延齡草脂肪酸類成分分析

吳 芳， 李 濤， 郭耀武

(陜西省食品藥品檢驗(yàn)所，陜西西安 710061)

延齡草脂肪酸類成分分析

吳 芳， 李 濤， 郭耀武

(陜西省食品藥品檢驗(yàn)所，陜西西安 710061)

目的 研究延齡草脂肪酸類成分及主要成分的測定。方法 采用GC-MS對延齡草脂肪酸類成分進(jìn)行鑒定，主要成分甲酯化后，采用GC法定量測定。結(jié)果 延齡草脂肪酸類成分主要有3種;甲酯化后，主要成分亞油酸進(jìn)樣量在0.585 8～4.184 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.999 9，平均加樣回收率為87.6%(RSD 為1.75%)。結(jié)論 方法均簡便合理，可以用于延齡草藥材脂肪酸類成分的鑒定和測定。

延齡草;脂肪酸;GC-MS

延齡草(Trillium tschonoskiiMaxim)為多年生草本植物，屬于國家保護(hù)的稀有植物品種，我國分布于西藏、云南、四川、陜西、甘肅、湖北、安徽、浙江及福建部分地區(qū)。延齡草屬植物為傳統(tǒng)名貴中藥，其性味甘平，有降壓、鎮(zhèn)痛、溶血等功效［1-4］。目前主要在民間使用，近年來因森林采伐過度，生境惡化，又因不合理的開發(fā)利用，延齡草分布范圍日趨縮小，種群數(shù)量逐漸減少，故對其化學(xué)成分、藥理藥效進(jìn)行深入研究，即可使其充分發(fā)揮藥用價(jià)值，又能合理保護(hù)生態(tài)環(huán)境。

目前國內(nèi)外對延齡草的化學(xué)成分的研究逐漸深入，從延齡草屬植物中分離得到的次生代謝產(chǎn)物以皂苷為主，包括甾體皂苷、黃酮苷、倍半萜苷、苯丙素苷等類型的化合物［5］。藥理活性主要有抗炎作用、抗衰老作用、消除氧自由基DPPH作用和抑制環(huán)氧化酶COX-2作用等［6-13］。目前對延齡草脂肪酸類成分的研究尚未見報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)通過GC-MS聯(lián)用技術(shù)對其脂肪酸類成分進(jìn)行定性的分析鑒定，并采用GC法對主要成分進(jìn)行測定。

1 定性分析

1.1 材料

1.1.1 試劑與藥材 延齡草藥材采自陜西省安康市千家坪，由陜西省食品藥品檢驗(yàn)所郭耀武主任藥師鑒定為延齡草Trillium tschonoskiiMaxim的根及根莖。所用溶劑均為分析純。

1.1.2 儀器 GCMS-QP2010氣質(zhì)聯(lián)用儀(日本島津公司);電子分析天平(美國saturlous)。

1.2 方法

1.2.1 延齡草脂肪酸類成分提取 延齡草藥材適量，粉碎，過四號篩。稱取1.0 g，置索氏提取器中，加入適量乙醚，浸泡過夜，水浴回流4 h，乙醚液低溫濃縮，定容至10 mL，作為供試品溶液。

1.2.2 GC-MS 分析

氣相色譜條件 色譜柱為HP-5 MS毛細(xì)管色譜柱(柱長 30 m，內(nèi)徑0.25 mm，涂布厚度0.25 μm，Agilent Technologies);程序升溫(初始溫度80℃，保持1 min，以6℃/min升溫至250℃，保持 15 min。);分流比 10 ∶ 1;載氣(He)1.1 mL/min;進(jìn)樣口溫度220℃。

質(zhì)譜條件 離子源為EI源，溫度230℃;電子轟擊能量70 eV;質(zhì)量分析器為四級桿，Scan模式，質(zhì)量掃描范圍為30～400 amu。

1.3 結(jié)果 總粒子流圖見圖1，脂肪酸類成分及相對質(zhì)量分?jǐn)?shù)見表1。

圖1 延齡草脂肪酸類成分總粒子流圖

表1 延齡草脂肪酸類成分及相對質(zhì)量分?jǐn)?shù)

2 亞油酸測定

2.1 儀器 Agilent 6890N氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測器;Sartorius AG ME 235S電子分析天平。

2.2 亞油酸對照品 購自中國藥品生物制品檢定所，批號為111622- 200602;十七酸購自Alfa Aesar公司;乙醚、正己烷等試劑均為分析純。

2.3 色譜條件 色譜柱 Rtx-Wax(30 m ×250 μm ×0.25 μm);檢測器為FID;柱溫:起始溫度170℃，保持1 min，以5℃/min升至240℃，保持1 min;柱體積流量0.7 mL/min，分流比為5∶1。

2.4 線性關(guān)系考察 精密稱取亞油酸對照品0.156 9 g，置于25 mL量瓶，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。吸取上述溶液 5.0、2.5、2.0、1.3、1.0、0.7、0.3 mL，分別置圓底燒瓶中，加0.5%氫氧化鈉溶液8 mL，加十七酸甲醇溶液(6.22 mg/mL)1.0 mL，于60℃水浴回流30 min，放冷，加15%三氟化硼乙醚甲醇溶液5 mL，于60℃水浴回流10 min，放冷，精密加入15 mL正己烷，充分振搖后，靜置，取上層液。分別精密吸取2.0 μL，按上述色譜條件進(jìn)行測定，以濃度質(zhì)量(mg/mL)為橫坐標(biāo)，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為:Y=1.991 3X+0.297 5，r=0.999 9，結(jié)果表明，亞油酸甲酯進(jìn)樣量在0.585 8～4.184 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 供試品溶液制備方法 延齡草藥材適量，粉碎，過四號篩。稱取1.0 g，置索氏提取器中，加入適量乙醚，浸泡過夜，水浴回流4 h，乙醚液低溫?fù)]干，加入甲醇2 mL，0.5%氫氧化鈉溶液8 mL，十七酸甲醇溶液(6.22 mg/mL)1.0 mL，于60℃水浴回流30 min，放冷，加15%三氟化硼乙醚甲醇溶液5 mL，于60℃水浴回流10 min，放冷，精密加入15 mL正己烷，充分振搖后，靜置，取上層液。

2.6 專屬性試驗(yàn) 取相應(yīng)的空白試劑同法制備陰性對照溶液。將對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液分別注入氣相色譜儀，色譜圖見圖2。

2.7 精密度試驗(yàn) 對供試品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，分別進(jìn)樣2.0 μL，測定峰面積，結(jié)果亞油酸甲酯峰面積與十七酸甲酯峰面積之比的RSD為0.092%，結(jié)果表明，精密度良好。

圖2 延齡草脂肪酸甲酯化后色譜圖

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 按照供試品溶液處理方法，制備6份供試品溶液，測定峰面積，將峰面積之比代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得到6份樣品的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為32.95 mg/g，RSD為1.31%。

2.9 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取6份延齡草粉末0.5 g，精密加入亞油酸對照品溶液(質(zhì)量濃度為6.276 mg/mL)各3.0 mL，按前述制備供試品溶液，并測定峰面積。計(jì)算得到亞油酸回收率平均值為87.63%，RSD為1.75%。

3 討論

3.1 提取溶劑選用了乙醚、石油醚、乙酸乙酯、正己烷、三氯甲烷和乙醇分別振搖30 min，靜置過夜后濾過，取續(xù)濾液，發(fā)現(xiàn)提取的成分和含量均無明顯差異，而乙醚索氏提取物量明顯高于浸漬提取，故以乙醚索氏提取液作為供試溶液。

3.2 結(jié)果表明，延齡草主要脂肪酸類成分為亞油酸和棕櫚油酸，相對質(zhì)量分?jǐn)?shù)之和達(dá)到81%，亞油酸量達(dá)到52.36%，甲酯化后測得質(zhì)量分?jǐn)?shù)為32.95 mg/g。亞油酸為不飽和脂肪酸。研究表明不飽和脂肪酸對人體有降低血脂、膽固醇和血壓，抗血栓、抗動(dòng)脈硬化，預(yù)防心血管疾病，增強(qiáng)記憶力，防癌等多種作用［14-16］。但是亞油酸和棕櫚油酸與延齡草的功效是否有關(guān)系，還有待于進(jìn)一步研究。

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R284.1

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1001-1528(2011)08-1446-03

2010-07-27

陜西省科學(xué)技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2006K16-G7)

吳 芳(1979—)，女，主管藥師，主要從事中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和化學(xué)成分研究。Tel:(029)85239848