GC法測(cè)定人參有機(jī)氯農(nóng)藥殘留物的含量

關(guān)澤明，郭曉玲，陸子釗

（1.廣東藥學(xué)院 中心實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510006；2.廣東永康藥業(yè)有限公司，廣東 云浮 527100）

人參為五加科植物人參（Panax ginseng C.A.Mey.）的干燥根及根莖。具有提高免疫力、抗癌、抗疲勞、抗缺氧、抗輻射、抗衰老、滋陰壯陽、增強(qiáng)記憶力、消炎等多種功能。有機(jī)氯農(nóng)藥是一類廣譜殺蟲劑，屬于神經(jīng)毒物，可致癌的有機(jī)氯農(nóng)藥以六六六和滴滴涕等為代表，在我國(guó)曾廣泛適用于農(nóng)業(yè)和中藥人工栽培生產(chǎn)中。雖然禁用多年，但是由于它們的半衰期長(zhǎng)，至今在中藥材中的檢出率仍相當(dāng)高［1－3］。本實(shí)驗(yàn)建立了用毛細(xì)管柱氣相色譜外標(biāo)法對(duì)人參中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量進(jìn)行測(cè)定的方法，為人參的安全使用提供科學(xué)的質(zhì)量控制依據(jù)。

1 儀器與試劑

美國(guó) Varian CP－3800氣相色譜儀，配有Combi Pal自動(dòng)進(jìn)樣器、CP－SIL24CB彈性石英毛細(xì)管柱（30m×0.32mm×0.25mm）、63Ni電子捕獲檢測(cè)器（ECD）、Galaxie色譜工作站；RE－52C型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；BP210D型電子天平（十萬分之一）。

二氯甲烷、丙酮 、石油醚（60℃～90℃）均重蒸，實(shí)驗(yàn)用水為雙蒸水，濃硫酸等所用化學(xué)試劑均為分析純。

農(nóng)藥對(duì)照品溶液包括六六六的四種異構(gòu)體及滴滴涕的四種異構(gòu)體均由中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究所提供，其質(zhì)量濃度分別為：甲體六六六（α－BHC51.8μg／mL）、乙體六六六（β－BHC）、丙體六六六（γ－BHC）均為50.0μg／mL、丁體六六六（δ－BHC53.3μg／mL），p，p’－DDT（49.3μg／mL）、p，p’－DDD（49.7μg／mL）、p，p’－DDE、o，p’－DDT 均為50.1μg／mL；五氯硝基苯（PCNB質(zhì)量濃度為100μg／mL，由農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所提供）。

12批人參樣品產(chǎn)自吉林，均由廣東永康藥業(yè)有限公司陳繼慈副主任藥師提供并鑒定為人參五加科植物人參（Panax ginseng C.A.Mey.）的干燥根及根莖。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 樣品溶液的制備

先將人參粉（過80目篩）樣品于60℃干燥4h取本品約2g，精密稱定，置于100mL具塞錐形瓶中，加水20mL浸泡過夜。準(zhǔn)確加丙酮40mL，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用丙酮補(bǔ)足減失的重量。再加氯化鈉約6g，準(zhǔn)確加二氯甲烷30mL，稱定重量，超聲處理15min，再稱定重量，用二氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，靜置使分層。將有機(jī)相迅速移入裝有5g無水硫酸鈉的100mL具塞錐形瓶中，放置4h。準(zhǔn)確量取35mL，于40℃水浴上減壓濃縮至近干，加5mL石油醚如前法反復(fù)操作三次至二氯甲烷及丙酮除凈，溶解并轉(zhuǎn)移至10mL具塞刻度離心管中，加石油醚準(zhǔn)確稀釋至5mL，小心加入濃硫酸1mL，振搖1min，離心（3000r·min－1）10min，準(zhǔn)確量取上清液2mL，置具刻度的試管中，40℃下用氮?dú)獯担瑢⑷芤簼饪s至約0.5mL，加石油醚準(zhǔn)確稀釋至1mL，作為樣品溶液備用。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色譜柱：CP－SIL 24CB（30m×0.25mm×0.25um，美國(guó)Varian公司）彈性石英毛細(xì)管柱；進(jìn)樣口溫度260℃，檢測(cè)器溫度300℃，柱升溫程序?yàn)槌跏紲囟?20℃，保持2min，以5℃／min升至200℃保持10min，以2℃／min升至220℃保持2min，以8℃／min升至250℃保持19min；載氣為高純氮?dú)猓ㄙ|(zhì)量分?jǐn)?shù)≥99.999%），2μL分流進(jìn)樣、分流比（1：1）；外標(biāo)法定量。將單一農(nóng)藥對(duì)照品液依法進(jìn)樣，各農(nóng)藥組分的出峰順序依次為 α－BHC、PCNB、γ－BHC、β－BHC、δ－BHC、pp’－DDE、o，p’－DDT、pp－DDD、pp’－DDT。取樣品溶液2μL，依法測(cè)定，理論塔板數(shù)按α－BHC對(duì)照品色譜峰計(jì)算不低于1×105，各農(nóng)藥組分色譜峰與其相鄰色譜峰之間分離度均大于1.5。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密移取α－BHC、β－BHC、γ－BHC、δ－BHC、p，p’－DDT、p，p’－DDE、p，p’－DDD、o，p’－DDT 對(duì)照液各1.0mL，PCNB對(duì)照液0.5mL，分別置于10mL量瓶中，加石油醚配成5.0μg／mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液（按標(biāo)準(zhǔn)值分別準(zhǔn)確計(jì)算，以下同）。精密移取5.0μg／mL對(duì)照品儲(chǔ)備液各適量，用石油醚配制成1、5、10、25、50、100μg／L的混合對(duì)照品溶液。分別取上述混合對(duì)照品溶液各2μL進(jìn)樣，以峰高為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度（μg／L）為橫坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程（見表1）。結(jié)果表明，各被測(cè)組分在1～100μg／L濃度范圍內(nèi)與峰高均呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2 方法的最低檢測(cè)限試驗(yàn)

配制質(zhì)量濃度為0.5μg／L和1.0μg／L的混合對(duì)照品溶液進(jìn)樣，以3倍的噪聲作為方法的最低檢出量，測(cè)得α－BHC、β－BHC、γ－BHC、δ－BHC、p，p’－DDT、p，p’－DDE、p，p’－DDD、o，p’－DDT、PCNB的最低檢測(cè)濃度均為50ng／L；p.p’－DDT的最低檢測(cè)濃度為100ng／L。

2.3.3 精密度試驗(yàn)

精密吸取濃度為50μg／L的9種混合對(duì)照品溶液2μL，按“2.2”項(xiàng)下的色譜條件操作，重復(fù)進(jìn)樣6次，以峰高計(jì)算，結(jié)果 α－BHC、β－BHC、γ－BHC、δ－BHC、p，p’－DDT、p，p’－DDE、p，p’－DDD、o，p’－DDT、PCNB 的RSD值分別為1.15%、1.30%、1.46%、1.06%、2.84%、1.58%、0.67%、1.63%、1.96%，表明儀器精密度良好。

表1 9種有機(jī)氯農(nóng)藥回歸方程

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批人參粉樣品（批號(hào)為101206）5份，按照“2.1”項(xiàng)下制備樣品，依法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰高計(jì)算含量，測(cè)得α－BHC、β－BHC、γ－BHC、δ－BHC和PCNB的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)（RSD 值）分別為56.51ng／g（1.99%）、77.35ng／g（2.65%）、46.20ng／g（1.84%）、119.09ng／g（2.00%）和169.24ng／g（2.77%），表明方法的重復(fù)性良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份人參粉樣品 （1號(hào)樣）溶液2μL，分別于0、4、8、12h依法連續(xù)進(jìn)樣4次進(jìn)行測(cè)定，以峰高計(jì)算α－BHC、β－BHC、γ－BHC、δ－BHC和 PCNB 的 RSD 值分別為3.34%、2.61%、3.47%、2.87%、3.31%，表明樣品溶液在12h內(nèi)測(cè)定穩(wěn)定性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗(yàn)

取同一批人參粉樣品（批號(hào)為101206）6份，每份取約1g，精密稱定。分別準(zhǔn)確加入質(zhì)量濃度為100μg／L混合對(duì)照品溶液1.0mL，混合后揮干溶劑。按“2.1”項(xiàng)下制備供試樣品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。

2.3.7 樣品含量測(cè)定

準(zhǔn)確稱取各批次人參樣品，按“2.1”項(xiàng)下制備樣品溶液，依法進(jìn)行測(cè)定，按外標(biāo)法以峰高計(jì)算含量，結(jié)果見表3、圖2。

3 討論

由圖1及圖2實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)照品滴滴涕四種異構(gòu)體出峰的保留時(shí)間處人參樣品色譜圖中并未出峰，12批人參樣品均是此現(xiàn)象，表明實(shí)驗(yàn)所提供的人參中均未檢出滴滴涕。

2010年版《中國(guó)藥典》未對(duì)人參［1］8的農(nóng)藥殘留量進(jìn)行限量，參考同版藥典中黃芪［1］283和甘草［1］80農(nóng)藥殘留量限度規(guī)定（總六六六和總DDT均不得過千萬分之二、五氯硝基苯不得過千萬分之一，由表3的數(shù)據(jù)可以看出，本文所檢測(cè)的人參樣品中六六六、五氯硝基苯在人參藥材中均有檢出，其中101206批號(hào)人參樣品的總六六六殘留總量為298.81ng／g、五氯硝基苯殘留總量為118.86ng／g，均高于藥典中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量的規(guī)定；其它11個(gè)批號(hào)樣品均未超出藥典規(guī)定，故建議在人參藥材標(biāo)準(zhǔn)中增加有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量限度的檢查項(xiàng)目。

表2 人參粉樣品的加樣回收率

表3 人參中有機(jī)氯農(nóng)藥測(cè)定結(jié)果

圖1 人參中有機(jī)氯農(nóng)藥色譜

圖2 混合對(duì)照溶液中9種有機(jī)氯農(nóng)藥色譜

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典［M］.一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

［2］成啟剛，寇登民，張靜，等.氣相色譜法測(cè)定人參、黃芪中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留［J］.南開大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2004，37（2）：125－128.