2型糖尿病8-異前列腺素F2α與脂聯(lián)素基因SNP+45（T/G）多態(tài)性的相關(guān)性

徐玉善 趙云娟 楊慧英 劉 華 李 紅 黃云超

脂聯(lián)素具有促進(jìn)糖脂代謝、減輕胰島素抵抗、抗感染以及抗動脈粥樣硬化等作用[1]。脂聯(lián)素基因編碼位于染色體的3q27，與糖尿病的易感位點位于同一區(qū)域[2]。國內(nèi)一項Meta分析顯示，脂聯(lián)素基因+45G為中國2型糖尿?。═2DM）的危險等位基因型，SNP+45GG基因型與T2DM顯著相關(guān)[3]。氧化應(yīng)激水平升高是導(dǎo)致糖尿病慢性并發(fā)癥的重要機(jī)制[4]。8-異前列腺素F2a是反應(yīng)體內(nèi)氧化應(yīng)激的較穩(wěn)定指標(biāo)之一，其水平穩(wěn)定，可以特異、準(zhǔn)確地反映體內(nèi)的氧化應(yīng)激水平[2]。本研究旨在通過檢測T2DM患者脂聯(lián)素SNP+45（T/G）不同基因型的8-異前列腺素F2α水平，探討脂聯(lián)素基因多態(tài)性與T2DM氧化應(yīng)激的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2008年3月—2009年10月于我院就診的T2DM患者（T2DM組）120例，男63例，女57例，平均年齡（50.7±7.8）歲，病史2～20年，平均（10.2±7.9）年，體質(zhì)量指數(shù)（BMI）≥20 kg/m2，平均（24.6±3.25）kg/m2。納入標(biāo)準(zhǔn)：參照1999年WHO糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)，空腹血糖≥7.0 mmol/L或（和）口服75 g葡萄糖粉后2 h血糖≥11.1 mmol/L，若只符合一項，需在另一天復(fù)查確認(rèn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：1型糖尿病和其他特殊類型糖尿病者；住院期間處于感染、急性心肌梗死、外傷、手術(shù)、糖尿病酮癥酸中毒、糖尿病高滲性昏迷等急性應(yīng)激狀態(tài)者。同時取2009年1月—2009年3月來我院門診正常體檢者60例為對照組，男31例，女29例，平均年齡（49.5±6.8）歲，BMI正常（<24 kg/m2）,平均（23.3±2.4）kg/m2。2組性別（χ2=0.011）、年齡（t=1.014）差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），BMI差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=1.991，P<0.01）。

1.2 主要儀器與試劑 全自動生化分析儀（AU5421，日本奧林巴斯），放射免疫法儀器GC-1500購自中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司，8-異前列腺素F2α試劑盒購自Cayman公司。

1.3 脂聯(lián)素基因多態(tài)性的檢測 采用常規(guī)氯酚萃取法提取外周血白細(xì)胞DNA；PCR上游引物5′- GCA GCT CCT AGA AGT AGA CTC TGC TC-3′，下游引物5′-GCA GGT CTG TGA TGA AAG AGG CC-3 ′。PCR反應(yīng)體積為50 μL：10×buffer 5 μL，25 mmol/L MgCl23 μL，2 mmol/L三磷酸脫氧核糖核苷（dNTP）1 μL，上下游引物（20 μmol/L）各1 μL，DNA 模板1 μL，Taq 酶（5×103U/L）1 μL，滅菌純水37 μL。反應(yīng)條件：94℃初期變性5 min，94℃變性30 s，63℃退火30 s，72℃延伸30 s，共35個循環(huán)，72℃延伸5 min。PCR產(chǎn)物的酶切：用SmaⅠ酶切，30℃加熱模塊，過夜酶切。2%的瓊脂糖凝膠，電泳結(jié)束于凝膠成像系統(tǒng)觀察條帶并照相。選擇典型的TT、TG和GG型條帶樣品送晨綠生物公司進(jìn)行測序。

1.4 觀察指標(biāo) 全自動生化分析儀測定空腹血糖（FPG）、總膽固醇（CHO）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）；放射免疫法測定空腹胰島素（FINS）；胰島素抵抗采用穩(wěn)態(tài)模型HOMA公式評估，即HOMA-IR=FINS（mU/L）×FPG（mmol/L）/22.5；競爭酶免疫測定法檢測血清8-異前列腺素F2α的水平。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。計量數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)分布檢驗，非正態(tài)分布資料，經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行分析。以Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗樣品的群體代表性，2組間均數(shù)比較用t檢驗，多組間均數(shù)比較采用方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q法，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 8-異前列腺素F2α檢測 T2DM患者血清8-異前列腺素F2α水平高于對照組[（57.92±11.87）ng/L vs（24.81±13.5）ng/L]，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=16.84，P<0.01）。

2.2 T2DM脂聯(lián)素不同基因型Hardy-Weinberg吻合度檢驗 372 bp的脂聯(lián)素基因經(jīng)SmaⅠ酶切產(chǎn)生3種基因型：TT（野生型，372 bp）；TG（雜合子型，372 bp、163 bp、209 bp）；GG（純合子突變型，163 bp、209 bp）。對群體資料作Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗，符合Hardy-Weinberg平衡定律（T2DM組χ2=2.8，對照組χ2=0.70，總體χ2=0.932，均P>0.05）；120例T2DM患者中T等位基因的頻率為66.7%，G等位基因的頻率為33.3%，與對照組（T等位基因的頻率為73.3%，G等位基因的頻率為26.7%）比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=1.659，P>0.05）。 2型糖尿病GG基因型與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=7.059，P<0.05），見表1。

表1 T2DM組與對照組SNP 45等位基因型分布

2.3 T2DM患者脂聯(lián)素基因SNP 45多態(tài)性不同基因型臨床指標(biāo)比較 各基因型間FPG、CHO、TG、HDL-C、LDL-C、HOMA-IR及血清8-異前列腺素F2α水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05）；GG型BMI高于TT及TG型（均P<0.05），見表2。

表2 T2DM患者脂聯(lián)素基因SNP 45多態(tài)性不同基因型臨床指標(biāo)比較 ±s）

表2 T2DM患者脂聯(lián)素基因SNP 45多態(tài)性不同基因型臨床指標(biāo)比較 ±s）

*P<0.05

TT TG GG F 64 32 24 BMI（kg/m2）23.12±2.51 23.42±3.32 25.43±3.26 5.69*FPG（mmol/L）10.23±3.58 10.09±2.98 11.55±3.91 1.48 CHO（mmol/L）5.33±1.21 5.08±1.36 5.24±1.28 0.416 TG（mmol/L）2.21±1.39 2.14±1.72 2.18±1.47 0.023 64 32 24 HDL-C（mmol/L）1.11±0.32 1.05±0.27 1.19±0.31 1.44 LDL-C（mmol/L）2.96±0.76 3.07±0.82 2.87±0.69 0.49 2.96±1.86 3.17±1.92 3.65±2.23 1.17 8-異前列腺素F2α（ng/L）55.51±16.69 59.89±13.87 59.60±12.91 1.16 TT TG GG F基因型 n基因型 n HOMA-IR

3 討論

脂聯(lián)素基因突變可導(dǎo)致脂聯(lián)素分泌減少或功能不全[6]。Hara等[7]報道日本人患T2DM的風(fēng)險與脂聯(lián)素基因SNP+45（T/G）多態(tài)性有關(guān)。+45G等位基因是由糖耐量異常（impaired glucose tolerance，IGT）轉(zhuǎn)變成糖尿病的危險預(yù)測因子[8]。本研究結(jié)果進(jìn)一步證實糖尿病患者GG基因型者居多，與國內(nèi)學(xué)者報道一致[9]。目前研究認(rèn)為，胰島素抵抗是其發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[10]。Stumvoll等[11]對371例非糖尿病人群研究結(jié)果顯示，在無糖尿病家族史的人群中，含有G等位基因者的BMI高，胰島素敏感性下降[6]。本研究結(jié)果顯示，GG基因型的HOMA-IR較TT和TG呈增高趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，BMI均增高且差異有統(tǒng)計意義，提示GG基因型患者可能有較明顯的胰島素抵抗。另一研究示+45G等位基因者可能由于合并有低度炎癥，而使IGT的發(fā)生率增高[12]。

糖尿病胰島素抵抗、低度炎癥均可使體內(nèi)氧化應(yīng)激水平增高。本研究顯示，血漿8-異前列腺素F2α水平在T2DM組明顯高于對照組，表明T2DM患者體內(nèi)氧化應(yīng)激可能明顯增加，但對于有較明顯的胰島素抵抗的GG型基因T2DM患者，其體內(nèi)的8-異前列腺素F2α水平較TT和TG型并無明顯增高。鑒于本研究中樣本數(shù)較少，脂聯(lián)素SNP+45 GG基因型的氧化應(yīng)激狀況在其易患糖尿病的病生理機(jī)制中的作用尚有待擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究。

[1]German AJ，Ryan VH，German AC，et al.Obesity,its associated dis?orders and the role of inflammatory adipokines in companion ani?mals[J].Vet J，2010,185（1）：4-9.

[2]Guo X，Saad MF，Langefeld CD，et al.Genome-wide linkage of plas?ma adiponectin reveals a major locus on chromosome 3q distinct from the adiponectin structural gene:the IRAS family study[J].Dia?betes，2006，55（6）：1723-1730.

[3]鄒莉玲，趙耐青，秦國友.中國人群2型糖尿病脂聯(lián)素基因+45位點多態(tài)性的Meta分析[J].中國衛(wèi)生統(tǒng)計，2008，25（3）：250-252.

[4]李樹穎，鄭輝，于德民.對2型糖尿病腎病患者氧化應(yīng)激與尿MCP-1的臨床研究[J].天津醫(yī)藥，2008，36（10）：771-774.

[5]Dimitrow PP，Undas A，Wolkow P，et al.Enhanced oxidative stress in hypertrophic cardiomyopathy[J].Pharmacol Rep,2009,61(3)：491-495.

[6]Ziemke F,Mantzoros CS.Adiponectin in insulin resistance:lessons from translationalresearch[J].Am J Clin Nutr,2010,91(1)：258S-261S.

[7]Hara K,Boutin P,Mori Y,et al.Genetic variation in the gene encod?ing adiponectin is associated with an increased risk of type 2 diabe?tes in the Japanese population[J].Diabetes,2002,51(2):536-540.

[8]Zacharova J,Chiasson JL,Laakso M,et al.The common polymor?phisms(single nucleotide polymorphism[SNP]+45 and SNP+276)of the adiponectin gene predict the conversion from impaired glu?cose tolerance to type 2 diabetes:the STOP-NIDDM trial[J].Diabe?tes,2005,54(3):893-899.

[9]吳文君，卜瑞芳，劉國萍，等.2型糖尿病合并高甘油三酯血癥患者血清脂聯(lián)素基因多態(tài)性分析[J].中國糖尿病雜志，2008，16（7）：401-404.

[10]Tanabe K，Liu Z，Patel S,et al.Genetic deficiency of glycogen syn?thase kinase-3beta corrects diabetes in mouse models of insulin re?sistance[J].PLoS Biol，2008，6（2）：e37.

[11]Stumvoll M，Tschritter O，F(xiàn)ritsche A,et al.Association of the T-G polymorphism in adiponectin(exon 2)with obesity and insulin sen?sitivity:interaction with family history of type 2 diabetes[J].Diabe?tes，2002，51（1）:37-41.

[12]Gonzalez Sanchez JL，Martinez Clatrava MJ，Martinez Larred MT，et al.Interaction of the-308G/A promoter polymorphism of the tu?mor necrosis factor-alpha gene with single-nucleotide polymor?phism 45 of the adiponectin gene:effect on serum adiponectin con?centrations in a spanish population[J].Clin Chem，2006，52（1）：97-103.