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    2型糖尿病8-異前列腺素F2α與脂聯(lián)素基因SNP+45(T/G)多態(tài)性的相關(guān)性

    2011-07-16 02:53:16徐玉善趙云娟楊慧英黃云超
    天津醫(yī)藥 2011年7期
    關(guān)鍵詞:前列腺素脂聯(lián)素等位基因

    徐玉善 趙云娟 楊慧英 劉 華 李 紅 黃云超

    脂聯(lián)素具有促進(jìn)糖脂代謝、減輕胰島素抵抗、抗感染以及抗動脈粥樣硬化等作用[1]。脂聯(lián)素基因編碼位于染色體的3q27,與糖尿病的易感位點位于同一區(qū)域[2]。國內(nèi)一項Meta分析顯示,脂聯(lián)素基因+45G為中國2型糖尿?。═2DM)的危險等位基因型,SNP+45GG基因型與T2DM顯著相關(guān)[3]。氧化應(yīng)激水平升高是導(dǎo)致糖尿病慢性并發(fā)癥的重要機(jī)制[4]。8-異前列腺素F2a是反應(yīng)體內(nèi)氧化應(yīng)激的較穩(wěn)定指標(biāo)之一,其水平穩(wěn)定,可以特異、準(zhǔn)確地反映體內(nèi)的氧化應(yīng)激水平[2]。本研究旨在通過檢測T2DM患者脂聯(lián)素SNP+45(T/G)不同基因型的8-異前列腺素F2α水平,探討脂聯(lián)素基因多態(tài)性與T2DM氧化應(yīng)激的關(guān)系。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 2008年3月—2009年10月于我院就診的T2DM患者(T2DM組)120例,男63例,女57例,平均年齡(50.7±7.8)歲,病史2~20年,平均(10.2±7.9)年,體質(zhì)量指數(shù)(BMI)≥20 kg/m2,平均(24.6±3.25)kg/m2。納入標(biāo)準(zhǔn):參照1999年WHO糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn),空腹血糖≥7.0 mmol/L或(和)口服75 g葡萄糖粉后2 h血糖≥11.1 mmol/L,若只符合一項,需在另一天復(fù)查確認(rèn)。排除標(biāo)準(zhǔn):1型糖尿病和其他特殊類型糖尿病者;住院期間處于感染、急性心肌梗死、外傷、手術(shù)、糖尿病酮癥酸中毒、糖尿病高滲性昏迷等急性應(yīng)激狀態(tài)者。同時取2009年1月—2009年3月來我院門診正常體檢者60例為對照組,男31例,女29例,平均年齡(49.5±6.8)歲,BMI正常(<24 kg/m2),平均(23.3±2.4)kg/m2。2組性別(χ2=0.011)、年齡(t=1.014)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),BMI差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.991,P<0.01)。

    1.2 主要儀器與試劑 全自動生化分析儀(AU5421,日本奧林巴斯),放射免疫法儀器GC-1500購自中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司,8-異前列腺素F2α試劑盒購自Cayman公司。

    1.3 脂聯(lián)素基因多態(tài)性的檢測 采用常規(guī)氯酚萃取法提取外周血白細(xì)胞DNA;PCR上游引物5′- GCA GCT CCT AGA AGT AGA CTC TGC TC-3′,下游引物5′-GCA GGT CTG TGA TGA AAG AGG CC-3 ′。PCR反應(yīng)體積為50 μL:10×buffer 5 μL,25 mmol/L MgCl23 μL,2 mmol/L三磷酸脫氧核糖核苷(dNTP)1 μL,上下游引物(20 μmol/L)各1 μL,DNA 模板1 μL,Taq 酶(5×103U/L)1 μL,滅菌純水37 μL。反應(yīng)條件:94℃初期變性5 min,94℃變性30 s,63℃退火30 s,72℃延伸30 s,共35個循環(huán),72℃延伸5 min。PCR產(chǎn)物的酶切:用SmaⅠ酶切,30℃加熱模塊,過夜酶切。2%的瓊脂糖凝膠,電泳結(jié)束于凝膠成像系統(tǒng)觀察條帶并照相。選擇典型的TT、TG和GG型條帶樣品送晨綠生物公司進(jìn)行測序。

    1.4 觀察指標(biāo) 全自動生化分析儀測定空腹血糖(FPG)、總膽固醇(CHO)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C);放射免疫法測定空腹胰島素(FINS);胰島素抵抗采用穩(wěn)態(tài)模型HOMA公式評估,即HOMA-IR=FINS(mU/L)×FPG(mmol/L)/22.5;競爭酶免疫測定法檢測血清8-異前列腺素F2α的水平。

    1.5 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。計量數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)分布檢驗,非正態(tài)分布資料,經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行分析。以Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗樣品的群體代表性,2組間均數(shù)比較用t檢驗,多組間均數(shù)比較采用方差分析,組間兩兩比較采用SNK-q法,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 8-異前列腺素F2α檢測 T2DM患者血清8-異前列腺素F2α水平高于對照組[(57.92±11.87)ng/L vs(24.81±13.5)ng/L],差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=16.84,P<0.01)。

    2.2 T2DM脂聯(lián)素不同基因型Hardy-Weinberg吻合度檢驗 372 bp的脂聯(lián)素基因經(jīng)SmaⅠ酶切產(chǎn)生3種基因型:TT(野生型,372 bp);TG(雜合子型,372 bp、163 bp、209 bp);GG(純合子突變型,163 bp、209 bp)。對群體資料作Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗,符合Hardy-Weinberg平衡定律(T2DM組χ2=2.8,對照組χ2=0.70,總體χ2=0.932,均P>0.05);120例T2DM患者中T等位基因的頻率為66.7%,G等位基因的頻率為33.3%,與對照組(T等位基因的頻率為73.3%,G等位基因的頻率為26.7%)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=1.659,P>0.05)。 2型糖尿病GG基因型與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=7.059,P<0.05),見表1。

    表1 T2DM組與對照組SNP 45等位基因型分布

    2.3 T2DM患者脂聯(lián)素基因SNP 45多態(tài)性不同基因型臨床指標(biāo)比較 各基因型間FPG、CHO、TG、HDL-C、LDL-C、HOMA-IR及血清8-異前列腺素F2α水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P >0.05);GG型BMI高于TT及TG型(均P<0.05),見表2。

    表2 T2DM患者脂聯(lián)素基因SNP 45多態(tài)性不同基因型臨床指標(biāo)比較 ±s)

    表2 T2DM患者脂聯(lián)素基因SNP 45多態(tài)性不同基因型臨床指標(biāo)比較 ±s)

    *P<0.05

    TT TG GG F 64 32 24 BMI(kg/m2)23.12±2.51 23.42±3.32 25.43±3.26 5.69*FPG(mmol/L)10.23±3.58 10.09±2.98 11.55±3.91 1.48 CHO(mmol/L)5.33±1.21 5.08±1.36 5.24±1.28 0.416 TG(mmol/L)2.21±1.39 2.14±1.72 2.18±1.47 0.023 64 32 24 HDL-C(mmol/L)1.11±0.32 1.05±0.27 1.19±0.31 1.44 LDL-C(mmol/L)2.96±0.76 3.07±0.82 2.87±0.69 0.49 2.96±1.86 3.17±1.92 3.65±2.23 1.17 8-異前列腺素F2α(ng/L)55.51±16.69 59.89±13.87 59.60±12.91 1.16 TT TG GG F基因型 n基因型 n HOMA-IR

    3 討論

    脂聯(lián)素基因突變可導(dǎo)致脂聯(lián)素分泌減少或功能不全[6]。Hara等[7]報道日本人患T2DM的風(fēng)險與脂聯(lián)素基因SNP+45(T/G)多態(tài)性有關(guān)。+45G等位基因是由糖耐量異常(impaired glucose tolerance,IGT)轉(zhuǎn)變成糖尿病的危險預(yù)測因子[8]。本研究結(jié)果進(jìn)一步證實糖尿病患者GG基因型者居多,與國內(nèi)學(xué)者報道一致[9]。目前研究認(rèn)為,胰島素抵抗是其發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[10]。Stumvoll等[11]對371例非糖尿病人群研究結(jié)果顯示,在無糖尿病家族史的人群中,含有G等位基因者的BMI高,胰島素敏感性下降[6]。本研究結(jié)果顯示,GG基因型的HOMA-IR較TT和TG呈增高趨勢,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義,BMI均增高且差異有統(tǒng)計意義,提示GG基因型患者可能有較明顯的胰島素抵抗。另一研究示+45G等位基因者可能由于合并有低度炎癥,而使IGT的發(fā)生率增高[12]。

    糖尿病胰島素抵抗、低度炎癥均可使體內(nèi)氧化應(yīng)激水平增高。本研究顯示,血漿8-異前列腺素F2α水平在T2DM組明顯高于對照組,表明T2DM患者體內(nèi)氧化應(yīng)激可能明顯增加,但對于有較明顯的胰島素抵抗的GG型基因T2DM患者,其體內(nèi)的8-異前列腺素F2α水平較TT和TG型并無明顯增高。鑒于本研究中樣本數(shù)較少,脂聯(lián)素SNP+45 GG基因型的氧化應(yīng)激狀況在其易患糖尿病的病生理機(jī)制中的作用尚有待擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究。

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    [3]鄒莉玲,趙耐青,秦國友.中國人群2型糖尿病脂聯(lián)素基因+45位點多態(tài)性的Meta分析[J].中國衛(wèi)生統(tǒng)計,2008,25(3):250-252.

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