急性百草枯中毒患者血清高遷移率族蛋白B1動(dòng)態(tài)變化的意義及預(yù)后的判斷

米 慧，郭景瑞，李愛(ài)紅，王玲玲

(山東省聊城市第二人民醫(yī)院急診科，山東聊城252601)

百草枯(paraquat，PQ)又稱對(duì)草快、克無(wú)蹤，化學(xué)名為1，1-二甲基-4，4聯(lián)吡啶陽(yáng)離子鹽，是我國(guó)目前廣泛使用速效觸殺型除草劑，噴灑后能夠很快發(fā)揮作用，接觸土壤后迅速失活，在土壤中無(wú)殘留［1］。隨著PQ的應(yīng)用越來(lái)越廣泛，其中毒病例，特別是口服中毒患者也越來(lái)越多見(jiàn)，由于其致死量小，無(wú)特效解毒劑，急性中毒患者往往病情兇險(xiǎn)，病死率高。急性PQ中毒可導(dǎo)致機(jī)體損傷，近年來(lái)已有學(xué)者關(guān)注急性中毒與全身炎性反應(yīng)綜合征及多臟器功能障礙綜合征的關(guān)系，PQ可造成機(jī)體一系列應(yīng)激反應(yīng)，刺激神經(jīng)、內(nèi)分泌和免疫系統(tǒng)釋放大量炎性介質(zhì)［2］。近幾年來(lái)，高遷移率族蛋白B1(high mobility group protein B1，HMGB1)作為一種敏感性的、非特異性的炎性標(biāo)志物，在感染性疾病、風(fēng)濕免疫性疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、嚴(yán)重的損傷與休克等領(lǐng)域已廣泛用于臨床和科研［3］，但在急性PQ中毒中的研究未見(jiàn)報(bào)道。2010年1月至2011年6月，我院對(duì)62例急性PQ中毒患者進(jìn)行HMGB1水平測(cè)定，并分析其臨床意義，旨在探討HMGB1與急性PQ中毒的相關(guān)性及其臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我院急診科住院的急性PQ中毒患者62例，其中，男26例，女36 例，年齡(28.14 ±8.36)歲，均為口服中毒，于中毒后24 h內(nèi)入院。排除標(biāo)準(zhǔn):患有心腦血管疾病，發(fā)熱等感染性疾病、風(fēng)濕免疫性疾病、嚴(yán)重?fù)p傷與休克等可能引起HMGB1升高的疾病。以患者住院期間臨床死亡為觀察終點(diǎn)，分為存活組和死亡組。存活組 32例，平均年齡(27.84±9.06)歲，平均口服20%PQ溶液(25.28±20.35)mL;死亡組30 例，平均年齡(28.23 ±8.85)歲，平均口服20% PQ溶液(82.28 ± 25.63)mL;平均存活時(shí)間(5.54±3.27)d。健康對(duì)照組為門診健康體檢者40例，其中男17例，女23例，年齡(29.33±9.52)歲。存活組、死亡組和健康對(duì)照組3組在性別、年齡等參數(shù)間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2 檢測(cè)方法 62例中毒患者于中毒后第1天、第7天與第14天檢測(cè)HMGB1含量，同時(shí)對(duì)40例健康對(duì)照組進(jìn)行HMGB1檢測(cè)。采清晨空腹靜脈血2 mL，室溫下3000 r/min離心20 min后留取血清，置于－80℃冰箱中冷凍保存待檢。采用酶聯(lián)免疫分析(ELISA)方法［4］測(cè)定血清HMGB1濃度(試劑由武漢中美科技有限公司提供)，按試劑盒說(shuō)明書的操作步驟進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，三組間比較用方差分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PQ中毒患者HMGB1濃度的變化 PQ中毒各組血清HMGB1濃度測(cè)定值顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)，說(shuō)明PQ中毒可導(dǎo)致血清HMGB1水平升高，中毒后第7天顯著高于中毒后第1天(P＜0.01)，中毒后第14天又顯著高于中毒后第7天(P＜0.05)，說(shuō)明隨著中毒時(shí)間的延長(zhǎng)，血清HMGB1水平逐漸升高(表1)。

表1 PQ急性中毒不同病程血清HMGB1濃度測(cè)定值的動(dòng)態(tài)變化(±s，μg/L)

表1 PQ急性中毒不同病程血清HMGB1濃度測(cè)定值的動(dòng)態(tài)變化(±s，μg/L)

注:與對(duì)照組比較，*P ＜0.01，與上一組比較，△P ＜0.01，△△P＜0.05;兩組比較:對(duì)照組平均秩次為32.05，中毒組平均秩次為57.68，Munn-Whitney U 統(tǒng)計(jì)量為 398.42，Wilcoxon W 為 1251.30，Z檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量為 Z= －3.518，P=0.007

2.2 血清HMGB1濃度測(cè)定值及預(yù)后 PQ中毒存活組血清HMGB1濃度測(cè)定值顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)，PQ中毒死亡組顯著高于 PQ中毒存活組(P＜0.01)，說(shuō)明PQ中毒后，隨著病情的逐漸加重，血清HMGB1濃度也逐漸升高，其預(yù)后與血清HMGB1濃度測(cè)定值呈顯著正相關(guān)(表2)。

表2 三組血清HMGB1濃度測(cè)定值的變化比較(±s，μg/L)

表2 三組血清HMGB1濃度測(cè)定值的變化比較(±s，μg/L)

注:與上一組比較，*P ＜0.01

2.3 兩組同期血清HMGB1濃度測(cè)定值比較 PQ中毒存活組第1、7、14天血清HMGB1濃度測(cè)定值顯著高于對(duì)照組(P ＜0.01)，PQ 中毒死亡組第1、7、14天又顯著高于同期存活組(P＜0.01)。說(shuō)明PQ中毒后其嚴(yán)重程度與血清HMGB1濃度測(cè)定值密切相關(guān)，且隨著中毒時(shí)間的延長(zhǎng)，血清HMGB1逐漸升高，特別是第14天血清HMGB1仍繼續(xù)升高者，病死率顯著升高(表3)。

表3 死亡組與存活組同期、存活組與對(duì)照組HMGB1濃度測(cè)定值比較(±s，μg/L)

表3 死亡組與存活組同期、存活組與對(duì)照組HMGB1濃度測(cè)定值比較(±s，μg/L)

注:與對(duì)照組比較，*P ＜0.01;與存活組同期比較，＊＊P ＜0.01

3 討論

PQ是一種廣泛使用的除草劑，屬有機(jī)雜環(huán)類觸殺、滅生型高毒性除草劑，易溶于水并以陽(yáng)離子形式存在，國(guó)內(nèi)市售的PQ為20%水溶液，遇堿性物質(zhì)即分解失活，正因其應(yīng)用廣泛，自服或者誤服導(dǎo)致了大量的中毒案例，PQ口服中毒吸收快，對(duì)人及動(dòng)物有極高的肺毒性。PQ可經(jīng)皮膚吸收、呼吸道吸入和消化道進(jìn)入體內(nèi)，大量攝入PQ會(huì)導(dǎo)致消化道腐蝕，腸道吸收后會(huì)導(dǎo)致肺、肝、腎、胰臟等器官急性功能衰竭而使患者迅速死亡。一般認(rèn)為30 mg/kg的劑量即可致死，死亡率可高達(dá)90%。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)發(fā)病機(jī)制尚無(wú)統(tǒng)一意見(jiàn)，其中，炎性因子的參與是重要的發(fā)病機(jī)制之一。粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞被PQ激活后可合成和釋放大量的細(xì)胞因子、前炎性介質(zhì)、趨化因子等多種生物學(xué)效應(yīng)因子，這在組織炎癥及肺纖維化的發(fā)生、發(fā)展中有重要意義［5］。核因子κB(nuclear factor-κB，NF-κB)的激活與肺損傷和肺間質(zhì)纖維化有密切關(guān)系［6］，NF-κB 活化后可使宿主細(xì)胞因子的基因轉(zhuǎn)錄增加，并激活其他細(xì)胞合成白細(xì)胞介素6、白細(xì)胞介素8等因子，形成一個(gè)NF-κB與細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)之間的正反饋圈，放大炎性反應(yīng)，使肺損傷進(jìn)一步加重，NF-κB通過(guò)調(diào)控腫瘤壞死因子和白細(xì)胞介素等炎性因子的產(chǎn)生，又受其影響形成“級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)”，加速炎癥的形成，NF-κB還能使中性粒細(xì)胞的凋亡延遲，活化的中性粒細(xì)胞產(chǎn)生大量氧自由基又能加重炎性反應(yīng)［7］。這樣導(dǎo)致機(jī)體的免疫功能失調(diào)，誘發(fā)新的炎癥，同時(shí)并發(fā)各種感染而進(jìn)一步加重炎性反應(yīng)，使炎性介質(zhì)大量產(chǎn)生使血中水平升高。

HMGB1是廣泛存在于真核細(xì)胞核中最重要的非組蛋白之一，具有多種核外生物學(xué)功能，尤其是作為細(xì)胞因子廣泛參與炎性反應(yīng)［8］，HMGB1是重要的炎性介質(zhì)，可以促進(jìn)炎性細(xì)胞活化和刺激促炎因子的產(chǎn)生和分泌［9］，HMGB1刺激單核細(xì)胞使其黏附作用增加，分泌更多的細(xì)胞因子和促炎介質(zhì)［10］。HMGB1生物學(xué)功能豐富，它可以被分泌到胞質(zhì)或胞外，誘導(dǎo)細(xì)胞分化，產(chǎn)生趨化作用，作為重要的炎性因子在機(jī)體炎性反應(yīng)中起重要作用［11］。

本研究結(jié)果表明，PQ中毒患者血清HMGB1均有不同程度的升高，中毒后第1天即有明顯升高，以后仍逐漸升高，與對(duì)照組比較，有顯著性差異，說(shuō)明PQ對(duì)患者機(jī)體的損傷，產(chǎn)生了全身炎性反應(yīng)綜合征，從而釋放大量炎性介質(zhì)。本組結(jié)果還顯示，死亡組HMGB1水平顯著高于存活組，且中毒后第14天更明顯，而存活組第14天HMGB1水平與第7天比較有下降趨勢(shì)，說(shuō)明隨著HMGB1水平的增加PQ中毒的嚴(yán)重程度也顯著增加，PQ中毒越嚴(yán)重，炎性反應(yīng)范圍越大，提示HMGB1與PQ中毒嚴(yán)重程度密切相關(guān)。說(shuō)明HMGB1升高是PQ中毒的危險(xiǎn)因素之一，不但與PQ中毒發(fā)生有關(guān)，且與PQ中毒進(jìn)展及不良事件有關(guān)，是炎性標(biāo)志物中預(yù)測(cè)PQ中毒事件的重要指標(biāo)之一。

綜上所述，急性PQ中毒患者血清HMGB1水平顯著高于健康人，動(dòng)態(tài)檢測(cè) PQ中毒患者血清HMGB1水平變化有重要的實(shí)用價(jià)值，有助于判斷其中毒程度，HMGB1表達(dá)可作為判斷PQ中毒生物學(xué)行為和預(yù)后的客觀指標(biāo)之一，對(duì)于指導(dǎo)其治療、判斷預(yù)后有重要意義。

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