大黃通便顆粒中大黃的含量測定研究

陳邦恩，劉美龍

（福建生物工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院，福建 福州 350001）

大黃通便顆粒主要是由大黃等中藥組成，具有清熱通便的功效，臨床常用于治療實熱食滯、便秘以及濕熱型食欲不振等。大黃為其方中主藥，蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚為其所含的主要有效成分，故本研究參考中國藥典2010年版一部大黃藥材［1］及文獻報道的含量測定方法，建立高效液相色譜法測定蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量，并對方法學(xué)進行了考察，該方法簡便，可行，重復(fù)性好。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

Agilent 1200液相色譜儀；超純水器（MILLI－Q）；KQ－500VDB型三頻數(shù)控超聲波清洗器（奧特寶恩斯儀器有限公司）。

1.2 試藥

對照品：蘆薈大黃素對照品（含量以98.0%計，購自中國藥品生物制品檢定所，批號：110795－201007）；大黃酸對照品（供含量測定用，購自中國藥品生物制品檢定所，批號：0757－200206）；大黃素對照品（供含量測定用，購自中國藥品生物制品檢定所，批號：110756－200110）；大黃酚對照品（供含量測定用，購自中國藥品生物制品檢定所，批號：110796－200514）；大黃素甲醚對照品（含量以99.8%計，購自中國藥品生物制品檢定所，批號：110758－201013）。樣品：大黃通便顆粒（江蘇辰牌藥業(yè)有限公司，批號：110118、110307、110316）以及陰性樣品。試劑：甲醇為色譜純，磷酸為分析純，提取用的甲醇、二氯甲烷為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：XB－C18（5μm，4.6mm×250mm）；流動相：甲醇－0.1%磷酸溶液（85：15）；檢測波長為254nm；理論塔板數(shù)按大黃素峰計算應(yīng)不低于3000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備

精密稱取蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品和大黃素甲醚對照品適量，加10%二氯甲烷的甲醇溶液溶解，分別制成每1mL含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚各100μg，大黃素甲醚50μg的溶液；分別精密量取上述對照品溶液各1mL，置同一25mL量瓶中，加10%二氯甲烷的甲醇溶液定溶至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液制備

取本品粉末（過四號篩）約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，稱定重量，加熱回流45min，放冷，密塞，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10mL，置燒瓶中，揮去溶劑，加8%鹽酸溶液10mL，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）2min，再加二氯甲烷10mL，加熱回流1h，冷卻，移至分液漏斗中，用少量二氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取二氯甲烷液，酸液用二氯甲烷振搖提取2次，每次15mL，合并二氯甲烷液，減壓回收溶劑至干，殘渣加10%二氯甲烷甲醇溶液使溶解，轉(zhuǎn)移至25mL量瓶中，加10%二氯甲烷甲醇溶液至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備

取缺大黃陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性樣品溶液。

2.2.4 測定法

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.3 空白試驗

分別吸取“2.2”項下的混合對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液，注入高效液相色譜儀進行測定，實驗結(jié)果表明陰性樣品溶液在與對照品相應(yīng)的保留時間處無色譜峰出現(xiàn)。方中各味藥對蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚色譜峰無干擾。結(jié)果見圖1。

2.4 線性試驗

精密稱取在105℃干燥12h的蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品和大黃素甲醚對照品適量，加10%二氯甲烷的甲醇溶液溶解分別制成每1mL含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚各100μg，大黃素甲醚50μg的溶液。分別精密吸取上述5種溶液各1、2、3、4、5、6、16mL分別置100mL容量瓶中，加10%二氯甲烷的甲醇溶液稀釋定容至刻度，搖勻，即得，精密吸取20μL，分別注入高效液相色譜儀中，按上述色譜條件進行測定。以進樣量（X）對峰面積（Y）進行線性回歸，得回歸方程為：蘆薈大黃素 Y＝5545.9X－31.839，r＝0.9998；大黃酸 Y＝4695.2X－20.192，r＝0.9997；大黃素 Y＝4000.5X－14.995，r＝0.9997；大黃酚 Y＝5814.8X－28.445，r＝0.9996；大黃素甲醚 Y＝3088.1X－7.9162，r＝0.9996。試驗結(jié)果表明，蘆薈大黃素在0.02436～0.3898μg／mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系；大黃酸在0.0181～0.2896μg／mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系；大黃素在0.01856～0.2970μg／mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系；大黃酚在0.01866～0.2986 μg／mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系；大黃素甲醚在0.01～0.16 μg／mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

圖1 對照品、樣品及陰性樣品的色譜

2.5 重復(fù)性試驗

取同一批號（批號：110118）樣品，按“2.2”項下供試品的方法，平行制備6份供試品溶液，進樣測定，計算蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量，RSD分別為1.01%、2.62%、1.18%、2.54%、2.99%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取同一批號（批號：110118）樣品溶液，分別于0、2、4、6、8、10、12h后按上述色譜條件測定蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量，含量基本不變，RSD分別為2.79%、1.48%、0.50%、0.82%、0.57%，表明供試品液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 精密度試驗

在上述色譜條件下，取按“2.2”項下配置的蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚對照品溶液分別連續(xù)進樣6次，RSD 分別為 1.01%、0.45%、0.68%、0.73%、0.79%。

2.8 回收率試驗

精密稱取已知含量的大黃通便顆粒（江蘇辰牌藥業(yè)有限公司，批號：110118）樣品，分別精密加入一定量的蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚對照品，按“2.2”項下操作制備供試品溶液并測定，計算回收率，取得了較滿意的回收率，表明該方法可行。結(jié)果見表1、2、3、4、5。

表1 蘆薈大黃素加樣回收率試驗結(jié)果（n＝6）

表2 大黃酸加樣回收率試驗結(jié)果（n＝6）

表3 大黃素加樣回收率試驗結(jié)果（n＝6）

表4 大黃酚加樣回收率試驗結(jié)果（n＝6）

表5 大黃素甲醚加樣回收率試驗結(jié)果（n＝6）

2.9 樣品測定

取3批樣品，按“2.2”項下供試品溶液制備方法制備，按上述色譜條件測定，計算，結(jié)果見表6。

表6 大黃含量測定結(jié)果

3 討論

我們曾比較氯仿與二氯甲烷作為提取溶劑進行提取，結(jié)果表明二者提取的含量相當(dāng)，而氯仿毒性較大，故采用二氯甲烷作為本方法的提取溶劑。本實驗所采用測定方法測定蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚，重現(xiàn)性良好，回收率高，且在該色譜條件下，蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚進樣精密度良好，故該方法結(jié)論可靠，可作為大黃通便顆粒的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

［1］國家藥典委員會編.中國藥典2010年版［S］.一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：22－23.