錯配修復基因hMLH1在胃癌的表達及與胃癌臨床進展的關系＊

寧志豐，劉復興，武 倩

(1.咸寧學院基礎醫(yī)學院人體解剖學教研室，湖北 咸寧 437100;2.咸寧學院基礎醫(yī)學院病理學教研室;3.咸寧學院護理學院)

胃癌是一種在全球發(fā)病率僅次于肺癌的惡性腫瘤，對于其發(fā)病機制仍然不清楚。本研究運用免疫組化的方法試圖闡明主要的錯配修復基因hMLH1在胃癌的表達、與胃癌臨床病理參數(shù)及與患者臨床進展間的關系。

1 材料與方法

1.1 標本

收集咸寧市中心醫(yī)院普外科于2000年1月至2005年12月的胃癌石蠟標本66例。其中男性39例，女性27例;年齡32～77歲，平均61.6±12.3歲;高中分化癌39例，低分化癌27例;無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者35例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者31例。

1.2 胃癌組織中hMLH1蛋白的表達

將石蠟組織塊切成4μm厚切片。采用免疫組化SP法進行染色，具體方法按說明書(兔抗人單克隆抗體購自Santa Cruz公司，1∶100稀釋;SP試劑盒購自武漢博士德生物工程公司)進行。DAB顯色，蘇木素復染，中性樹膠封片。以PBS代替一抗作為陰性對照，選取已知陽性的切片作為陽性對照。

1.3 結(jié)果判定

胃黏膜細胞核或胞漿內(nèi)出現(xiàn)黃色顆粒者視為陽性細胞，計數(shù)5個高倍視野或500個細胞。按胞核或胞漿內(nèi)染色強度打分:0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。再按陽性細胞所占的百分比打分:0分:陰性，1分:0%＜陽性細胞≤10%，2分:10%＜陽性細胞≤50%，3分:50%＜陽性細胞≤75%，4分:75%＜陽性細胞≤100%。染色強度與陽性細胞百分比的乘積＞3分者為強陽性。

1.4 隨訪

采用電話隨訪、登門拜訪或?qū)懶诺男问竭M行術(shù)后無瘤生存期、5年生存率的調(diào)查。

1.5 統(tǒng)計學方法

將所得結(jié)果及臨床資料建立數(shù)據(jù)庫，采用SPSS 13.0軟件進行 χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 hMLH1蛋白表達情況及與臨床病理特征間的關系

66例中陽性表達的有31例，占46.9%;39例高中分化癌中陽性表達的有24例，占36.9%;27例低分化癌中陽性表達的有7例，占10.0%;差異有統(tǒng)計學意義，P＜0.05。無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的35例中陽性表達的有22例，占33.3%;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的31例中陽性表達的有9例，占13.6%;差異有統(tǒng)計學意義，P＜0.05。

2.2 hMLH1蛋白表達情況與胃癌病人預后的關系

31例陽性表達的病人術(shù)后5年內(nèi)無瘤生存期平均為27.2個月，5年生存率為58.6%，35例陰性表達的病人術(shù)后5年內(nèi)無瘤生存期平均為10.6個月，5年生存率為29.7%，組間比較差異有顯著性，P＜0.05，見表 1。

表1 hMLH1蛋白表達情況與胃癌病人預后的關系

3 討論

DNA錯配修復系統(tǒng)的主要功能是修復細胞DNA復制過程中出現(xiàn)的堿基錯配，從而抑制癌基因、抑癌基因、凋亡基因等基因的突變，維持基因組的穩(wěn)定性［1］;而腫瘤的形成與組織細胞不斷累積基因變異，與原癌基因的激活、抑癌基因的失活、凋亡基因的異?；罨嘘P，因此，錯配修復系統(tǒng)的異常與腫瘤的形成關系密切。癌干細胞被認為是腫瘤產(chǎn)生、復發(fā)、轉(zhuǎn)移的根源，Liang Y 等［2］提出基因組的不穩(wěn)定可以誘導癌干細胞樣細胞的產(chǎn)生。而錯配修復系統(tǒng)的缺陷可以誘導基因組的不穩(wěn)定，這似乎提示錯配修復系統(tǒng)的缺陷參與癌干細胞的形成，是腫瘤發(fā)生的早期事件。

目前在DNA錯配修復系統(tǒng)已發(fā)現(xiàn)9個基因，其中 hMSH2、hMSH6、hMSH5、hMSH4、hMSH3 為細菌 MutS 同源物;hMLH1、hPMS1、hPMS2、hMLH3為細菌MutL同源物。hMLH1是這一系統(tǒng)中的重要成員之一，位于染色體3p21.3-23，基因組全長約58Kb，含 19 個外顯子［3］。溫爽等［4］研究表明hMLH1蛋白在細胞核中出現(xiàn)高表達可能是胃黏膜上皮細胞癌變的組織學預警標志。李冬霞等［5］指出hMLH1蛋白表達缺失與胃癌的發(fā)生有關，可能是胃癌發(fā)生的早期事件。鄒葉青等［6］發(fā)現(xiàn)hMLH1基因甲基化和MSI(微衛(wèi)星不穩(wěn)定)密切相關，它是導致胃癌組織出現(xiàn)MSI的重要因素，MSI在胃癌發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮一定作用。郭旭等［7］指出hMLH表達水平與結(jié)直腸癌的發(fā)生、組織分化、淋巴轉(zhuǎn)移及臨床分期有關，與胃癌的發(fā)生和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關。我們的研究亦表明胃癌組織中hMLH1的表達狀況與其分化狀態(tài)和淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移有關，hMLH1表達越高，胃癌分化水平越高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的越少。目前還缺乏hMLH1在胃癌的表達與患者生存狀況的資料。我們的初步研究結(jié)果表明hMLH1表達越高，無瘤生存期越長，5年生存率越高，這似乎表明hMLH1扮演著抑癌基因的角色。

綜上所述，hMLH1在胃癌的表達與其分化水平、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況有關，hMLH1的表達缺失是預后不良的標志。

［1］Hsieh P.Molecular mechanisms of DNA mismatch repair［J］.Mutat Res，2001，486(2):71

［2］Liang Y，Zhong Z，Huang Y，et al.Stem-like cancer cells are inducible by increasing genomic instability in cancer cells［J］.J Biol Chem，2010，285(7):4931

［3］Peltomaki P.DNA mismatch repair and cancer［J］.Mutat Res，2001，488(1):77

［4］溫爽，劉天卿，李 梅，等.胃黏膜上皮錯配修復基因hMLH1表達在胃癌診斷中的臨床意義［J］.大連醫(yī)科大學學報，2007，29(6):539

［5］李冬霞，魏林郁.胃癌組織中hMLH1基因的表達及意義［J］.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2008，24(l7):2567

［6］鄒葉青，張善忠，劉 川，等.胃癌及癌前病變組織中hMLH1基因啟動子甲基化與MSI的關系［J］.江西醫(yī)學院學報，2008，48(3):16

［7］郭旭，于登峰，王藝.胃癌、結(jié)直腸癌組織中hMLH的表達及其臨床意義［J］.結(jié)直腸肛門外科，2007，13(3):143