葛根芩連湯與其有效部位群對離體心臟的作用

譚 穎，史姚平，劉 琳，趙 瑛

(哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥學(xué)院，哈爾濱 150076)

葛根芩連湯出自張仲景《傷寒論·太陽篇》，由葛根、黃芩、黃連、甘草4味藥組成，是中藥治療急性腹瀉的經(jīng)典方劑［1］.現(xiàn)代藥理研究表明葛根芩連湯具有抗心律失常、抗缺氧、抑制代謝綜合癥等藥理作用［2］.近年來有研究表明葛根芩連湯可以治療肺源性心臟?。?］.大量研究表明當(dāng)中藥復(fù)方的物質(zhì)基礎(chǔ)發(fā)生變化時，其藥理作用可能隨之改變.本實(shí)驗(yàn)通過觀察葛根芩連湯與其有效部位群對大鼠離體心臟的作用，探討制備工藝不同方劑作用的差異.

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

健康成年SD大鼠，雌雄各半，體重300～350 g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動物研究室提供(合格證號:00102006)

1.2 儀器

分析天平ALC－1104:德國賽多利斯集團(tuán);Langendorff離體心臟灌流實(shí)驗(yàn)儀LE 05.200:Panlab s.l.;生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng) BL－420E:成都泰盟科技有限公司.

1.3 藥品

葛根芩連湯與其有效部位群由哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥學(xué)院提供(其中有效部位群總黃酮、總生物堿含量大于 52%).K－H 液:NaCl 120、KCl 4.63、CaC121.25、KH2PO41.17、MgS041.20、NaHCO320、Glucose 8.用雙蒸水分別完全溶解后，依次轉(zhuǎn)移到1 L容量瓶中，定容，搖勻過濾備用.

1.4 試劑

肝素:北京奧博星生物技術(shù)有責(zé)任限公司，批號:20060831;水合氯醛:中國五聯(lián)化工廠，批號:20020509;1，2－丙二醇:中國山海試劑總廠，批號:20030106;95%O2+5%CO2混合氣:哈爾濱黎明氣體有限公司.

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 離體心臟模型的建立

參考《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》［4］制備 Langendorff離體心臟:實(shí)驗(yàn)動物稱重后，10%水合氯醛3mL/kg麻醉.l 0min后仰臥固定于操作臺.立即開胸，暴露心臟，破心包，游離左右肺葉，從主動脈弓處剪斷主動脈，摘取心臟，用預(yù)先(體積分?jǐn)?shù)95%O2+5%CO2)氧飽和的4℃的K－H液迅速沖洗后，立即移入裝有氧飽和的4℃ K－H溶液的平皿中.修剪心臟周圍組織，找出主動脈，沿主動脈向上1 cm處剪斷主動脈，于液面下行主動脈插管，絲線結(jié)扎固定.80 cm水柱恒壓、37℃灌注，當(dāng)心臟示射血動作后，于肺動脈起始部與右室圓錐部之間剪一個小口.剪掉左心耳，將制備好的水囊插入左心室，充水調(diào)節(jié)壓力至0.532～1.064 kPa.

2.2 分組與給藥

將大鼠離體心臟模型隨機(jī)分成K－H對照組、丙二醇對照組、葛根芩連湯(G)和葛根芩連湯有效部位群(GQ)組，G和GQ分設(shè)5個劑量組，分別為G50、GQ50(50 g生藥/L 組)，G25、GQ25(25 g生藥/L 組)，G12.5、GQ12.5(12.5 g生藥/L 組)，G6.25、GQ6.25(6.25 g 生藥/L 組)，G3.125、GQ3.125(3.125 g生藥/L 組)，每組6只.

給藥方法:將溶于體積分?jǐn)?shù)1%丙二醇的藥物按給藥質(zhì)量濃度稀釋到K－H液中，80 cm水柱恒壓灌流離體心臟.

2.3 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 16.0 For Windows統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理.用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，給藥前后比較采用配對t檢驗(yàn)，組間比較方差齊采用t值簡法檢驗(yàn)，方差不齊采用校正t值法.P＜0.05說明有顯著性差異，P＜0.01說明有非常顯著性差異.

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:K－H和丙二醇對照組HR、LVSP、+dp/dtm變化較給藥前均無顯著性差異(P＞0.05);GQ50 組給藥后 HR、LVSP、+dp/dtm 顯著降低(P ＜0.01，P ＜0.05);GQ25 組、GQ12.5 組和GQ6.25組給藥后HR降低，LVSP、+dp/dtm升高，較給藥前有顯著性差異(P＜0.01，P＜0.05);G50組和G25組給藥后HR降低，較給藥前有顯著性差異(P＜0.01，P＜0.05);G50組給藥后 LVSP顯著升高(P＜0.05).GQ50與 G50比較，對 HR、LVSP、+dp/dtm的作用更為顯著(P＜0.05);其他同等劑量情況下，GQ對心臟的作用稍強(qiáng)于G，但無顯著性差異(P ＞0.05).見表1.

表1 葛根芩連湯與其有效部位群對大鼠離體心臟HR、LVSP、+dp/dtm影響(次/min，n=6)

表1 葛根芩連湯與其有效部位群對大鼠離體心臟HR、LVSP、+dp/dtm影響(次/min，n=6)

注:*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01 與給藥前比較;▲P ＜0.05，▲▲P ＜0.01與同等劑量葛根芩連湯組比較

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，K－H和丙二醇對照組CF、LVEDP、－dp/dtm變化較給藥前均無顯著性差異(P＞0.05);GQ50組給藥后CF、－dp/dtm顯著降低，LVEDP顯著升高(P＜0.01，P＜0.05);GQ25組、GQ12.5組和 GQ6.25 組給藥后 LVEDP 降低，CF、－dp/dtm升高，較給藥前有顯著性差異(P＜0.01，P＜0.05);G50組和 G25組給藥后 LVEDP降低，CF、－dp/dtm升高，較給藥前有顯著性差異(P＜0.01，P ＜0.05).GQ50 與 G50 比較，對 CF、LVEDP、－dp/dtm的作用更為顯著(P＜0.05);其他同等劑量情況下，GQ對心臟的作用稍強(qiáng)于G，但無顯著性差異(P ＞0.05).結(jié)果見表2.

表2 葛根芩連湯與其有效部位群對大鼠離體心臟CF、LVEDP、－dp/dtm影響(次/min，n=6)

表2 葛根芩連湯與其有效部位群對大鼠離體心臟CF、LVEDP、－dp/dtm影響(次/min，n=6)

注:*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01 與給藥前比較;▲P ＜0.05，▲▲P ＜0.01與同等劑量葛根芩連湯組比較

4 討論

1)溶媒的選取:丙二醇是無色澄明黏稠液體，與水、乙醇、甘油相混溶，但不能與脂肪相混溶.性質(zhì)穩(wěn)定，高溫下(250℃以上)可被氧化.預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)體積分?jǐn)?shù)10%、5%丙二醇K－H液對大鼠離體心臟有較明顯的降低左心室內(nèi)壓作用，體積分?jǐn)?shù)1%丙二醇K－H液雖也有弱的一過性降低左心室內(nèi)壓作用，但很快就恢復(fù)給藥前的水平.故在實(shí)驗(yàn)中選取1%丙二醇溶解藥物.實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，體積分?jǐn)?shù)1%丙二醇對 HR、LVSP、LVEDP、+dpdtm、－dpdtm和CF的改變均無顯著性(P＞0.05)，說明體積分?jǐn)?shù)1%丙二醇的K－H液對大鼠離體心臟的血流動力學(xué)的改變不影響試驗(yàn)結(jié)果.

2)葛根芩連湯與其有效部位群對大鼠離體心臟的影響:心臟的泵血功能取決于心肌的收縮性能以及前負(fù)荷和后負(fù)荷等指標(biāo).葛根芩連湯和低劑量的葛根芩連湯有效部位群可以使+dp/dtm升高，提示葛根芩連湯可以增強(qiáng)心肌收縮性能.這與降低LVEDP結(jié)果相符，LVEDP降低說明左室收縮加強(qiáng)或回心血量減少.此結(jié)果提示葛根芩連湯及有效部位群可以增強(qiáng)心功能，具有正性肌力、負(fù)性頻率作用，同時可能通過擴(kuò)張冠脈和降低HR而增加舒張期時間、減少心肌收縮對冠脈的擠壓而增加冠脈流量.

3)葛根芩連湯與其有效部位群作用的比較:葛根芩連湯有效部位群是經(jīng)溶媒提取，大孔吸附樹脂富集有效成分制得，而葛根芩連湯是傳統(tǒng)煎煮而得.有研究表明方劑制備工藝不同，有效成分的含量和配比可能不同［5－6］，藥理作用也必定存在差異.通過本實(shí)驗(yàn)研究可以看出葛根芩連湯有效部位群的藥理作用要強(qiáng)于同等劑量葛根芩連湯組，其藥理作用與葛根芩連湯高一劑量基本相當(dāng).

葛根芩連湯有效部位群最高劑量對心臟的作用與低劑量相反.導(dǎo)致這一結(jié)果的原因可能與葛根芩連湯的主要成分之一為小檗堿有關(guān).有研究表明，小檗堿對心肌收縮力的影響具有小劑量增強(qiáng)、大劑量抑制的雙向特征［7］.

［1］王 立.經(jīng)典方劑葛根芩連湯研究現(xiàn)狀［J］.黑龍江醫(yī)藥，2009，22(2):172－173.

［2］趙 瑛，李文亭，孟曉紅，等.葛根芩連湯及有效部位群對代謝綜合征大鼠作用的比較［J］.中藥藥理與臨床，2009，25(4):7－10.

［3］徐忠正.葛根芩連湯辨治肺原性心臟?。跩］.中醫(yī)雜志，2001，42(10):636.

［4］徐叔云，卞如濂，陳 修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2006.

［5］UMBREIT J.Iron deficiency:a concise review［J］.Am J Hematol.，2005，78(3):225－31.

［6］任美容，趙 瑛，凌 勇.中藥復(fù)方不同提取方法藥效成分動態(tài)變化研究［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2010，38(3):80－84.

［7］張曉丹，任宏敏，劉 琳.小檗堿對DHF大鼠血流動力學(xué)和心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子質(zhì)量濃度的影響［J］.中國中藥雜志，2008.33(7):818－821.