葛根醇提物對(duì)2型糖尿病模型大鼠的保護(hù)作用研究

方道碩（成都大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科，成都市 610106）

隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏的加快，人們?cè)絹碓胶雎宰陨淼慕】担瑥亩鴮?dǎo)致營養(yǎng)過剩、形體肥胖、運(yùn)動(dòng)減少，而以上因素也是誘發(fā)2型糖尿病的重要原因。有研究表明[1，2]，胰島素抵抗（IR）貫穿于2型糖尿病的始終，是2型糖尿病發(fā)生各種慢性并發(fā)癥的病理基礎(chǔ)。如果能減輕IR就能相應(yīng)地增加胰島素的敏感性，從而能有效地降低血糖水平，延緩并發(fā)癥的發(fā)生。已有文獻(xiàn)報(bào)道[3，4]，我國傳統(tǒng)中藥葛根具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、降低外周血管阻力、抑制血小板聚集及改善微循環(huán)等作用，臨床上主要用于心、腦血管疾病的治療。近年來發(fā)現(xiàn)其對(duì)缺血-再灌注后的心、肺、腦等臟器具有較好的保護(hù)作用。但葛根對(duì)于糖尿病保護(hù)作用的報(bào)道少見，因此筆者通過2型糖尿病大鼠模型來研究葛根對(duì)其的保護(hù)作用，以為葛根的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

UV751GD型紫外-可見分光光度計(jì)（上海精科實(shí)業(yè)有限公司）；AX-120型電子天平（日本島津公司）；OneTouch型強(qiáng)生血糖儀（美國強(qiáng)生公司）；腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）ELISA測(cè)定試劑盒由成都晶美生物制品有限公司提供。

1.2 試藥

葛根（購自成都大學(xué)附屬醫(yī)院中藥房）由筆者鑒定為真品。鹽酸二甲雙胍片（上海延安藥業(yè)有限公司，批號(hào)：101204）；鏈脲佐菌素（STZ，廣州市齊云生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：110112）；其余試劑為分析純。

1.3 動(dòng)物

健康Wistar大鼠60只，♂，體重（200±40）g，由四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（川）2009-09）。

2 方法與結(jié)果

2.1 方法

2.1.1 葛根醇提物的制備 將葛根磨成細(xì)粉，加處方量6倍的50%乙醇，回流提取2次，第1次2 h，第2次1.5 h，合并2次濾液，即得葛根醇提物，備用。

2.1.2 復(fù)制模型 Wistar大鼠60只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機(jī)取10只大鼠作正常對(duì)照，空腹12 h后尾iv檸檬酸鈉-檸檬酸緩沖液2.5m L·kg-1，給予正常飲食。取100m L檸檬酸鈉-檸檬酸緩沖液（pH 4.5）溶解STZ 2 g，配制成2%溶液，50只大鼠空腹12 h后尾iv STZ（25mg·kg-1，即2%STZ溶液2.5m L·kg-1），給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)，自由進(jìn)食及飲水，均不使用胰島素。72 h后測(cè)大鼠空腹尾靜脈血糖，血糖值以11.1mmol·L-1≤空腹血糖（FBG）≤33.3mmol·L-1且伴有糖耐量減退者為2型糖尿病大鼠模型復(fù)制成功。

2.1.3 分組與給藥 Wistar大鼠分為6組，分別為正常對(duì)照（等容生理鹽水）、模型（等容生理鹽水）、二甲雙胍（70mg·kg-1）和葛根醇提物高、中、低劑量（150、100、50mg·kg-1）組。ig給藥，每天1次，連續(xù)8周。

2.1.4 指標(biāo)的測(cè)定 ig給藥結(jié)束后，大鼠空腹12 h稱體重，ip 2%戊巴比妥鈉生理鹽水溶液40mg·kg-1麻醉，股動(dòng)脈取血并檢測(cè)FBG、血清胰島素（Flns）含量、血清IL-6、TNF-α。胰島素敏感性指數(shù)（ISI）的計(jì)算參照文獻(xiàn)方法[5]：ISI＝ln（1/Flns×FBG），因其為非正態(tài)分布，分析中取其自然對(duì)數(shù)，并以正常對(duì)照組為對(duì)照，計(jì)算相對(duì)胰島素敏感性。FBG采用強(qiáng)生血糖儀檢測(cè)；血清IL-6、TNF-α含量采用試劑盒測(cè)定。

2.2 結(jié)果

2.2.1 葛根醇提物對(duì)2型糖尿病模型大鼠ISI的影響 模型組大鼠的ISI較正常對(duì)照組顯著升高（P＜0.01）；二甲雙胍組和葛根醇提物高、中劑量組的ISI較模型組顯著降低（P＜0.01或P＜0.05），提示葛根醇提物有降低ISI的作用。葛根醇提物對(duì)2型糖尿病模型大鼠ISI的影響見表1。

表1 葛根醇提物對(duì)2型糖尿病模型大鼠ISI的影響Tab 1 Effects of Pueraria lobata ethanol-extract on ISI in type2 diabeticmodel rats

2.2.2 葛根醇提物對(duì)2型糖尿病模型大鼠TNF-α、IL-6含量的影響 模型組大鼠的TNF-α、IL-6的含量較正常對(duì)照組顯著升高（P＜0.01）；二甲雙胍和葛根醇提物高、中劑量組較模型組顯著降低（P＜0.01或P＜0.05），提示葛根醇提物有降低TNF-α、IL-6含量的作用。葛根醇提物對(duì)2型糖尿病模型大鼠TNF-α、IL-6含量的影響見表2。

表2 葛根醇提物對(duì)2型糖尿病模型大鼠TNF-α、IL-6含量的影響Tab 2 Effects of P.lobata ethanol-extract on the contents of TNF-αand IL-6 in type 2 diabeticmodel rats

3 討論

IR是2型糖尿病發(fā)病的重要原因，并貫穿2型糖尿病的全過程，也是2型糖尿病發(fā)生各種慢性并發(fā)癥的病理基礎(chǔ)，改善IR成為近年來糖尿病治療領(lǐng)域關(guān)注的熱點(diǎn)。筆者通過測(cè)定FBG、Flns的含量，計(jì)算出ISI，發(fā)現(xiàn)用藥后ISI明顯低于模型組，說明葛根醇提物能降低模型大鼠的ISI。

有報(bào)道指出，IR人群的脂肪組織中存在TNF-α過度表達(dá)，IR的2型糖尿病患者的肌細(xì)胞中TNF-α表達(dá)比胰島素敏感的正常人群高4倍[6]。TNF-α可干擾周圍組織胰島素作用從而引起IR，伴有IR的肥胖嚙齒類動(dòng)物和人類肥胖者的脂肪組織TNF-α基因均呈過度表達(dá)，而去TNF-α基因肥胖小鼠ISI明顯高于正常肥胖小鼠，表明TNF-α參與IR的形成[7]。筆者通過測(cè)定TNF-α含量，發(fā)現(xiàn)用藥后葛根醇提物高、中劑量組TNF-α含量顯著低于模型組，說明葛根素醇提物能通過下調(diào)TNF-α改善脂肪組織IR。

IR與急性相反應(yīng)的激活有關(guān)。IL-6作為急性相反應(yīng)的主要細(xì)胞因子，可能通過多種途徑影響2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制，如IL-6水平增高，使肝細(xì)胞處于應(yīng)激狀態(tài)而大量分泌急性相蛋白，使纖維蛋白原、C反應(yīng)蛋白等增加，纖維蛋白原增加從而使血黏度增加，易于形成血栓和發(fā)生栓塞。通過IL-6激活腦、肝、血管內(nèi)皮、脂肪組織的急性相反應(yīng)，參與IR和2型糖尿病的發(fā)病等。筆者通過測(cè)定IL-6含量，發(fā)現(xiàn)用藥后葛根醇提物高、中劑量組IL-6含量顯著低于模型組，說明葛根醇提物能通過下調(diào)IL-6改善脂肪組織IR。

綜上所述，葛根醇提物可降低2型糖尿病模型大鼠ISI和TNF-α、IL-6含量，以為葛根在2型糖尿病治療的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

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