柴胡、黃芩藥對利膽作用研究

孫付軍， 陳慧慧， 王春芳， 張 敏， 虞慧娟， 李貴海

(1.山東省中醫(yī)藥研究院，山東 濟南 250014;2.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東濟南 250014)

柴胡、黃芩藥對利膽作用研究

孫付軍1， 陳慧慧2， 王春芳2， 張 敏2， 虞慧娟2， 李貴海1

(1.山東省中醫(yī)藥研究院，山東 濟南 250014;2.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東濟南 250014)

目的 觀察柴胡和黃芩配伍對膽汁分泌的影響，找到利膽作用的最佳比例。方法 給予大鼠柴胡和黃芩不同配伍比例受試藥物，連續(xù)給藥10 d。手術(shù)形成瘺管引流膽汁，測定給藥后3 h的膽汁分泌總量，計算膽汁的體質(zhì)量系數(shù)。并測定膽汁中總膽紅素、直接膽紅素、膽固醇量。結(jié)果 各藥對配伍給藥組對大鼠的膽汁具有不同程度的影響，與空白組比較黃芩組和配伍1∶1組膽汁分泌量最多，其次為1∶2組和2∶1組，單獨柴胡組沒出現(xiàn)明顯的膽汁分泌量的增加。與空白組比較各給藥組的總膽紅素水平、直接膽紅素和膽固醇水平有不同程度的改變，總體考察不同配伍對3項指標(biāo)的影響，黃芩量高的配伍增加總膽紅素、直接膽紅素和膽固醇水平，而柴胡量高的配伍上述3項指標(biāo)的水平降低，柴胡和黃芩1∶2配伍組膽固醇水平高于單純黃芩組。結(jié)論 各給藥組綜合比較，適當(dāng)?shù)牟窈忘S芩配伍應(yīng)用可以增加藥物的利膽作用，最佳配伍比例在黃芩和柴胡1∶2和1∶1之間最優(yōu)。

藥對配伍;柴胡;黃芩;利膽作用;實驗研究

柴胡、黃芩是臨床常用的配伍“藥對”，最早出自《傷寒論》，是仲景柴胡系列方劑中最具代表意義的基本配伍，在小柴胡湯、柴葛解肌湯、大柴胡湯、龍膽瀉肝湯等諸多經(jīng)典方劑中配伍應(yīng)用。二者配伍有很好的利膽作用，可配伍茵陳、梔子等清熱退黃藥，以和解退黃，有助于黃疸的消退。本實驗通過給藥大鼠膽管插管后膽汁流量的變化及其膽汁中主要成分量來比較不同配伍比例的柴黃藥對的利膽作用。

1 材料

1.1 藥品 柴胡(批號:060501)、黃芩(批號:20070601)購置于山東濟南天一中藥飲片有限公司，經(jīng)山東省中醫(yī)藥研究院中藥資源研究室鑒定為傘形科植物柴胡Bupleurum chinenseDC(北柴胡)和唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensisGeorgi的干燥根，受試液由山東省千佛山醫(yī)院藥劑科制備，柴胡、黃芩不同比例的配伍受試液分別為:1∶0，1∶2，1∶1，2∶1，0∶1，每種受試藥均制成每毫升含生藥量1 g的溶液備用。

1.2 動物與環(huán)境 動物:Wistar大鼠，雄性，體質(zhì)量(250±20)g，60只，由山東大學(xué)實驗動物中心提供。合格證號:SCXK(魯)20090001。環(huán)境:山東省中醫(yī)藥研究院動物實驗中心，許可證號:SYXK(魯)20050052。

1.3 試劑 總膽紅素試劑盒(TBL)、直接膽紅素(DBL)，重氮法:中生北控生物科技股份有限公司產(chǎn)品，批號:080421、 080321;總膽固醇試劑盒(TC)，酶偶聯(lián)比色法，溫州東歐津瑪生物科技有限公司產(chǎn)品，批號2008120035。

1.4 儀器 BT-2245型自動生化分析儀，意大利Blotcnica公司產(chǎn)品，DDL-5低速冷凍離心機，上海安亭科學(xué)儀器廠，GB-303電子天平，梅特勒中國公司產(chǎn)品。

2 方法與結(jié)果

2.1 方法 雄性wistar大鼠60只，分成空白組、黃芩組、柴胡組和3種不同配伍比例組，每組10只，共6組。分組后以10 mL/kg灌胃給藥，空白組給予同體積生理鹽水。連續(xù)給藥10 d。實驗前禁食12 h，20%烏拉坦(1g/kg)水溶液腹腔麻醉，背位固定，開腹后在右上腹找到胃幽門部，以幽門部為標(biāo)準(zhǔn)，翻轉(zhuǎn)十二指腸，找到白色的十二指腸乳頭部，從乳頭部追蹤膽總管，用小鑷子將覆蓋在表面的被膜剝離幾毫米暴露出膽總管，結(jié)扎下端，小心剪一小口，向膽總管近肝端用硅化管頭皮針做膽管穿刺，固定針頭，形成瘺管引流膽汁，測定給藥后3 h的膽汁分泌總量，計算膽汁的體質(zhì)量系數(shù)。并測定膽汁中的膽固醇 TC［2］，總膽紅素 TBL［3］和直接膽紅素DBL［3］量。所有數(shù)據(jù)均以平均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差表示，SPSS11.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，組間t檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)兩兩比較。

膽汁的體質(zhì)量系數(shù)=膽汁質(zhì)量(g)÷體質(zhì)量(g)×100%

2.2 結(jié)果 通過接取3 h大鼠膽汁，稱取膽汁質(zhì)量計算其體質(zhì)量系數(shù)，如表1所示，除柴胡組外，其他各組均不同程度增加膽汁分泌量，較空白組比較，分泌量強度依次為柴胡:黃芩1∶1組，黃芩組，1∶2組，2∶1組。按照公式計算膽汁的體質(zhì)量系數(shù)，依次為黃芩組，柴胡:黃芩1∶1組，1∶2組，2∶1組。各組間通過t檢驗進(jìn)行兩兩比較，如表2所示，與空白組比較，膽汁分泌量和膽汁的體質(zhì)量系數(shù)黃芩組，柴胡:黃芩1∶1組，1∶2組均具有顯著性差異，提示上述3組具有顯著地促進(jìn)膽汁分泌的作用。通過各組間的兩兩比較，可見黃芩組與1∶1配伍組無顯著性差異，兩組與1∶2配伍組比較，優(yōu)于1∶2配伍組，其次為2∶1配伍組，柴胡組無明顯的促進(jìn)膽汁分泌的作用。

表1 柴胡和黃芩藥對對大鼠3 h膽汁流量的影響(±s，n=10)

表1 柴胡和黃芩藥對對大鼠3 h膽汁流量的影響(±s，n=10)

組 別 劑量/(g/kg) 膽汁/g 系數(shù)/%空白組 —1.474 ±0.359 0.523 ±0.114黃芩組 10 2.133 ±0.356 0.741 ±0.085柴:黃(1 ∶2) 10 1.749 ±0.257 0.691 ±0.127柴:黃(1 ∶1) 10 2.146 ±0.351 0.719 ±0.048柴:黃(2 ∶1) 10 1.675 ±0.435 0.596 ±0.132柴胡組10 1.447 ±0.176 0.537 ±0.046

表2 各組間膽汁分泌量和膽汁的體質(zhì)量系數(shù)的兩兩比較

收集各組大鼠的膽汁，進(jìn)行膽汁主要成分的檢測，結(jié)果如表3所示，與空白組比較各給藥組的總膽紅素水平有不同程度的改變，黃芩組總膽紅素水平降低，柴胡黃芩1∶2配伍組則明顯升高，2∶1配伍組明顯低于空白組，柴胡組亦明顯降低，總體考察不同配伍對總膽紅素的影響，可能存在如下作用趨勢，黃芩和柴胡配伍應(yīng)用，黃芩含量高的配伍增加總膽紅素水平，隨黃芩比例的降低和柴胡比例的升高，總膽紅素水平降低。單獨黃芩和柴胡組對總膽紅素的水平影響無明顯差別。各配伍組直接膽紅素水平的改變與總膽紅素水平趨勢相同，隨黃芩比例的下降和柴胡比例的升高而降低，其中單獨黃芩組水平最高，單獨柴胡組水平最低。膽固醇水平趨勢與總膽紅素和直接膽紅素的變化趨勢基本一致，但單獨黃芩組提高膽固醇的水平與1∶2組比較較弱，與1∶1相當(dāng)。

各組間3個指標(biāo)分別進(jìn)行組間的兩兩比較，如表4所示，與各組比較1∶2配伍組3個指標(biāo)水平改變最為明顯，1∶1組3個指標(biāo)中TBL水平高于黃芩組，其他兩指標(biāo)低于黃芩組，2∶1配伍組3個指標(biāo)的水平較低，柴胡組更低。

3 討論

肝膽汁由毛細(xì)膽管膽汁和膽管膽汁組成。毛細(xì)膽管膽汁約占肝膽汁的2/3，是肝細(xì)胞直接分泌入毛細(xì)膽管的膽汁和通過旁細(xì)胞間隙或旁細(xì)胞途徑入毛細(xì)膽管的膽汁。膽管膽汁約占1/3，由膽管上皮生成。在毛細(xì)膽管部分，血漿中的水和溶質(zhì)主要通過跨細(xì)胞途徑、旁細(xì)胞途徑和混合途徑等3條途徑由肝竇周隙進(jìn)入毛細(xì)膽管，形成毛細(xì)膽管膽汁。在膽管部分，血漿中的水和溶質(zhì)直接通過膽管上皮細(xì)胞進(jìn)入膽管，形成膽管膽汁，這兩種膽汁匯合形成肝膽汁［4］。

表3 柴胡和黃芩藥對對大鼠膽汁主要成分的影響(±s，n=10)

表3 柴胡和黃芩藥對對大鼠膽汁主要成分的影響(±s，n=10)

組 別 劑量/(g/kg) TBL/(μmol/L) DBL/(μmol/L) TC/(mmol/L)空白組 —217.86 ±34.76 68.43 ±5.42 0.50 ±0.15黃芩組 10 195.40 ±40.23 70.93 ±11.19 0.60 ±0.05柴:黃(1 ∶2)組 10 251.17 ±31.32 66.57 ±9.69 0.68 ±0.12柴:黃(1 ∶1)組 10 204.50 ±27.27 63.83 ±16.29 0.57 ±0.09柴:黃(2 ∶1)組 10 153.67 ±27.11 62.27 ±8.51 0.54 ±0.09柴胡組10 189.13 ±19.36 51.23 ±5.69 0.54 ±0.08

表4 各組間TBL，DBL，TC水平的兩兩比較

在膽汁形成的過程中，溶質(zhì)被主動分泌入毛細(xì)膽管，形成滲透壓梯度，使水分被動轉(zhuǎn)移地進(jìn)入毛細(xì)膽管。位于肝血竇底側(cè)胞漿膜上的Na+－K+-ATP酶在膽汁酸依賴性膽汁的形成中起非常重要的作用。由于有機陰離子膽汁酸與Na+偶聯(lián)，故來自肝血竇的膽汁酸則以Na+－膽汁酸［5］結(jié)合的形式進(jìn)入肝細(xì)胞內(nèi)。隨著膽汁酸在肝細(xì)胞內(nèi)的積聚，肝細(xì)胞與毛細(xì)膽管腔間即形成一定的化學(xué)濃度梯度，使膽汁酸很快順濃度梯度進(jìn)入毛細(xì)膽管腔。除膽汁酸外，其他的有機陰離子［6］也通過此種結(jié)合轉(zhuǎn)運機制進(jìn)入毛細(xì)膽管中。此外，膽汁酸也可經(jīng)高爾基復(fù)合體與微泡囊的泡囊轉(zhuǎn)運系統(tǒng)，將膽汁酸從肝細(xì)胞運至毛細(xì)膽管。膽汁中有機酸離子在毛細(xì)膽管中以微膠粒［7］的形式存在，形成一定的滲透壓，致使水分被動地進(jìn)入毛細(xì)膽管，使膽汁流量增加。

通過實驗觀察發(fā)現(xiàn)各藥對配伍給藥組對大鼠的膽汁具有不同程度的影響，與空白組比較黃芩組和配伍1∶1組膽汁分泌量最多，其次為1∶2組和2∶1組，單獨柴胡組沒出現(xiàn)明顯的膽汁分泌量的增加。對膽汁主要成分總膽紅素、直接膽紅素及膽固醇量的測定，各組3項指標(biāo)水平比較，1∶2配伍組和黃芩組各指標(biāo)水平整體比較相對較高，1∶1配伍組和2∶1配伍組及柴胡組依次降低。通過實驗結(jié)果可提示黃芩和柴胡配伍應(yīng)用時，其利膽作用在一定范圍內(nèi)可能隨黃芩量的增加而增強［8］，而增加到一定程度利膽作用再呈現(xiàn)降低趨勢，對膽汁主要成分的影響亦表現(xiàn)出此作用特點。膽汁量的增加主要表現(xiàn)為受試藥對膽汁中溶質(zhì)量的增加，進(jìn)而引起的滲透性利水作用，通過實驗觀察同時可見膽汁中主要溶質(zhì)膽紅素水平和膽固醇水平改變，基本與膽汁總量一致，也進(jìn)一步驗證了上述的利膽作用。單獨柴胡給藥組沒有明顯的利膽作用，對膽汁中膽紅素的水平有一定的抑制作用［9］，而對膽固醇有增加的趨勢。

通過實驗觀察筆者認(rèn)為，適當(dāng)?shù)牟窈忘S芩配伍應(yīng)用可以增加藥物的利膽作用，最佳配伍比例可在黃芩和柴胡1∶2和1∶1之間最優(yōu)。

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R285.5

B

1001-1528(2011)08-1418-03

2011-05-05

山東省青年基金資助項目(Q2008C16)

孫付軍(1976—)，男，助理研究員，研究方向:中藥藥理與毒理。Tel:(0531)82949848，E-mail:sunfujun01@126.com