注射用雷貝拉唑鈉有關(guān)物質(zhì)的HPLC法優(yōu)化檢測

丁 琛，李曉婷，劉留成

1江蘇省中醫(yī)院藥劑科，南京 210029；2江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司，南京 211112

雷貝拉唑鈉（rabeprazole sodium）為苯并咪唑類化合物[1]，其結(jié)構(gòu)式見圖1。

圖1 雷貝拉唑鈉結(jié)構(gòu)式

它是日本衛(wèi)材公司發(fā)現(xiàn)和開發(fā)的一種質(zhì)子泵抑制劑[2]，代號(hào) E-3810，于 1997年首先在日本上市，1999年本品已在美國和瑞典上市，商品名：Pariet，劑型為腸溶片。用于治療胃潰瘍，十二指腸潰瘍，吻合口潰瘍，反流對食管炎，卓-艾氏綜合癥等適應(yīng)癥。雷貝拉唑鈉作為新一代質(zhì)子泵抑制劑，具有較高的pKa值，口服后可在體內(nèi)快速活化，與質(zhì)子泵結(jié)合發(fā)揮抑酸作用[3]。雷貝拉唑鈉在抗分泌作用、抗幽門螺桿菌作用、藥物的相互作用、藥物的安全性及代謝的多態(tài)性等方面與第一代質(zhì)子泵抑制藥相比具有明顯的優(yōu)點(diǎn)[4-6]。

現(xiàn)有注射用雷貝拉唑鈉有關(guān)物質(zhì)HPLC測定方法靈敏度低、專屬性差，當(dāng)樣品經(jīng)過酸、堿、光照、氧化、加熱破壞后，含量有明顯降低，而有關(guān)物質(zhì)檢測變化不明顯，同時(shí)該測定方法不能靈敏地檢測雜質(zhì)峰的個(gè)數(shù)及峰面積。為了提高雷貝拉唑鈉有關(guān)物質(zhì)檢查的分離度、兼顧峰形和分析時(shí)間，建立一個(gè)靈敏性高，專屬性強(qiáng)，耐用性好的色譜條件是必須的。本實(shí)驗(yàn)首先找出雷貝拉唑鈉及雜質(zhì)的最大吸收波長，確定有關(guān)物質(zhì)的檢測波長；通過對流動(dòng)相的摸索，找出準(zhǔn)確、可靠、主峰與雜質(zhì)分離效果好的流動(dòng)相色譜條件。

注射用雷貝拉唑鈉在生產(chǎn)及貯存過程中可能帶入或產(chǎn)生有關(guān)物質(zhì)，因此本品須進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查。國內(nèi)常用磷酸鹽、乙腈作為流動(dòng)相，但雜質(zhì)峰與主峰分離效果不佳，因此在參考國內(nèi)外文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，通過大量預(yù)實(shí)驗(yàn)，采用磷酸鹽-乙腈-甲醇做流動(dòng)相，專屬性強(qiáng)，靈敏度高，適用于注射用雷貝拉唑鈉中有關(guān)物質(zhì)的檢測。

1 儀器、試劑與試藥

島津LC-10A高效液相色譜儀系統(tǒng)，包括LC-10ATvp泵，SPD-10A紫外檢測器，C-R8A色譜數(shù)據(jù)處理儀。

乙腈、甲醇為色譜純；磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀為分析純。

對照品雷具拉唑鈉：由江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司提供，批號(hào)：20080508，含量：99.97%；供試品：注射用雷貝拉唑鈉，規(guī)格：20 mg（以C18H21N3O3S計(jì)），由江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司提供，批號(hào)：20080511、20080515、20080519。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Shimadzu C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：(a)磷酸鹽緩沖液（取磷酸氫二鈉1.119 g和磷酸二氫鈉0.179 g，加水1000 mL溶解，混勻）-乙腈 （60︰40），(b)0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀緩沖溶液(0.1 mol·L-1氫氧化鈉溶液調(diào) pH7.0)-乙腈 （70︰30），(c)0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀緩沖溶液-甲醇-乙腈 （50︰30︰20，1.0 mol·L-1氫氧化鉀溶液調(diào) pH 7.0）；流速：1.0mL·min-1；柱溫：25℃；檢測波長：286nm；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物50 mg（相當(dāng)于雷貝拉唑鈉15 mg），置50 mL量瓶中，加0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.3 mg·mL-1的供試品溶液。

2.2.2 對照品溶液的制備取雷貝拉唑鈉對照品15 mg，精密稱定，置 50 mL 量瓶中，加 0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 流動(dòng)相篩選

[7-9]，注射用雷貝拉唑鈉有關(guān)物質(zhì)檢查流動(dòng)相常用的成分有磷酸鹽、乙腈、甲醇等，在查閱國內(nèi)外資料的基礎(chǔ)上，通過摸索，本文采用流動(dòng)相(a)、(b)、(c)對供試品溶液進(jìn)行檢測。由圖2結(jié)果表明：在流動(dòng)相(a)、(b)、(c)中，有關(guān)物質(zhì) 2 與主峰 1 之間的分離度分別為1.5、1.5、2.4，有關(guān)物質(zhì)2與主峰1面積百分比分別為0.64%、0.64%、0.65%。即流動(dòng)相(c)在主峰的保留時(shí)間、主峰與雜質(zhì)峰的分離度方面均優(yōu)于流動(dòng)相(a)、(b)。且用流動(dòng)相(c)進(jìn)行空白溶劑及輔料干擾性試驗(yàn)，結(jié)果溶劑及輔料在主峰及雜質(zhì)峰出峰位置均無干擾。因此流動(dòng)相(c)適合注射用雷貝拉唑鈉有關(guān)物質(zhì)的檢測。

2.4 專屬性考察

2.4.1 破壞性試驗(yàn)酸破壞：取本品內(nèi)容物50 mg（相當(dāng)于雷貝拉唑鈉15 mg），置50 mL量瓶中，加0.1 mol·L-1鹽酸溶液4 mL，搖勻，于室溫條件下放置4 h后，滴加1 mol·L-1氫氧化鈉溶液中和，再加0.001 mol·L-1氫氧化鈉稀釋至刻度。

堿破壞：取本品內(nèi)容物50 mg（相當(dāng)于雷貝拉唑鈉 15 mg），置 50 mL 量瓶中，加 0.1 mol·L-1氫氧化鈉溶液4 mL，搖勻，于室溫條件下放置4 h后，滴加 1 mol·L-1鹽酸溶液中和，再加 0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液稀釋至刻度。

氧化破壞：取本品內(nèi)容物50 mg（相當(dāng)于雷貝拉唑鈉15mg），置50mL量瓶中，加30%過氧化氫2mL，搖勻，于室溫條件下放置4 h后，加0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液稀釋至刻度。

光照破壞：取本品內(nèi)容物50 mg（相當(dāng)于雷貝拉唑鈉 15 mg），置 50 mL 量瓶中，加 0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，置強(qiáng)光條件下（4500 Lx）放置 4 h 后，取出。

熱破壞：取本品內(nèi)容物50 mg（相當(dāng)于雷貝拉唑鈉 15 mg），置 50 mL 量瓶中，加 0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液使溶解并稀釋至刻度，置100℃水浴上加熱4h取出，冷卻。

取上述5種溶液，采用流動(dòng)相(c)，按上述色譜條件分別進(jìn)樣，記錄色譜圖。由圖3可見，雷貝拉唑鈉在酸、熱破壞下不穩(wěn)定；各破壞條件下均產(chǎn)生數(shù)個(gè)分解產(chǎn)物峰，各分解產(chǎn)物峰與主峰的分離度達(dá)到了1.5以上，各雜質(zhì)峰之間也能達(dá)到較好地分離，此色譜條件能滿足本品有關(guān)物質(zhì)檢查的需要。

2.4.2 峰純度檢驗(yàn)取“2.2.1”項(xiàng)下供試品溶液，采用流動(dòng)相（c）色譜條件，但采用二極管陣列檢測器檢測，結(jié)果表明主成分峰雷貝拉唑峰純度系數(shù)大于0.999，為單峰。

2.4.3 理論板數(shù)和拖尾因子的測定“2.4.2”項(xiàng)下的理論板數(shù)和拖尾因子分別為9668和1.08。

2.4.4 最低檢測限和定量限測定取“2.2.2”項(xiàng)下的對照品溶液，用0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液進(jìn)行適當(dāng)稀釋后，按上述色譜條件進(jìn)行測試，直至進(jìn)樣所得圖譜中雷貝拉唑峰的響應(yīng)值約為基線噪音的3倍和10倍，根據(jù)此時(shí)進(jìn)樣濃度算出雷貝拉唑最低檢出限與定量限分別為0.6ng和2.0ng。

2.4.5 樣品中有關(guān)物質(zhì)的考察取3批樣品及對照品，按“2.2”項(xiàng)下的溶解方法和上述色譜條件進(jìn)行檢測，3批樣品的測定結(jié)果有關(guān)物質(zhì)峰2與峰1的面積比分別為0.65%、0.62%和0.67%，符合《中國藥典》中有關(guān)要求。

3 討 論

3.1 檢測波長的選擇

取本品，加0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液制成每1 mL含雷貝拉唑鈉0.012 mg的溶液,照紫外-可見分光光度法測定，在190 nm～450 nm波長范圍內(nèi)繪制吸收曲線圖，紫外圖譜顯示，本品在220 nm與286 nm的波長處有最大吸收，其中在220 nm波長，流動(dòng)相本身有吸收，干擾主成分測定,故選用286 nm作為有關(guān)物質(zhì)的測定波長。

3.2 從雷貝拉唑鈉結(jié)構(gòu)上分析

1H–苯并咪唑鈉鹽在酸性及加熱條件下，極易被氫取代，3-甲氧基丙氧基中的兩個(gè)醚鍵也易斷開，亞磺?；溡踩芤簲嚅_。正如雷貝拉唑鈉破壞性試驗(yàn)所示，其在酸性及加熱下不穩(wěn)定。國外的文獻(xiàn)資料顯示：有關(guān)物質(zhì)2基本上可以確定為亞磺?；I斷裂產(chǎn)物。

3.3 溶劑的選擇

本實(shí)驗(yàn)用 0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液作溶劑而不用流動(dòng)相，是因?yàn)榱鲃?dòng)相呈中性，雷貝拉唑鈉易分解。實(shí)驗(yàn)中用流動(dòng)相做溶劑，連續(xù)進(jìn)樣，圖譜中的雜質(zhì)峰逐漸增多，放置24 h后，溶液由無色變?yōu)榱咙S色。故選用0.001 mol·L-1氫氧化鈉溶液作溶劑。

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