硫酸-甲苯胺藍-麗春紅苦味酸染色法在顯示組織肥大細胞中的應用

丁桂齡，鄭建明，劉艷芳，蔣 慧

肥大細胞含有豐富的酶系和多種生物活性物質，這些物質作為機體重要的細胞成分，廣泛參與機體的免疫調節(jié)、過敏反應、腫瘤發(fā)生發(fā)展等，由此可見肥大細胞在機體病理、生理等過程中起至關重要的作用。常規(guī)HE染色不能直觀地辨別肥大細胞，最常用的顯示肥大細胞的特殊染色方法為甲苯胺藍染色，但其相關試劑配制的方法有多種。為對比清晰地顯示人體組織中的肥大細胞，作者選用硫酸-甲苯胺藍-麗春紅苦味酸染色法進行組合染色，效果佳，現介紹如下。

1 材料與方法

1.1 材料選取2019年7月海軍軍醫(yī)大學附屬長海醫(yī)院病理科存檔的胰腺、十二指腸手術切除標本8例，標本均經10%中性福爾馬林固定，脫水，透明，浸蠟，包埋，3 μm厚切片，充分烤片。

1.2 主要試劑及配制(1)硫酸-甲苯胺藍染液：3%硫酸100 mL，0.5%甲苯胺藍100 mL。將3%硫酸和0.5%甲苯胺藍按照1 ∶20比例配制成硫酸-甲苯胺藍染液。(2)麗春紅苦味酸染色液[1]：0.5%麗春紅S水溶液10 mL，苦味酸飽和水溶液90 mL。

1.3 方法組織切片脫蠟至水，經硫酸-甲苯胺藍染液作用40 min，自來水洗，麗春紅苦味酸染色液滴染3 min。冷風干燥，中性樹膠封固。

2 結果

肥大細胞呈圓形或橢圓形，沿血管腔散在或聚集分布，胞核較小呈淺藍色，胞質顆粒較多，呈深藍紫色；膠原纖維呈粉紅色，粗細不均彎曲狀，不規(guī)則分布(圖1)。

圖1 肥大細胞(紅箭頭)呈輪廓清晰的圓形或卵圓形，胞核呈淡藍色，胞質顆粒呈藍紫色；膠原纖維(藍箭頭)呈不規(guī)則且彎曲狀分布的深粉紅色；兩者與周圍組織對比明顯，染色鮮明，硫酸-甲苯胺藍-苦味酸麗春紅染色

3 討論

肥大細胞異質性是其重要生物學特征之一?，F已證實在嚙齒類動物中，肥大細胞可分為黏膜型肥大細胞和結締組織型肥大細胞。黏膜型肥大細胞主要分布于呼吸道、小腸黏膜層；結締組織型肥大細胞主要分布于皮膚結締組織、腹腔漿膜、肌肉、血管及周圍神經組織[2]，兩者共同參與機體的病理、生理過程。因此，顯示組織中肥大細胞的形態(tài)、數量變化和相關組織成分具有重要意義。文獻報道[3]固定液的選擇會影響肥大細胞的染色效果，其中采用Carnoy液固定組織后，肥大細胞的染色效果最佳。然而，本實驗發(fā)現組織經常規(guī)10%中性福爾馬林固定后，肥大細胞沿血管腔散在或聚集分布，呈著色鮮艷的深藍紫色或紫紅色，與周圍組織對比度高，極易識別。傳統(tǒng)方法中經甲苯胺藍染色顯示的肥大細胞，與周圍組織對比度欠佳、不易辨別且染色背景深。隨著技術的進步和染色方法的改進，改良甲苯胺藍染色法和高錳酸鉀硫酸甲苯胺藍染色法相繼出現，前者分化過程不易控制，后者染液配制過程相對繁瑣，兩種染色法顯示肥大細胞的效果均不理想。本實驗在原有甲苯胺藍染色的基礎上，采用硫酸-甲苯胺藍-麗春紅苦味酸染色法進行組合染色，可直觀清晰且對比鮮明地顯示肥大細胞、膠原纖維、血管和紅細胞。肥大細胞的特點是細胞呈圓形或橢圓形，單個或彌漫存在于結締組織內，散在或聚集沿血管腔分布，胞核較小呈淺藍色，胞質顆粒較多呈深藍紫色。膠原纖維呈粗細不均且波浪狀、不規(guī)則排列的粉紅色。血管呈淡藍色、稍粉染的不規(guī)則腔隙樣結構，管腔內含紅細胞。硫酸-甲苯胺藍-麗春紅苦味酸染色法顯示肥大細胞的原理可能為：肥大細胞粗大的嗜堿性顆粒內含有屬于硫酸酯的肝素、組胺、五羥色胺等物質，這些物質具有異色性，而甲苯胺藍染色法具有異染性，故可以將肥大細胞中的顆粒染為紫紅色[4]；一定濃度的酸性染液可增強肥大細胞中胞質顆粒的異染性[5]，故在染液的配制上選擇了偏酸性的3%硫酸液；采用麗春紅苦味酸染液進行膠原纖維著色，可以更好地顯示肥大細胞與周圍其它組織的毗鄰關系。染色過程中需要注意染液配制的比例，染色后的切片不能長時間經乙醇脫水和經二甲苯透明，否則已著色的組織將褪色或著色不均，建議染色完畢的組織直接經冷風干燥后封片、閱片和拍照。

綜上所述，采用硫酸-甲苯胺藍-麗春紅苦味酸進行組合染色來顯示組織中的肥大細胞、血管、紅細胞和膠原纖維，該方法更具實用性和可操作性，染色鮮艷，背景理想，對比度佳，效果穩(wěn)定。