鹽酸昂丹司瓊口崩片在健康人體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)及生物等效性研究

邸東華，劉 茜，趙 輝，王 茜

昂丹司瓊(Ondansetron)是一種高度選擇性的5-羥色胺(5-HT3)受體拮抗劑，能抑制由化療和放療引起的惡心嘔吐［1-3］。本文參考國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)方法［4-5］，應(yīng)用HPLC-UV法測(cè)定20名健康男性志愿者口服鹽酸昂丹司瓊口腔崩解片后各時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度，計(jì)算藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)，以普通片作為參比制劑，計(jì)算相對(duì)生物利用度，并判斷是否生物等效。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-10ATvp泵，SPD-6AV紫外可見檢測(cè)器(日本島津公司);TGL-16G型離心沉淀機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠);XW-80型渦旋混合器(上海手術(shù)器械廠)。

1.2 受試制劑 鹽酸昂丹司瓊口崩片(北京雙吉制藥有限公司，規(guī)格:4 mg);參比制劑:樞丹(鹽酸昂丹司瓊片，寧波市天衡制藥有限公司，規(guī)格:4 mg);對(duì)照品昂丹司瓊(由北京雙吉制藥有限公司提供，含量:99.7%)、鹽酸格拉司瓊(Granisetron)、對(duì)照品格拉司瓊(由江西弘益藥業(yè)有限公司提供，含量99.6%)。乙腈為色譜純，三乙胺、磷酸為分析純，水為雙重蒸餾水，空白血漿由沈陽(yáng)軍區(qū)總醫(yī)院提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 給藥方案與樣品采集［6］選擇20名健康男性志愿受試者，年齡19～23歲，體重55～80 kg，經(jīng)全面體檢正常，血常規(guī)、肝腎功能及心電圖檢查均正常。受試者無(wú)繼往病史和藥物過敏史，不吸煙，不嗜酒，試驗(yàn)前2周內(nèi)未用任何藥物，試驗(yàn)前均簽署知情同意書，并經(jīng)倫理委員會(huì)審批同意。隨機(jī)分為2組。試驗(yàn)前禁食10 h，試驗(yàn)當(dāng)日清晨空腹給藥8 mg。一組口服參比制劑，另一組口服受試制劑。參比制劑用200mL溫開水送服;受試制劑口腔含化，并記錄崩解時(shí)間。隔周交叉。于口服給藥前(0 h)和給藥后 0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、12、15 h，由肘正中靜脈取血5mL，并立即移入經(jīng)肝素處理的離心試管中，離心5min(3000 r/min)，分離血漿，于－20℃冰箱中保存待測(cè)。

2.2 色譜條件 色譜柱:DiamonsilTMC18柱(200mm ×4.6mm，5μm);流動(dòng)相:磷酸緩沖液(pH 4.0)∶乙腈(80∶20);流速:1.0mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):302 nm;柱溫:35 ℃;進(jìn)樣量:20μL。

2.3 溶液配制

2.3.1 鹽酸昂丹司瓊對(duì)照品溶液 精密稱取鹽酸昂丹司瓊對(duì)照品適量，加甲醇溶解并稀釋，得昂丹司瓊濃度為2000 ng/mL的對(duì)照品貯備液。精密量取適量，用甲醇稀釋成濃度分別為20、50、100、200、400、800、1600 ng/mL 的系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.3.2 鹽酸格拉司瓊內(nèi)標(biāo)溶液 精密稱取鹽酸格拉司瓊對(duì)照品適量，加甲醇溶解并稀釋，得昂丹司瓊濃度為500 ng/mL的對(duì)照品貯備液。精密量取適量，用甲醇稀釋為50 ng/mL的內(nèi)標(biāo)溶液。

2.4 血漿樣品預(yù)處理 取血漿1.0mL，加入乙酸乙酯3mL，渦旋3min，離心5min(10000 r/min)，取上層有機(jī)相置另一試管中，氮?dú)饬飨?30℃)吹干，殘?jiān)蛹状?0μL溶解，進(jìn)樣 20μL。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 取人空白血漿500μL，各加入“2.4”項(xiàng)昂丹司瓊標(biāo)準(zhǔn)系列溶液50μL，格拉司瓊內(nèi)標(biāo)溶液50μL，制成相當(dāng)于昂丹司瓊濃度為2.0、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0、160.0 ng/mL 的模擬血漿樣品。按“2.5”項(xiàng)下方法處理后，進(jìn)樣測(cè)定。以濃度C為橫坐標(biāo)、相應(yīng)峰面積比值A(chǔ)s/Ai為縱坐標(biāo)，用加權(quán)最小二乘法進(jìn)行回歸運(yùn)算。得回歸方程:Y=0.946 X+0.027，r=0.9952。表明在2.0～160 ng/mL濃度范圍內(nèi)，昂丹司瓊濃度與其峰面積比值線性關(guān)系良好，定量下限為2.0 ng/mL。

空白血漿、空白血漿加鹽酸昂丹司瓊(10.0 ng/mL)、受試者服藥1.5 h后血漿樣品的色譜圖見圖1。圖1顯示，昂丹司瓊、格拉司瓊的保留時(shí)間分別為5.7、6.7min，血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾測(cè)定。

圖1 色譜圖

2.6 準(zhǔn)確度與精密度 取空白血漿及對(duì)照品溶液，按“2.5”項(xiàng)下的方法配制低、中、高濃度的質(zhì)量控制(QC)樣品，分別進(jìn)行6樣本分析。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算QC樣品的測(cè)得濃度，回收率分別為90.2%、106.2%和97.4%，日內(nèi)、日間精密度為2.05%～13.5%。

2.7 提取回收率 按“2.6”項(xiàng)下方法配制低、中、高(5.0、20.0、120.0 ng/mL)濃度的質(zhì)控樣品，分別進(jìn)行6樣本分析。另取空白血漿按“2.5”項(xiàng)下操作，配制成相應(yīng)濃度，進(jìn)樣分析。以提取后與未經(jīng)提取直接進(jìn)樣獲得的色譜圖峰面積的比值，考察樣品的提取回收率。得出提取回收率分別為64.5%、68.0%和 68.9%，內(nèi)標(biāo)提取回收率為68.5%。

2.8 穩(wěn)定性考察 按“2.6”項(xiàng)下方法配制低、中、高(5.0、20.0和120.0 ng/mL)濃度的質(zhì)控樣品，分別于－20℃保存20 d，血漿樣品經(jīng)歷2次冷凍-解凍循環(huán)處理后，樣品室溫放置24 h均穩(wěn)定。

2.9 藥動(dòng)學(xué)研究 20名健康受試者口服受試制劑和參比制劑8 mg，平均血藥濃度-時(shí)間曲線見圖2。

圖2 20名受試者口服受試制劑和參比制劑后的平均血藥濃度-時(shí)間曲線

將主要藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行方差分析，結(jié)果受試制劑的AUC0-t和AUC0-∞均拒絕不等效假設(shè)，表明受試制劑與參比制劑在體內(nèi)具有生物等效性。見表1。

表1 20名健康受試者口服2種制劑后的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)

3 討論

研究表明，昂丹司瓊體內(nèi)藥物濃度較低，選擇一種靈敏度高、干擾小的提取方法至關(guān)重要［1］。有研究者采用固相萃取，但方法繁瑣［2-3］;另有學(xué)者采用蛋白沉淀法，但揮干速度較慢［2］。本文采用有機(jī)溶劑萃取法，用乙酸乙酯進(jìn)行提取，效果良好。鹽酸格拉司瓊與昂丹司瓊結(jié)構(gòu)相近，二者在整個(gè)色譜分析中的行為具有可比性，且在本色譜條件下有較好的分離度。應(yīng)用鹽酸格拉司瓊作為內(nèi)標(biāo)，使分析方法更精確、重現(xiàn)性更好。

本研究結(jié)果表明，昂丹司瓊口服給藥后，約1.5 h血藥濃度達(dá)峰。兩種制劑生物等效。給藥期間，20名健康受試者口服鹽酸昂丹司瓊8 mg后，未見任何不良反應(yīng)發(fā)生，且其藥動(dòng)學(xué)參數(shù)與文獻(xiàn)報(bào)道［1］基本一致。本研究分析方法快速、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)單，分析時(shí)間適中，完全不受雜質(zhì)干擾，且峰形良好，適合鹽酸昂丹司瓊制劑的藥動(dòng)學(xué)研究。

［1］汪楊，吳偉，黃敏，等.鹽酸昂丹司瓊口崩片與普通片的生物等效性研究［J］.復(fù)旦學(xué)報(bào)，2005，32(1):55-58.

［2］沈于蘭，馮芳.大鼠體內(nèi)恩丹西酮與氯丙嗪的藥動(dòng)學(xué)相互作用研究［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2008，43(10):771-775.

［3］沈于蘭，馮芳，孫奇.HPLC-MS研究鹽酸恩丹西酮緩釋膠囊人體藥動(dòng)學(xué)及生物等效性［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2007，42(17):1333-1336.

［4］高潔.反相高效液相色譜法測(cè)定昂丹司瓊的血藥濃度藥物研究［J］.藥物研究，2009，18(15):17-18.

［5］吳燕，李華龍，米亞嫻，等.鹽酸昂丹司瓊口服溶液的人體藥代動(dòng)力學(xué)和生物等效性研究［J］.藥物分析雜志，2009，29(2):233-235.

［6］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典［S］.二部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:附錄 XIXB，173.