間質(zhì)性膀胱炎肥大細(xì)胞雌激素受體的表達(dá)及意義

王 旭 張 衛(wèi) 韓瑞發(fā)

間質(zhì)性膀胱炎（interstitial cystitis，IC）是一種原因未明，以尿急、尿頻、膀胱充盈后恥骨上區(qū)及盆腔區(qū)疼痛，排尿后減輕為表現(xiàn)的臨床綜合征。男女患病比率為1∶9，其中自身免疫及雌激素在IC發(fā)病中可能的作用目前研究尚少[1]。本文旨在通過(guò)對(duì)IC組織中肥大細(xì)胞雌激素受體表達(dá)水平的研究，了解雌激素是否通過(guò)調(diào)控肥大細(xì)胞內(nèi)雌激素受體的表達(dá)，進(jìn)而揭示雌激素水平在IC發(fā)病中的作用，為進(jìn)一步治療提供理論依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2003年10月—2009年12月的入住我院的女性IC患者（IC組）18例，平均年齡（45.9±6.2）歲，平均病程（2.3±0.8）年。所有患者均符合美國(guó)糖尿病、消化及腎病協(xié)會(huì)（NIDDK）制定的IC診斷標(biāo)準(zhǔn)。選擇同期12例無(wú)膀胱刺激癥狀病史、尿常規(guī)正常和細(xì)菌培養(yǎng)陰性的女性為對(duì)照組（均為腎盂腫瘤行膀胱袖口狀切除患者,并知情同意），平均年齡（45.2±6.0）歲。2組間年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.297，P>0.05）。

1.2 方法 IC組在局麻下實(shí)施膀胱鏡檢查及膀胱組織活檢，對(duì)照組手術(shù)中行膀胱組織活檢。分別取膀胱左側(cè)壁、右側(cè)壁和三角區(qū)標(biāo)本，每例組織制做石蠟標(biāo)本連續(xù)切片30張，厚度為4 μm。用隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)抽取每例組織標(biāo)本的5張切片,以0.5%甲苯胺藍(lán)染色1 min，比較2組標(biāo)本肥大細(xì)胞浸潤(rùn)密度。鋨酸液固定組織標(biāo)本，超薄切片，連續(xù)觀察每例標(biāo)本5張切片中透射電鏡下肥大細(xì)胞與脫顆粒肥大細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，計(jì)算脫顆粒肥大細(xì)胞構(gòu)成比。隨機(jī)抽取每例組織標(biāo)本的5張切片進(jìn)行多克隆雌激素受體免疫組化法染色，與甲苯胺藍(lán)染色肥大細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞的形態(tài)、位置及相關(guān)性比較。隨機(jī)抽取每例組織標(biāo)本的5張切片依次滴加抗人肥大細(xì)胞類(lèi)胰酶單克隆抗體及即用型多克隆抗人雌激素受體抗體，進(jìn)行免疫組化雙染色；每張切片選擇5個(gè)含有最多陽(yáng)性細(xì)胞的高倍視野進(jìn)行計(jì)數(shù)；每份標(biāo)本的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)以平均陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/高倍視野（HP）表示；比較2組標(biāo)本雌激素受體陽(yáng)性肥大細(xì)胞（ER+）的數(shù)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，符合正態(tài)分布的資料應(yīng)用±s描述，符合正態(tài)分布且滿足方差齊性要求的資料應(yīng)用t檢驗(yàn)。不符合正態(tài)分布的以M（P25，P75）表示，行秩和檢驗(yàn)。兩者之間的相關(guān)性用Pearson相關(guān)分析處理，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肥大細(xì)胞計(jì)數(shù) IC組肥大細(xì)胞數(shù)目為4.38（3.96，5.29）個(gè)/HP；75.3%的肥大細(xì)胞為不同程度脫顆粒狀態(tài)。對(duì)照組為2.30（2.26，2.40）個(gè)/HP；未見(jiàn)明顯脫顆粒肥大細(xì)胞存在。2組肥大細(xì)胞密度比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=2.561，P<0.05）。

2.2 肥大細(xì)胞、ER+細(xì)胞染色結(jié)果 光鏡下肥大細(xì)胞經(jīng)甲苯胺藍(lán)染色呈紫紅色，見(jiàn)圖1，其中邊界模糊，細(xì)胞周?chē)悬c(diǎn)狀顆粒者為脫顆粒肥大細(xì)胞。光鏡下雌激素抗體標(biāo)識(shí)的肥大細(xì)胞及ER+細(xì)胞呈淺紅色（AEC顯色），散在于結(jié)締組織之間,見(jiàn)圖2。ER+細(xì)胞與甲苯胺藍(lán)染色的肥大細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征相似。IC組織標(biāo)本中ER+3.48（3.16，3.69）個(gè)/HP，對(duì)照組ER+0.82（0.79，0.86）個(gè)/HP，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=2.988，P<0.05）。

2.3 IC組ER+細(xì)胞數(shù)與肥大細(xì)胞數(shù)相關(guān)性分析 IC組ER+數(shù)與肥大細(xì)胞數(shù)呈正相關(guān)（r=0.884，t=3.870，P<0.01)。免疫組化雙染色結(jié)果顯示，鏡下可見(jiàn)膀胱黏膜肥大細(xì)胞被染成深藍(lán)色，雌激素受體位于肥大細(xì)胞表面，并被染成棕黃色，見(jiàn)圖3。

圖1 肥大細(xì)胞（0.5%甲苯胺藍(lán)染色×1 000）

圖3 肥大細(xì)胞類(lèi)胰酶抗體及雌激素抗體標(biāo)識(shí)的肥大細(xì)胞（免疫組化雙染色×400）

3 討論

IC與其他自身免疫性疾病有某些共同特點(diǎn)：多發(fā)于女性（90%），患有自身免疫性疾病的患者同時(shí)患IC的比例較高，常伴有系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎、硬皮病及自身免疫性甲狀腺炎等[2]。透視電鏡下，IC膀胱組織中肥大細(xì)胞可見(jiàn)大量顆粒釋放后殘留的小囊空泡，表明IC患者的肥大細(xì)胞被激活導(dǎo)致顆粒內(nèi)容物釋放和脫顆粒。而肥大細(xì)胞活性增強(qiáng)可解釋膀胱平滑肌高反應(yīng)狀態(tài)和運(yùn)動(dòng)異常，產(chǎn)生患者特有的尿急、尿頻和膀胱疼痛癥狀[3]。近年來(lái)，通過(guò)膀胱灌注辣椒素來(lái)治療IC，并取得了明顯的效果；就是基于以上的理論。除肥大細(xì)胞在IC病因中的作用已經(jīng)得到多方面的證明外，很多研究還表明IC患者尿液中含有大量肥大細(xì)胞顆粒中所含的組胺，大部分女性IC患者絕經(jīng)期前臨床癥狀較重，而妊娠期有明顯的癥狀好轉(zhuǎn)表現(xiàn)，其中可能的原因就是雌激素通過(guò)活化肥大細(xì)胞引起發(fā)病[4]。

雌激素可通過(guò)誘導(dǎo)生長(zhǎng)因子受體的表達(dá)，使肥大細(xì)胞數(shù)目增多，并能增強(qiáng)肥大細(xì)胞釋放組胺的能力；雌二醇在體內(nèi)能夠促使組胺的釋放。另一些研究表明雌二醇只是在體內(nèi)放大了這種釋放作用，女性排卵期前，尿中的組胺會(huì)明顯增加[5]。這也進(jìn)一步解釋了IC患者在月經(jīng)期前癥狀加重的原因。肥大細(xì)胞可能是連接雌激素和IC之間的重要紐帶。但目前關(guān)于雌激素對(duì)IC膀胱組織作用的靶點(diǎn)和可能的細(xì)胞學(xué)機(jī)制仍未明了。

本研究結(jié)果證實(shí)所有18例IC患者膀胱黏膜標(biāo)本肥大細(xì)胞的雌激素受體均出現(xiàn)明顯的過(guò)表達(dá)。在正常膀胱活檢組織標(biāo)本中未能檢測(cè)到明顯的雌激素受體表達(dá)。從同一標(biāo)本連續(xù)切片上的細(xì)胞位置和形態(tài)看，雌激素受體陽(yáng)性細(xì)胞與肥大細(xì)胞吻合，兩者呈正相關(guān)。Harnden等[6]在研究IC膀胱黏膜時(shí)也發(fā)現(xiàn)肥大細(xì)胞單獨(dú)表達(dá)雌激素受體；除肥大細(xì)胞外，巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等其他免疫細(xì)胞均不表達(dá)雌激素受體。所有類(lèi)固醇激素都是通過(guò)結(jié)合相應(yīng)受體作用于靶細(xì)胞而發(fā)揮生物效應(yīng)的，組織中相應(yīng)受體的存在是組織對(duì)該激素敏感的最好標(biāo)志，這一結(jié)果不僅為雌激素的作用提供了直接的免疫學(xué)依據(jù)，而且有助于揭示雌激素參與IC的發(fā)病機(jī)制。

IC可能與干燥綜合征的病因一樣，都是由自身免疫異常所引起的；用潑尼松治療干燥綜合征后可使膀胱炎癥狀消失，但遠(yuǎn)期療效有待進(jìn)一步觀察[7]。但筆者認(rèn)為，發(fā)生在女性體內(nèi)的雌激素作用僅能解釋為IC的傾向，而并非最終的病因。IC的發(fā)病機(jī)制很可能是雌激素、肥大細(xì)胞的損傷作用與膀胱黏膜自身保護(hù)功能減弱的協(xié)同作用。

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