乳腺癌中人表皮生長因子受體-2的表達(dá)與血管生成的相關(guān)性*

王 剛 趙三平 朱海燕 鄒玉環(huán) 王明軍 吳禹錚 徐衛(wèi)國

乳腺癌的生長和轉(zhuǎn)移依賴于新生血管生成,腫瘤微血管密度（MVD）是評價腫瘤血管生成的重要指標(biāo)之一。HER-2是乳腺癌重要的分子標(biāo)志物，有關(guān)HER-2與MVD及乳腺癌臨床病理學(xué)特征之間關(guān)系一直存在爭議[1-2]。本研究旨在探討HER-2在乳腺癌中的表達(dá)及其與血管生成之間的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2006年1月—2007年1月于我院就診的具有完整臨床及病理資料的乳腺癌標(biāo)本（乳腺癌組）98例，患者平均年齡（48.8±11.2）歲；同時取乳腺根治術(shù)標(biāo)本中癌旁乳腺組織56例為對照組，患者平均年齡（50.8±13.6）歲?；颊呔鶠榕?，術(shù)前均未行抗腫瘤治療。組織學(xué)類型：浸潤性導(dǎo)管癌81例，黏液癌、小管癌及乳頭狀癌等其他共17例。臨床分期:Ⅰ~Ⅱ期62例，Ⅲ期36例。組織學(xué)分級:高分化17例，中分化58例，低分化23例。腋窩淋巴結(jié)狀態(tài):淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性（淋巴轉(zhuǎn)移組）63例，淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移（淋巴未轉(zhuǎn)移組）35例。

1.2 方法 標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片4張，行HE染色，HER-2、MVD免疫組化染色，PBS代替一抗做空白對照,實驗步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。HER-2主要為細(xì)胞膜著色，陽性腫瘤細(xì)胞數(shù)<10%（-），10%~30%（+），>30%且<50%（++），>50%（+++），其中-、+、++記為陰性表達(dá)，+++記為陽性表達(dá)。MVD計數(shù)標(biāo)準(zhǔn)：CD105陽性染色主要定位于血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，先在100倍顯微鏡下尋找微血管密集的5個區(qū)域作為熱點，再在200倍鏡下計數(shù)MVD值，5個區(qū)域的均值為MVD值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件處理。計量資料以±s表示，2組間均數(shù)比較行t檢驗，計數(shù)資料組間比較行χ2檢驗，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 各組乳腺組織中HER-2陽性表達(dá)情況及MVD值比較 HER-2陽性率及MVD在乳腺癌組與癌旁組、淋巴轉(zhuǎn)移組與淋巴未轉(zhuǎn)移組中比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 不同臨床特征的HER-2陽性表達(dá)情況及MVD值比較 不同腫瘤大小、組織學(xué)分級、TNM分期乳腺癌患者組織中的HER-2陽性率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。MVD值在不同組織學(xué)分級乳腺癌患者中差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

表2 不同臨床特征的HER-2陽性表達(dá)情況及MVD值比較

3 討論

HER-2基因定位于染色體17q21，編碼分子質(zhì)量為185 ku的跨膜蛋白，與表皮生長因子受體（EG?FR）具有高度同源性，正常情況下處于非激活狀態(tài)，參與細(xì)胞生長、分化的調(diào)節(jié)。當(dāng)受到體內(nèi)外某些因素的作用而激活時具有腫瘤轉(zhuǎn)化活性。其主要是通過基因擴(kuò)增和蛋白過度表達(dá)，在細(xì)胞信號傳遞系統(tǒng)中起橋梁作用，能刺激細(xì)胞增生、浸潤和轉(zhuǎn)移，與乳腺癌等多種腫瘤的生物學(xué)行為有關(guān)。研究顯示乳腺癌中HER-2/neu蛋白的過度表達(dá)約占15%~30%[1]。本研究顯示HER-2在乳腺癌組織中陽性率為20.4%，高于癌旁組織，與上述文獻(xiàn)報道一致。

臨床TNM分期和腫瘤組織學(xué)分級一直是臨床評估腫瘤惡性程度和患者預(yù)后的常用指標(biāo)，尤其是腋窩淋巴結(jié)狀態(tài)更為重要。本研究結(jié)果顯示，HER-2陽性表達(dá)率在不同臨床TNM分期、組織學(xué)分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，提示HER-2與腫瘤的惡性增殖、進(jìn)展有關(guān)，其表達(dá)水平可作為反映乳腺癌生物學(xué)行為和判斷乳腺癌預(yù)后的重要指標(biāo)之一。

目前已有多種血管內(nèi)皮標(biāo)志物用于標(biāo)記腫瘤微血管進(jìn)行MVD計數(shù)，其中CD105對血管內(nèi)皮細(xì)胞增生和活性具有高選擇性。有關(guān)MVD與乳腺癌臨床病理學(xué)特征及預(yù)后關(guān)系一直存在爭議。本研究應(yīng)用CD105標(biāo)記MVD，結(jié)果顯示乳腺癌組織中MVD值高于癌旁組織，腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組中MVD值高于淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組，低分化組中MVD值高于中、高分化組，表明MVD與乳腺癌臨床病理學(xué)特征及預(yù)后關(guān)系密切。張春玲等[2]亦得出類似結(jié)果，但Shivakumar等[3]研究認(rèn)為MVD可能與早期乳腺癌存在關(guān)聯(lián)，當(dāng)腫瘤進(jìn)展出現(xiàn)壞死和出血后，MVD與乳腺癌臨床病理學(xué)特征無相關(guān)性；Kanjana?panjapol等[4]用CD34標(biāo)記MVD，亦發(fā)現(xiàn)MVD與乳腺癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移沒有相關(guān)性，且認(rèn)為MVD不能作為預(yù)測預(yù)后不良的指標(biāo)。結(jié)合本文及相關(guān)研究[5]，筆者推測選用不同的血管標(biāo)志物（F-VIII、CD34、CD31、CD105）、腫瘤病理類型不同、切片選擇的差異及計數(shù)方法各異可能是造成研究結(jié)果不統(tǒng)一的主要原因。

“腫瘤生長依賴于血管生成”這一觀點已為廣大學(xué)者所公認(rèn)。HER-2可能通過促進(jìn)腫瘤血管生成而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞進(jìn)展。Alicia等[6]用突變的HER-2轉(zhuǎn)化N1H3T3成纖維細(xì)胞以誘導(dǎo)VEGF/血管通透因子（VPF），發(fā)現(xiàn)其因缺氧而進(jìn)一步增強；用抗HER-2抗體處理HER-2過表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞株SKBR-3，結(jié)果顯示VEGF/VPF蛋白表達(dá)隨劑量增加而降低，且認(rèn)為HER-2至少部分通過對VEGF/VPF強烈的上調(diào)作用，刺激了腫瘤新生血管生成。

[1]Shin SJ,Hyjek E,Early E,et al.Intratumoral heterogeneity of her-2/neu in invasive mammary carcinomas using fluorescenceinsitu hy?bridization and tissue microarray[J].Int J Surg Pathol,2006,14(4):279-284.

[2]張春玲,馬鴻達(dá),白冬雨,等.乳腺浸潤性導(dǎo)管癌微血管生成與轉(zhuǎn)錄因子Ets1表達(dá)之間的關(guān)系[J].天津醫(yī)藥,2009,37(2):94-97.

[3]Shivakumar S,Prabhakar BT,Jayashree K,et al.Evaluation of se?rum vascular endothelial growth factor(VEGF)and microvessel den?sity(MVD)as prognostic indicators in carcinoma breast[J].J Can?cer Res Clin Oncol,2009,135(4):627-636.

[4]Kanjanapanjapol S,Wongwaisayawan S,Phuwapraisirisan S,et al.Prognostic significance of microvessel density in breast cancer of Thai women[J].J Med Assoc Thai,2007,90(2):282-290.

[5]王剛,徐衛(wèi)國,鄒玉環(huán).腫瘤微血管密度研究現(xiàn)狀及進(jìn)展[J].中國醫(yī)藥,2008,3(2):117-118.

[6]Alicia ZS,Blanca OS,Mariana GH,et al.RaPid Production of candi?da albicans chlamydosPores in liquid media under various incuba?tion conditions[J].NiPPon Ishinkin Gakkai Zasshi,2006,47(3):231-234.