超聲波協(xié)同提取新疆紫草化學(xué)成分研究

崔曉秋

（濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，山東 日照 276826）

紫草為常用中藥，具有涼血活血、解毒透疹之功，用于血熱毒盛、斑疹紫黑、麻疹不透、水火燙傷等[1]?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》[2]收載的紫草為紫草科植物新疆紫草Arnebia euchroma (Royle) Johnst或內(nèi)蒙紫草Arnebia guttata Bunge的干燥根，其化學(xué)成分主要是紫草素等萘醌類(lèi)色素[3]。目前對(duì)紫草化學(xué)成分研究主要采用乙醇回流提取法，超聲波協(xié)同氯仿提取新疆紫草化學(xué)成分少有報(bào)道。本文考察在超聲波強(qiáng)化提取中各因素對(duì)提取效果的影響，并優(yōu)化了提取工藝參數(shù)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)材料及試劑

新疆紫草干燥根購(gòu)買(mǎi)于市零售藥店，經(jīng)鑒定為新疆軟紫草Arnebia euchroma (Royle) Johnst.。左旋紫草素對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。所用試劑均為分析純。

1.2 儀 器

TB-114電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；KQ-500DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器）；SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；TU-1901雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司）。

2 正交試驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密稱(chēng)取對(duì)照品0.0060g，置于100mL容量瓶中，氯仿溶解，定容，即得濃度為0.06mg/mL的對(duì)照品溶液。精密吸取左旋紫草素對(duì)照品溶液1、2、3、4、5mL，分別置于10mL的容量瓶中，用氯仿稀釋至刻度，搖勻。以試劑空白作參比，522nm測(cè)定吸光度，以吸光度與左旋紫草素濃度回歸,得回歸方程A=－0.0087+ 25.70C，r = 0.9992，線性范圍6～30mg/L。

2.2 樣品測(cè)定方法

精密稱(chēng)取新疆紫草粉末100mg于具塞錐形瓶中，加入適量氯仿，浸泡30min，按正交表設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，因素水平見(jiàn)表1。提取液冷卻，過(guò)濾，補(bǔ)足損失溶劑。精密吸取續(xù)濾液2mL于10mL容量瓶中，氯仿定容，搖勻，即得供試品溶液。按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方法進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)回歸方程計(jì)算新疆紫草樣品中總萘醌的含量。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表

2.3 正交試驗(yàn)結(jié)果與分析

采用正交試驗(yàn)方法，按照“2.1”項(xiàng)及“2.2”項(xiàng)下測(cè)定方法，對(duì)新疆紫草中總萘醌含量進(jìn)行研究。利用L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2。

通過(guò)R值比較可知，影響紫草素提取率大小的因素為D＞B＞A＞C，即功率＞溫度＞液固比＞時(shí)間。其最佳提取條件為A2B3C2D2，即液固比10mL/g氯仿/紫草，功率450W，在水浴溫度50℃條件下，超聲提取25min。

3 單因素實(shí)驗(yàn)

根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果，依據(jù)各因素對(duì)提取效果的影響大小，在其他因素不變的情況下，依次進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，并以吸光度大小表示提取率高低。

3.1 功率對(duì)紫草提取率的影響

考察功率在200～500W范圍內(nèi)變化時(shí)，對(duì)紫草提取率的影響，結(jié)果見(jiàn)圖1。隨著超聲功率的增加，提取率效果明顯增大。當(dāng)超聲功率在450～500W時(shí)，提取率變化不大。考慮到節(jié)能因素，我們?cè)谔崛r(shí)選擇450W為宜。

3.2 溫度對(duì)紫草提取率的影響

考察溫度在20～60℃變化時(shí)，對(duì)紫草提取率的影響。結(jié)果見(jiàn)圖2。由圖2我們看出，隨著溫度的升高，提取率逐漸增大，溫度達(dá)到50℃時(shí)，提取率達(dá)最大，但繼續(xù)升溫時(shí)，提取率反而下降。

圖1 超聲功率對(duì)提取的影響

圖2 溫度對(duì)提取的影響

3.3 液固比對(duì)紫草提取率的影響

選擇5、7、9、10、12、15mL/g的氯仿/紫草進(jìn)行試驗(yàn)，考察液固比對(duì)提取的影響，結(jié)果見(jiàn)圖3。從圖中我們看出，液固比15mL/g時(shí)提取率最大，但和12mL/g相比差距不大。綜合考慮，我們決定選擇液固比為12mL/g氯仿/紫草。

圖3 液固比對(duì)提取的影響

圖4 超聲時(shí)間對(duì)提取的影響

3.4 時(shí)間對(duì)紫草提取率的影響

考察超聲時(shí)間在10～60min內(nèi)變化時(shí)對(duì)提取的影響，結(jié)果見(jiàn)圖4。由圖4我們看出，隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng)，提取率逐漸增大，30min達(dá)最大值。但提取時(shí)間再繼續(xù)延長(zhǎng)時(shí)，提取率反而下降，當(dāng)超聲時(shí)間達(dá)到55min時(shí)，提取率又在升高，但升高幅度很小。這可能是長(zhǎng)時(shí)間加熱，使紫草中化學(xué)成分發(fā)生了變化的緣故。從正交試驗(yàn)分析我們得知，時(shí)間對(duì)提取的影響較小，因此我們最后確定超聲時(shí)間為25min為宜。

3.5 最佳工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

精密稱(chēng)量紫草粉末100mg三份，采用液固比12mL/g氯仿/紫草，50℃水浴，功率450W條件下，超聲提取25min，所得紫草總萘醌色素含量為7.037、7.042、7.040mg/g，平均值為7.040 mg/g，優(yōu)于或等于正交試驗(yàn)中的任何一組。

4 結(jié)果與討論

結(jié)合單因素實(shí)驗(yàn)及正交試驗(yàn)結(jié)果分析，最終確定提取的最佳工藝為：液固比12mL/g氯仿/紫草，在50℃水浴中，以450W的功率超聲提取25min。

根據(jù)萘醌類(lèi)成分的極性，本實(shí)驗(yàn)考察以氯仿為提取溶劑時(shí)紫草化學(xué)成分，旨在進(jìn)一步提高紫草萘醌的收率。本項(xiàng)研究所得紫草最佳提取工藝方法簡(jiǎn)單，穩(wěn)定，可行，且容易掌握，可為紫草化學(xué)成分提取提供一定參考。

[1]劉芳,王小平,伍偉禎.薄層掃描法測(cè)定燒傷膏中左旋紫草素的含量[J].基層中藥雜志,2001,15 (2):21-22.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:第一部[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:238-239.

[3]嚴(yán)松柏,談獻(xiàn)和,胡玉濤.紫草的研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2003,14(2):103-105.