中藥注射劑的原料、中間體與成品的紅外光譜有很大的關(guān)聯(lián)性，這與色譜指紋圖譜類似，提示可建立紅外指紋圖譜的評(píng)價(jià)方法。

3.3 陰性注射液的紅外吸收?qǐng)D譜

取陰性注射液a（缺黨參）、陰性注射液b（缺黃芪）、陰性注射液c（缺黨參、黃芪），分別按“2.1.1”項(xiàng)下方法處理后繪制紅外吸收?qǐng)D譜，詳見(jiàn)圖6。

圖5 未精制、精制參芪提取物及參芪扶正注射液的紅外吸收?qǐng)D譜Fig 5 IR absorption spectrum of unrefined，refined extracts and Shenqi fuzheng injection

圖6 陰性注射液紅外吸收?qǐng)D譜Fig 6 IR absorption spectrum of negative injection

由圖6可見(jiàn)，陰性注射液a不體現(xiàn)黨參的特征峰值，能部分體現(xiàn)黃芪的特征峰值；陰性注射液b不體現(xiàn)黃芪特征峰值，能體現(xiàn)黨參的特征峰值，與黨參藥材的紅外圖譜基本一致；陰性注射液c不體現(xiàn)黨參及黃芪的的特征峰值。這從反面再次說(shuō)明，參芪扶正注射液的原料、中間體與成品的紅外吸收光譜有很大的關(guān)聯(lián)性。

3.4 10批參芪扶正注射液的紅外吸收?qǐng)D譜

取不同批次參芪扶正注射液，分別按“2.1.1”項(xiàng)下方法處理后繪制紅外吸收?qǐng)D譜，詳見(jiàn)圖7。

10批參芪扶正注射液的相關(guān)系數(shù)分別為0.9999、0.9978、0.9951、0.9917、0.9948、0.9962、0.9934、0.9920、0.9928、0.9923，說(shuō)明各批次的相關(guān)性良好。對(duì)其圖譜求二階導(dǎo)數(shù)，13點(diǎn)平滑，以增大其差異性，詳見(jiàn)圖8。

由圖8可見(jiàn)，增大差異性后，其特征峰值基本無(wú)變化，進(jìn)一步說(shuō)明參芪扶正注射液各批次間基本無(wú)差異。

4 討論

通過(guò)上述試驗(yàn)數(shù)據(jù)及大量文獻(xiàn)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，參芪扶正注射液與原料和中間體的紅外光譜關(guān)聯(lián)性很強(qiáng)，穩(wěn)定工藝制成的產(chǎn)品批次間重現(xiàn)性也很高。由此可見(jiàn)，紅外光譜法用于參芪扶正注射液質(zhì)量控制的特征性很強(qiáng)，可應(yīng)用于產(chǎn)品的質(zhì)量控制中。

含水物質(zhì)紅外光譜測(cè)試中常用的樣品制備技術(shù)有結(jié)晶壓片法、吸附壓片法、蒸發(fā)涂片法、蒸發(fā)成膜法、液池參比法等[4]。本試驗(yàn)通過(guò)KBr吸附、蒸發(fā)、壓片等步驟對(duì)液體樣品進(jìn)行處理，較好地解決了紅外光譜檢測(cè)液體樣品處理的技術(shù)難題。

本試驗(yàn)對(duì)參芪扶正注射液的質(zhì)量實(shí)施監(jiān)控，主要依據(jù)為標(biāo)準(zhǔn)圖譜和圖譜的特征數(shù)據(jù)，總的來(lái)講就是相似度，10批樣品的相似度均＞0.99，遠(yuǎn)遠(yuǎn)好于色譜法規(guī)定相似度不得低于0.85的要求。相似度反映的是注射液（殘?jiān)└魑镔|(zhì)紅外光譜的疊加結(jié)果，但實(shí)際上，正如色譜指紋圖譜鑒別[5]一樣，紅外指紋圖譜也跟物質(zhì)響應(yīng)靈敏度有關(guān)，各物質(zhì)在總體的權(quán)重不一樣，相似度高只能部分說(shuō)明產(chǎn)品的一致性強(qiáng)。紅外光譜法是一種整體性的模糊方法，真正要反映產(chǎn)品的質(zhì)量好壞還需要進(jìn)一步通過(guò)大量的試驗(yàn)數(shù)據(jù)，特別是已經(jīng)確證不合格樣品的試驗(yàn)數(shù)據(jù)來(lái)確定。

由于采用紅外光譜分析樣品既非分離提取，不使用有毒、有害試劑，又系無(wú)損分析，保持中成藥原有特性，兼有操作簡(jiǎn)單、分析成本低、周期短等優(yōu)點(diǎn)，因此本方法的建立可為中藥注射劑的質(zhì)量控制提供一種新的簡(jiǎn)便、快捷的分析方法，有一定的推廣應(yīng)用價(jià)值。

圖7 參芪扶正注射液的紅外吸收?qǐng)D譜Fig 7 IR absorption spectrum of Shenqi fuzheng injections

圖8 參芪扶正注射液紅外吸收二階導(dǎo)數(shù)圖譜Fig 8 Second derivative IR absorption spectrum of Shenqi fuzheng injections

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Study on Quality Control Method of Shenqi Fuzheng Injection by Infrared Spectroscopy

XIAO Shu-xiong（Guangdong Institute for Drug Control，Guangzhou 510180，China）
ZHOU Qing，WEN Jin-lian（School of Pharmaceutical Science，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China）
ZHONG Gui-xiong（Lizhu Group Limin Pharmaceutical Factory，Shaoguan 512028，China）

OBJECTIVE：To establish a new quality control method for Shenqi fuzheng injection.METHODS：FT-IR spectrometric technique was adopted to obtain spectrograms，and the second derivative and correlation coefficient of spectrograms were achieved by mathematical software.RESULTS：Infrared spectrograms of 10batches of Shenqi fuzheng injection，4batches of Codonopsis pilosula/Astragalus mongholicus，as well as their extractive，negative injection were obtained.The unique absorption peaks of Shenqi fuzheng injection were found，and the correlation coefficients of all injection were higher than 0.99.CONCLUSION：The method was low usage volume，convenient，quick and strong characteristics，and it could be applied in practical production.

Shenqi fuzheng injection；Infrared spectroscopy；Quality control；Codonopsis pilosula；Astragalus mongholicus

R283.61；R927

A

1001-0408（2011）47-4465-03

Δ 2007年粵港關(guān)鍵領(lǐng)域重點(diǎn)突破項(xiàng)目（TC07BF09-11）

＊主任藥師。研究方向：中藥檢驗(yàn)、新藥研發(fā)。電話：020-81079652。E-mail：13527622441@139.com

2011-03-09

2011-10-14）