抗纖丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究*

黃雁霞，潘贊紅，畢麗萍，邊 景，王 麗

(天津市傳染病醫(yī)院，天津 300192)

抗纖丸為本院院內(nèi)制劑，主要功能為活血化瘀，扶正祛邪，抗纖維化，用于慢性活動(dòng)性肝炎及肝硬化。由于原標(biāo)準(zhǔn)中鑒別方法略顯簡(jiǎn)單，無(wú)法準(zhǔn)確控制質(zhì)量，所以本實(shí)驗(yàn)建立薄層色譜法、高效液相色譜法對(duì)抗纖丸進(jìn)行質(zhì)量控制，使該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有較大幅度提高。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀LC-20AT,LCsolution色譜工作站(日本島津)；五味子甲素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào) 0746-200107)、黃芩苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào) 110715-200212)，當(dāng)歸對(duì)照藥材(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)120927-200613)、川芎對(duì)照藥材(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)120918-200608)；抗纖丸(本院制劑室提供，規(guī)格：9 g/丸，批號(hào) 20100720、20100709、20100629 、20100530) ；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純；水為重蒸餾水。

2 方法和結(jié)果

2.1當(dāng)歸、川芎的薄層鑒別

2.1.1溶液制備

2.1.1.1供試品制備 取本品5 g，剪碎，加乙醚40 ml，加熱回流30 min，過(guò)濾，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴? ml使溶解，作供試品溶液。

2.1.1.2對(duì)照品制備 取當(dāng)歸、川芎對(duì)照藥材各1 g,加乙醚20 ml，加熱回流30 min，過(guò)濾，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴? ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。

2.1.1.3陰性樣品制備 按處方比例(除當(dāng)歸、川芎)根據(jù)制法制成陰性樣品，按“2.1.1.1”項(xiàng)下方法提取，作為陰性對(duì)照溶液。

2.1.2薄層條件 參照薄層色譜法[1]試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液各6 μl分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(365 mm)下檢視。在其色譜中與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上應(yīng)有相同顏色的斑點(diǎn)[1]。結(jié)果見(jiàn)圖1。

A1.供試品20100720 A2.供試品20100709 A3.供試品20100629 A4.供試品20100530 B.對(duì)照藥材當(dāng)歸 C.對(duì)照藥材川芎 D.陰性對(duì)照

2.2五味子的薄層鑒別

2.2.1溶液制備

2.2.1.1供試品制備 取本品9 g，剪碎，加乙醚40 ml，加熱回流1 h，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)颖? ml使溶解，作供試品溶液。

2.2.1.2對(duì)照品制備 取五味子甲素對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每1 ml含五味子甲素1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.1.3陰性樣品制備 按處方比例(除五味子)根據(jù)制法制成陰性樣品，按“2.2.1.1”項(xiàng)下方法提取，作為陰性對(duì)照溶液。

2.2.2薄層條件 照薄層色譜法[1]試驗(yàn)，吸取供試品溶液8 μl，對(duì)照品溶液4 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(254 mm)下檢視。在其色譜中與對(duì)照品及藥材色譜相應(yīng)的位置上應(yīng)有相同顏色的斑點(diǎn)[1]。結(jié)果見(jiàn)圖2。

2.3黃芩中黃芩苷的含量測(cè)定

2.3.1色譜條件 高效液相色譜儀LC-20AT,LCsolution色譜工作站。以?shī)W泰十八烷基硅膠鍵合硅膠為填充劑(250 mm×4.6 mm，5 μm)；甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)為流動(dòng)相；流速1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 mm，柱溫35 ℃，進(jìn)樣量20 μl，理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算不低于2 500。

A1.供試品20100720 A2.供試品20100709 A3.供試品20100629 A4.供試品20100530 B.對(duì)照品 C.陰性對(duì)照

2.3.2溶液液備

2.3.2.1供試品制備 取本品5 g剪碎，混勻，取1.0 g，精密稱定，置50 ml量瓶中，加入70%乙醇至刻度,超聲提取60 min，放冷后加70%乙醇至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜濾過(guò)，即得。

2.3.2.2陰性對(duì)照溶液的制備 按處方比例(黃芩除外)根據(jù)制法制成的陰性樣品，按“2.3.2.1”項(xiàng)下方法提取，作為陰性對(duì)照溶液。

2.3.2.3對(duì)照品溶液制備 取黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含黃芩苷0.1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3.3專屬性實(shí)驗(yàn) 依“2.3.1”項(xiàng)下的色譜條件，取黃芩苷對(duì)照品、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液進(jìn)樣，記錄色譜圖，見(jiàn)圖3。結(jié)果在黃芩苷出峰位置未見(jiàn)其他色譜峰，表明在實(shí)驗(yàn)條件下，其他藥材成分對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

2．3．4線性關(guān)系考查 精密量取儲(chǔ)備液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0和5.0 ml，分別置100 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，分別精密吸取上述6種濃度的對(duì)照品溶液各20 μl，注入液相色譜儀，按“2.3.1”色譜條件，測(cè)定各自峰面積，以峰面積值為橫坐標(biāo)，樣品濃度(μg/ml)為縱坐標(biāo)，求得回歸方程為：Y=9.818 5×10-6X+0.448 77(r=0．999 5)，黃芩苷在0.1～1.0 μg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.3.5穩(wěn)定性考查 取批號(hào)為20100629的樣品1份，剪碎，取1 g，按照“2.3.2.1”供試品溶液制備操作，按“2.3.1”色譜條件分析，分別在0、1、3、16、18、20 h，測(cè)定樣品中黃芩苷峰面積，測(cè)得峰面積值的RSD為1.72%，符合要求。

2.3.6精密度試驗(yàn) 取批號(hào)為20100629的樣品1份，剪碎，取1g，按照“2.3.2.1”供試品溶液制備操作，按“2.3.1”色譜條件分析，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定樣品黃芩苷峰面積，測(cè)得峰面積值的RSD為0.58%，符合要求。

1.黃芩苷

2.3.7重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)(20100629)樣品，共6份，剪碎，取1 g，按照“2.3.2.1”供試品溶液制備操作，按“2.3.1”色譜條件分析，測(cè)定每份樣品中黃芩苷含量。結(jié)果樣品中含量為2.134 mg/g，RSD為0.95%，符合要求。

2.3.8回收率試驗(yàn) 取同一批號(hào)(20100629)樣品，剪碎，取0.5 g，共6份，精密稱定，分別精密加入黃芩苷對(duì)照品溶液(1 mg/ml)2.0 ml，按供試品溶液制備方法制備樣品溶液，依法測(cè)定峰面積，計(jì)算回收率，得平均回收率為99.78%，RSD為1.58%。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3.9樣品測(cè)定 取3批樣品，按照供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按所給色譜條件分別取供試品溶液及對(duì)照品溶液進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，用外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 黃芩苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1對(duì)制劑提取方法的優(yōu)化 本實(shí)驗(yàn)對(duì)提取方式、提取溶劑、提取溶劑量和提取時(shí)間進(jìn)行了比較，采用70%乙醇對(duì)樣品進(jìn)行加熱回流提取與超聲提取，時(shí)間均為60 min，超聲處理所得結(jié)果比加熱回流提取所得結(jié)果稍高，故采用超聲提取方法處理供試品。在選擇提取時(shí)間時(shí)，分別用70%乙醇超聲提取30、45和60 min,結(jié)果超聲60 min測(cè)得的黃芩苷峰面積較大，所以提取時(shí)間定為60 min。

3.2醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑絕大部分為臨床多年經(jīng)驗(yàn)的總結(jié)，并且療效確切，在患者中廣受歡迎，但其質(zhì)量控制方法相對(duì)簡(jiǎn)單，不能有效地控制質(zhì)量。本試驗(yàn)的抗纖丸就是一例。通過(guò)實(shí)驗(yàn)，運(yùn)用了薄層層析和高效液相色譜分析方法，方法簡(jiǎn)便、重復(fù)性好，為抗纖丸的質(zhì)量控制提供了分析方法，加大了質(zhì)控力度。本制劑中黃芩苷的含量均大于1.2 mg/g，符合相關(guān)制劑標(biāo)準(zhǔn)。

1 中國(guó)藥典.一部.2005: 109，211, 311，463