正交試驗(yàn)法優(yōu)選西洋參提取工藝

李素婷，劉 郁

(徐州工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇 徐州 221140)

西洋參(Radix Panacis Quinquefolii)，別名洋參、花旗參，為五加科植物西洋參(Panax quinquefolium L.)的根，原產(chǎn)于北美，我國(guó)亦有栽培。西洋參性涼，味甘、苦，補(bǔ)肺陰，清火，養(yǎng)胃生津，含人參皂甙Ro、Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1 以及假人參皂甙 F11(pseudoginsenoside F11)等，另外還含精氨酸、天冬氨酸等18種氨基酸。具有抗癌、抗疲勞、抗缺氧、抗輻射、抗衰老等多種功能［1-2］。本文以人參皂苷Re為指標(biāo)，對(duì)西洋參提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化。

1 材料

西洋參，市售;人參皂苷Re對(duì)照品(供含量測(cè)定用)，中國(guó)藥品生物制品檢定所;乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

HP1100高效液相色譜儀、G1328A紫外可見檢測(cè)器、HP色譜工作站，美國(guó)惠普公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 人參皂苷Re含量測(cè)定

采用高效液相色譜法［3］測(cè)定。

2.1.1 色譜條件 YMC-C18色譜柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈-0.5%磷酸溶液(20 ∶80)，流速:1 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):205 nm;柱溫:20℃;進(jìn)樣量:20 μL。

2.1.2 線性關(guān)系考察 精密稱取人參皂昔Re對(duì)照品適量，加流動(dòng)相配制成濃度為0.500 mg/mL的對(duì)照品溶液，精密吸取 l，2，4，6，8，10 mL 置 10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣20 μL，測(cè)定峰面積，以峰面積(Y)對(duì)進(jìn)樣量(X，μg)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為:Y=168.24 X+1.38，r=0.999 9，人參皂苷 Re 在 1 ～10.00 μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.1.3 供試品溶液的制備 西洋參提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮定容至100 mL，精密吸取0.1 mL，置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過即得。

2.1.4 含量測(cè)定 分別取供試品溶液和對(duì)照品溶液(0.25 mg/mL)20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法，以峰面積計(jì)算含量。

2.2 單因素試驗(yàn)

2.2.1 提取時(shí)間的選擇 取西洋參20 g，4份，分別加70%乙醇200 mL，分別在70℃回流提取1，1.5，2和3 h，測(cè)定提取液中人參皂苷Re的含量，結(jié)果分別為 1.75%，2.05%，2.08% 和 2.09%?？梢?，提取1.5 h后含量增加很少，因此，選擇提取時(shí)間為1.5 h。

2.2.2 提取溫度的選擇 取西洋參20 g，3份，分別加70%乙醇200 mL，分別在60，70和80℃回流提取1.5 h，測(cè)定提取液中人參皂苷Re的含量，分別為2.04%，2.08%和2.19%?？梢?，在80 ℃提取含量最高，因此，選擇提取溫度為80℃。

2.3 正交試驗(yàn)方案

確定了提取時(shí)間和提取溫度，設(shè)計(jì)乙醇濃度、溶劑用量(料液比)、提取次數(shù)三因素三水平的正交試驗(yàn)(表1)，以人參皂苷Re含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)篩選最佳工藝條件。結(jié)果見表2～3。

表1 因素水平表

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 正交試驗(yàn)方差分析表

由正交試驗(yàn)的直觀分析，影響提取效果的因素的順序?yàn)樘崛〈螖?shù)＞乙醇濃度＞溶劑的用量，提取的次數(shù)影響最大。從方差分析結(jié)果看，提取次數(shù)和乙醇濃度對(duì)提取影響較顯著，而溶劑用量也比較顯著。最佳的組合為A3B1C3，但乙醇的濃度為70%和80%提取的效果相差不大，因此選用70%的乙醇。確定最佳的提取工藝為A2B1C3。即用70%的乙醇提取3次，溶劑用量為西洋參的10倍(料液比為1∶10)。

2.4 最佳提取工藝的驗(yàn)證

取西洋參20 g，3份，分別加70%乙醇200 mL，分別在80℃回流提取1.5 h，提取3次，合并濾液。濃縮至100 mL，測(cè)定提取液中人參皂苷Re的含量，結(jié)果分別為2.26%，2.33%和2.39%，平均為2.33%。與正交試驗(yàn)結(jié)果基本一致。

3 結(jié)論

本研究結(jié)合單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，以人參皂苷Re為指標(biāo)，對(duì)西洋參提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化。得到的最佳工藝為:用70%乙醇提取3次，每次提取時(shí)間為1.5 h，提取溫度為80℃，70%乙醇的用量為西洋參的10倍，即料液比為1∶10。并對(duì)該工藝進(jìn)行了驗(yàn)證，結(jié)果較為理想。但由于本研究樣品量較小，放大試驗(yàn)結(jié)果如何還有待進(jìn)一步研究。

［1］王 蕾，王英平，許世泉，等.西洋參化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展［J］.特產(chǎn)研究，2007(3):73-77.

［2］包?；ǎ瑫原h(huán)，韓雪山，等.西洋參皂苷對(duì)H2O2致PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用［J］.中國(guó)生化藥物雜志，2009，30(5):302-305.

［3］張繼昆，楊福國(guó).高效液相色譜法測(cè)定西洋參露中西洋參總皂苷的含量［J］.中成藥，1995，17(9):15-16.