FHIT、survivin、PTEN在上皮性卵巢癌中的表達及其臨床意義

宣樟標 洪麗華

卵巢惡性腫瘤是女性生殖器官三大惡性腫瘤之一，它的病死率居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤首位。上皮性卵巢癌占全部卵巢原發(fā)性惡性腫瘤的85%～90%，惡性程度高、病情發(fā)展快、預后差，大部分上皮性卵巢癌發(fā)現(xiàn)于晚期，5年生存率僅為30%～40%，已成為嚴重威脅婦女健康和生命的主要腫瘤[1]。卵巢癌的發(fā)生是多基因、多步驟的復雜過程，癌基因的激活、抑癌基因的失活、細胞周期調(diào)節(jié)紊亂均可導致卵巢癌的發(fā)生發(fā)展。FHIT基因是一種與組氨酸三聯(lián)體(HIT)蛋白具有高度同源性抑癌基因，主要通過參與細胞周期調(diào)控和凋亡發(fā)揮作用。生存素(survivin)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種凋亡抑制基因，具有調(diào)節(jié)細胞分化、抑制細胞凋亡的功能;PTEN是一種具有磷酸酶活性的抑癌基因，在調(diào)控細胞生長和凋亡過程中發(fā)揮重要作用;研究采用免疫組織化學S-P法檢測了脆性組氨酸三聯(lián)體蛋白(FHIT)、survivin和PTEN在上皮性卵巢癌中的表達并分析三者在上皮性卵巢癌發(fā)生發(fā)展及預后中的作用，以期為上皮性卵巢癌的治療、預后判定提供有價值的分子檢測指標。

資料與方法

1.對象:2008年1月～2010年6月筆者醫(yī)院住院婦科切除手術(shù)標本經(jīng)病理科確診為上皮性卵巢癌60例和正常上皮來源卵巢組織52例作為對照組。上皮性卵巢癌分類按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO，2000年)標準進行手術(shù)-病理分期:Ⅰ期23例、Ⅱ期19例、Ⅲ期11例、Ⅳ期7例;60例上皮性卵巢癌患者中，每例均有詳細的臨床資料、手術(shù)記錄，所有病人均無遠處轉(zhuǎn)移，術(shù)前均未接受化療和放療。

2.方法:(1)免疫組織化學S-P法:FHIT、survivin、PTEN鼠抗人單克隆抗體，SP試劑盒，DAB顯色劑均購自北京中杉公司。用已知陽性切片作陽性對照，用PBS液代替一抗做陰性對照，實驗步驟參照試劑盒說明書。(2)陽性結(jié)果判斷標準:survivin陽性染色主要定位于卵巢上皮細胞質(zhì)，PTEN和FHIT陽性物質(zhì)主要定位于細胞核，三者的陽性物質(zhì)均呈棕黃色顆粒，陽性判定方法:于高倍鏡下隨機取10個不同視野，各記數(shù)100個細胞，結(jié)果進行半定量分析。對陽性細胞染色強度進行評分(無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分);再對陽性細胞所占百分比進行評分(陽性細胞≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分;)。PTEN和FHIT結(jié)果取兩者評分之乘積，染色強度與陽性細胞百分比的乘積＞3分判為免疫陽性，乘積為0～3分判為陰性。survivin評分略改動，只記為陰性與陽性，乘積＜1分為陰性，其余均為陽性。

3.統(tǒng)計學分析:采用的SPSS 16.0軟件分析，數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差()表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。計量資料組間比較采用完全隨機設計的t檢驗，組內(nèi)比較采用配對t檢驗;計數(shù)資料采用率描述，率的比較采用χ2檢驗;相關分析用Pearson相關分析。

結(jié) 果

1.FHIT、survivin和PTEN蛋白在不同卵巢組織中的陽性表達結(jié)果:60例卵巢癌組織中FHIT蛋白陽性表達率為51.7%(31/60)與正常卵巢上皮組織之間陽性表達率84.6%(44/52)比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=13.671，P ＜0.01);survivin蛋白陽性表達率為73.3%(44/60)與正常卵巢上皮組織之間陽性表達率15.4%(8/52)比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=31.610，P＜0.01);PTEN蛋白異常表達率為53.3%(32/60)與正常卵巢上皮組織之間陽性表達率76.9%(40/52)比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=6.752，P＜0.01)(表1)。

表1 FHIT、survivin和PTEN在不同卵巢組織中的表達(n)

2.FHIT、survivin和PTEN蛋白在卵巢癌組織中表達及與卵巢癌患者臨床病理特征的關系:隨著卵巢癌臨床分期增高、分化程度減低、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移survivin表達呈上升趨勢，而FHIT、PTEN表達呈下降趨勢(表2)(因為未、低分化統(tǒng)計沒有意義，中、高分化統(tǒng)計也沒有意義，故將其合并;臨床病理分期情況也是一樣)。

表2 卵巢癌組織中FHIT、survivin和PTEN的表達與臨床病理特癥的關系[n(%)]

3.FHIT蛋白表達與survivin和PTEN蛋白表達的關系:卵巢癌組織中FHIT的陽性表達與survivin呈負相關(r=-0.624，P ＜0.01)，與 PTEN 呈正相關(r=0.719，P ＜0.01)(表3)。

表3 FHIT與survivin、PTEN表達的相關性

討 論

由于卵巢深居盆腔，卵巢癌早期癥狀沒有特異性且不明顯，卵巢上皮性癌發(fā)展迅速，易于轉(zhuǎn)移和廣泛播散，就診時超過70%的患者處于Ⅲ/Ⅳ期，且多見有腹腔積液及盆腹腔廣泛的種植轉(zhuǎn)移，使之始終占據(jù)卵巢惡性腫瘤病死率的首位;而且近年來發(fā)病率呈上升趨勢，因此研究上皮性卵巢癌發(fā)生的分子機制、尋找新的有效的治療靶點具有重大的現(xiàn)實意義。目前認為抑癌基因FHIT、PTEN和癌基因survivin在卵巢上皮腫瘤中的表達異常，與卵巢上皮腫瘤的發(fā)生和發(fā)展具有重要作用，是卵巢癌發(fā)生的重要原因之一。

脆性三聯(lián)組氨酸(FHIT)基因是Ohta M等[2]于1996年用差異顯示分析探針和外顯子捕獲法確定的一個候選抑癌基因，它定位于人類染色體3p14.2。FHIT基因結(jié)構(gòu)及表達的異常見于多種類型的腫瘤細胞株和原發(fā)瘤組織，卵巢上皮性腫瘤中FHIT基因或表達的異常已有少量研究。有研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)HIT異常表達是卵巢惡性、交界性腫瘤的重要特征，正常FHIT表達喪失與卵巢癌的進展密切相關[3]。本實驗結(jié)果顯示，F(xiàn)HIT在上皮性卵巢癌中出現(xiàn)特異性表達喪失，丟失率為48.3%，遠高于正常卵巢上皮組織的13.0%，與Hong FZ等[3]研究結(jié)果相符，這提示FHIT的特異性表達喪失可能與上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展有關。為進一步探討FHIT蛋白在上皮性卵巢癌進展中的作用，我們還分析了FHIT的表達與臨床病理參數(shù)間的關系。結(jié)果表明FHIT蛋白在組織分型組卵巢癌中陽性表達率差異無顯著性，但與卵巢癌的病理分級、臨床分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著性相關，本實驗結(jié)果提示FHIT蛋白是與上皮性卵巢癌的惡性進展相關的重要抑癌蛋白，其失表達預示腫瘤惡性程度高、病人預后不良。

survivin是新近發(fā)現(xiàn)的一種結(jié)構(gòu)獨特的哺乳類凋亡抑制蛋白(IAP)，廣泛表達于人類各種腫瘤組織，具有抑制細胞凋亡和調(diào)節(jié)細胞有絲分裂的雙重作用，選擇性地表達于一般的人類腫瘤，正常成人組織中不表達。survivin蛋白是一種位于細胞核-質(zhì)之間的穿梭蛋白，在上皮性卵巢癌中表達上調(diào)，與細胞增生關系密切，對上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，survivin的細胞核高表達與上皮性卵巢癌患者的預后不良密切相關[4]。本實驗研究表明，survivin蛋白在上皮性卵巢癌組織中過表達，陽性表達率為73.3%，顯著高于正常卵巢組織中的15.4%(P＜0.01)。Liguang Z等[5]檢測114例上皮性卵巢癌組織中survivin的表達陽性率為73.0%，明顯高于正常卵巢組織的19.0%，與我們的研究結(jié)果大致相符。臨床病理分析顯示，survivin蛋白表僅與臨床分期、分化程度和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關，而與組織分型無明顯相關性，據(jù)此可推斷，上皮性卵巢癌分期越晚、組織分化惡性度越低、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時survivin的表達越強，檢測survivin的表達水平對于判斷上皮性卵巢癌的惡性程度及預測預后具有一定的臨床參考價值。

PTEN基因是迄今發(fā)現(xiàn)的第一個具有特異性磷酸酶活性抑癌基因，在細胞生長發(fā)育、信號轉(zhuǎn)導和凋亡中起重要作用，其突變失活與人類多種惡性腫瘤的發(fā)生密切相關。PTEN在不同腫瘤中如子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌和乳腺癌等經(jīng)常變異調(diào)節(jié)。PTEN可通過多種途徑抑制腫瘤細胞的浸潤和轉(zhuǎn)移，PTEN發(fā)揮作用的主要途徑是脂質(zhì)磷酸酶活性，每種導致PTEN蛋白喪失功能的突變同時都伴隨有脂質(zhì)磷酸酶活性的喪失。這表明脂質(zhì)磷酸酶活性對于細胞生長起重要作用。PTEN蛋白通過使PIP3去磷酸化，拮抗了PKB/Akt信號系統(tǒng)，從而阻斷了Akt及其下游激酶的活性，抑制了細胞分裂增殖，誘導細胞凋亡，從而發(fā)揮抑癌作用[6]。

目前關于PTEN與卵巢癌的確切關系，研究結(jié)果不一。Kurose等[7]認為卵巢上皮性癌中存在PTEN基因突變，但該基因突變在卵巢上皮性癌的發(fā)生發(fā)展中無重要作用。而Saito等[8]的研究結(jié)果提示PTEN蛋白表達缺失可能在卵巢癌的發(fā)病中是一個晚期事件。本研究發(fā)現(xiàn)，PTEN蛋白在正常卵巢組織和上皮性卵巢癌中的陽性表達率呈逐漸下降趨勢(P＜0.01);推測PTEN蛋白表達可能是正常卵巢組織生長的必要因素之一，而PTEN蛋白表達下降或缺失可能使卵巢組織生長失控，最終導致癌變的發(fā)生。通過分析PTEN蛋白表達與上皮性卵巢癌臨床病理指標的關系表明，PTEN在上皮性卵巢癌的失表達與臨床病理分期、分化程度和有無淋巴轉(zhuǎn)移有關，而與組織學分級無關，與Qiao等[9]研究相一致。由此可見，PTEN蛋白表達與否能夠預示上皮性卵巢癌患者的預后。

FHIT和survivin均參與細胞周期調(diào)控和細胞凋亡，但生物學效應相反。本研究結(jié)果提示，survivin的表達在正常卵巢組織和上皮性卵巢癌中有逐漸上升的趨勢，PTEN的表達有逐漸下降的趨勢，F(xiàn)HIT和survivin表達呈負相關;而FHIT和PTEN表達呈正相關，在所檢測的卵巢組織中 PTEN基因表達隨著FHIT基因表達降低而下降。因此，推測FHIT可能通過協(xié)同PTEN轉(zhuǎn)錄而參與卵巢癌的發(fā)生及演進，它們可能協(xié)同在卵巢上皮性癌中發(fā)揮作用。因此，聯(lián)合檢測卵巢癌組織中FHIT、survivin和PTEN基因，將有望為卵巢癌的早期診斷、早期治療及預后判斷提供必要的理論依據(jù)，并制定合理的治療方案。

1 豐有吉，沈鏗.婦產(chǎn)科學.6版，北京:人民衛(wèi)生出版社，2005:330-343

2 Ohta M，Inoue H，Cotticelli MG，et al.The human FHIT gene，spanning the chromosome 3P14.2fragile site and renal cell carcinoma associated translocation breakpoint，is abnormal in digestive tract cancer[J].Cell，1996，84;587-597

3 洪凡真，王波，李曉明，等.上皮性卵巢癌組織脆性組氨酸三聯(lián)基因甲基化和3p14的等位基因丟失[J].中華病理學雜志，2005，34(5):257-261

4 Wang JJ，Zheng Y，Yang F，at al.Survivin small interfering RNA transfected with a microbubble and ultrasound exposure inducing apoptosis in ovarian carcinoma cells[J].Int J Gynecol Cancer，2010，20(4):500-506

5 Liguang Z，Peishu L，Hongluan M，et al.Survivin expression in ovarian cancer[J].Exp Oncol，2007，29(2):121-125

6 Downes CP，Perera N，Ross S，et al.Substrate specificity and acute regulation of the tumour suppressor phosphatase，PTEN[J].Biochem Soc Syrmp，2007，74(1):69-80

7 Kurose R，Zhou XP，Araki T，et al.Frequent loss of PTEN expression in linked to elevated phosphorylated Alt levels，but not associated with p27 and cyclin D1 expression，in primary epithelial ovarian carcinomas[J].Am J Patholo，2001，158(6):2097-2106

8 Saito M，Okanoto A，Kohno T et al.Allelic imbalance and mutations of the PTEN gene in ovarian cancer[J].Int J Cancer，2000，85:160-165

9 喬玉環(huán)，程佳，郭瑞霞，等.卵巢上皮性癌組織中磷酸化蛋白激酶B和PTEN蛋白的表達及其意義[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2007，42(5):325-329