高效液相色譜法測定精制冠心顆粒中芍藥苷的含量

米英姿

精制冠心顆粒的處方由丹參、赤芍、川芎、紅花、降香五味中藥組成。本品為棕褐色的顆粒；味微甜、微苦，具有行氣活血，化瘀通脈的作用。用于氣滯血瘀，胸痹，心痛，舌赤瘀斑，脈弦；冠心病，心絞痛，心肌梗死屬上述證候者。該品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載在2010版中華人民共和國藥典（一部），但沒有含量測定指標(biāo)，通過試驗研究與參考有關(guān)文獻(xiàn)[1]，本文進(jìn)行了精制冠心顆粒中芍藥苷的含量測定的方法學(xué)研究，為該產(chǎn)品提供更嚴(yán)格的質(zhì)量控制方法。

1 材料與方法

1.1 儀器 島津LC－10A高效液相色譜儀，檢測器：SPD－10A紫外檢測器。工作站：依利特EC2003色譜工作站。色譜柱：Hypersil C18（5μm，250 mm×4.6 mm），帶前置保護(hù)柱。

1.2 試劑 芍藥苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110736－201035）；精制冠心顆粒（市售品：吉林益民堂制藥有限公司，批號：Z20055438）；乙腈為色譜純，水為重蒸水，其余試劑為分析純。

1.3 方法 取芍藥苷對照品溶液在200 nm～400 nm作波長掃描，結(jié)果對照品在230 nm有最大吸收，參照文獻(xiàn)[1]，檢測波長定為230 nm。色譜條件與系統(tǒng)適用性可定為：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈－水（15∶85）為流動相；檢測波長為230 nm。理論板數(shù)按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于5 000。精密稱取芍藥苷對照品35.52 mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液，分別精密量取對照品溶液2.0 mL、3.0 mL、4.0mL、5.0mL、6.0 mL、7.0 mL、8.0 mL、10.0mL，置100 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件，分別精密量取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以對照品進(jìn)樣量與其峰面積進(jìn)行線性回歸，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程y＝762.27 X＋96.113。

1.3.1 供試品溶液的制備方法 取裝量差異項下的本品內(nèi)容物，研細(xì)，取10 g，精密稱定，置錐行瓶中，加鹽酸－甲醇、流動相、甲醇各40mL，超聲處理（功率250 W，頻率30 Hz）40 min，放冷，濾過，濾液置50mL量瓶中，用各自相應(yīng)的溶劑適量洗滌容器和濾器，洗液并入同一量瓶中，加各自相應(yīng)的溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，精密吸取10μL，注入液相色譜儀。

1.3.2 精密度試驗 精密吸取芍藥苷對照品溶液（177.6μg/mL）10 L，分別重復(fù)進(jìn)樣6次，按上述色譜條件測定，考察精密度。

1.3.3 重現(xiàn)性試驗 對同一批樣品（批號：20055511）分別制備6份供試品溶液，各吸取10μL注入液相色譜儀。

1.3.4 溶液的穩(wěn)定性 經(jīng)密吸取供試品溶液10μL，每隔一定時間進(jìn)樣測定一次，結(jié)果表明，供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

1.3.5 加樣回收試驗 取已知含量（批號：20055511，0.7718 mg/g）的樣品5 g，精密稱定，置錐行瓶中，加甲醇40mL，超聲處理（功率250 W，頻率30 Hz）40 min，放冷，濾過，濾液置50 mL量瓶中，用甲醇適量洗滌容器和濾器，洗液并如同一量瓶中，精密加入對照品溶液（3.864 2 mg/mL）1 mL，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，置錐行瓶中，精密量取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖并進(jìn)行計算。

2 結(jié) 果

2.1 芍藥苷線性關(guān)系（見表1） 芍藥苷在0.710 4μg～3.522 0 μg的范圍內(nèi)時，進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r＝0.999）。

表1 含量測定方法的線性結(jié)果

2.2 不同提取溶劑比較 鹽酸－甲醇、流動相、甲醇提取溶劑測定結(jié)果分別為0.56 mg/g，0.52 mg/g，0.77 mg/g。用三種最常用的溶劑提取樣品，甲醇比其他另外兩種溶劑提取較完全，因此選擇供試品溶液用甲醇提取來制備。

2.3 含量測定精密度試驗結(jié)果（見表2） 結(jié)果表明本試驗精密度良好。

表2 含量測定精密度試驗結(jié)果

2.4 含量測定重現(xiàn)性試驗（見表3） 結(jié)果表明本試驗重復(fù)性良好。

表3 含量測定重現(xiàn)性試驗結(jié)果

2.5 含量測定溶液穩(wěn)定性試驗結(jié)果（見表4） 結(jié)果表明本試驗穩(wěn)定性良好。

表4 含量測定溶液穩(wěn)定性試驗結(jié)果

2.6 含量測定方法加樣回收試驗（見表5） 加樣回收率符合 要求。

表5 含量測定方法加樣回收試驗

3 討 論

我們通過文獻(xiàn)檢索[1]和試驗研究比較，最終確定以測定赤芍中芍藥苷的含量作為精制冠心顆粒各藥物組成含量測定的控制指標(biāo)之一。樣品前處理方法通過實驗確定為：樣品加甲醇超聲處理（功率250 W，頻率30 Hz）40 min，放冷，濾過，濾液置50mL量瓶中，用甲醇適量洗滌容器和濾器，洗液并入同一量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。含量測定色譜條件確定為：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈－水（15∶85）為流動相；檢測波長為230 nm。取樣品，分別以甲醇、流動相、鹽酸－甲醇為提取溶劑，依法測定。結(jié)果以后兩者為提取溶劑的提取效果相近，提取物較少，本實驗證明甲醇的提取物多，故選用甲醇作提取溶劑。本實驗結(jié)果證明芍藥苷在0.710 4μg～3.522 0μg的范圍內(nèi)時，進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。供試品溶液和對照品溶液中芍藥苷峰保留時間一致，與其他組分達(dá)到基線分離；陰性樣品溶液中在與對照品溶液中芍藥苷峰相應(yīng)位置處未出現(xiàn)相應(yīng)的峰，陰性樣品溶液不干擾樣品中芍藥苷的測定。穩(wěn)定性試驗表明，供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。本實驗結(jié)果顯示，平均回收率為99.07%，RSD值為1.1%（n＝5），加樣回收良好，該方法準(zhǔn)確性較高。實驗證明，該方法可以更好的對精制冠心顆粒的產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行有效檢測控制。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：147－148.