竹節(jié)人參皂苷對乙醇致肝細(xì)胞L-O2損傷的保護(hù)作用

李有貴，計(jì)東風(fēng)，鐘 石，鄭賢林，時(shí)連根

(1.浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物科學(xué)系，浙江杭州 310029;2.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶桑研究所，浙江杭州 310021)

竹節(jié)人參(Panax japonicus C.A.Mey)系五加科植物，為《中國藥典》收載的名貴常用中藥，其主要化學(xué)成分為竹節(jié)人參皂苷［1－2］，具有保護(hù)乙醇性胃黏膜損傷和抗氧化等多方面的作用［3－4］。近年來，本課題組研究發(fā)現(xiàn)，人工栽培竹節(jié)人參總皂苷具有顯著的體外清除自由基的作用［5］，可降低乙醇性肝損傷小鼠血清和肝組織中丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量，提高谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH－Px)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性;細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，其可通過上調(diào)GPX3，SOD1和SOD3的mRNA水平，從而發(fā)揮抗氧化作用［5］。但竹節(jié)人參皂苷單體對乙醇性肝細(xì)胞損傷的作用尚未見報(bào)道。因此，本研究對通過高效液相色譜－蒸發(fā)光散射檢測法(HPLC－ELSD)分離純化得到的純度大于98%的竹節(jié)人參皂苷單體，觀察其對人源性肝細(xì)胞L－O2的生長、細(xì)胞內(nèi)MDA含量及GSH－Px和SOD活性的影響，探討竹節(jié)人參皂苷對乙醇損傷肝細(xì)胞的保護(hù)作用及可能的作用機(jī)制，為竹節(jié)人參的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞株、試劑和儀器

人胚肝細(xì)胞L－O2，中國科學(xué)院上海生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所。噻唑藍(lán)(MTT)和二甲亞砜(DMSO)，美國Sigma公司;RPMI 1640培養(yǎng)基，美國Gibco BRL公司;胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)，杭州四季青生物材料研究所;胰蛋白酶和磷酸鹽緩沖液，美國Amresco公司;MDA含量、SOD和GSH－Px活性測定試劑盒，南京建成生物工程研究所(批號(hào)20100520)。CO2培養(yǎng)箱，美國Thermo公司;Leica－DM2500正置顯微鏡，德國 Leica公司;Nikon－TS100型倒置光學(xué)顯微鏡，日本Nikon公司;Infinite M200酶標(biāo)儀，瑞士TECAN公司;超低溫冰箱，日本Sanyo公司;96和6孔培養(yǎng)板，美國Corning公司;Agilent 1200液相系統(tǒng)，包括四元泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，自動(dòng)收集器，真空脫氣機(jī)，蒸發(fā)光散射檢測器(Sedex 85)，法國Sedere公司;操作軟件為 Agilent chemstation，美國 Agilent公司;micrOTOF QⅡ型質(zhì)譜儀，德國Bruker Daltonics公司。針式過濾器，美國Pall公司。

1.2 竹節(jié)人參總皂苷的提取

竹節(jié)人參采自浙江臨安青涼峰自然保護(hù)區(qū)人工種植的3年生根莖，由浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)信所洪林副研究員鑒定，65℃干燥，常溫粉碎過120目篩備用。準(zhǔn)確稱取竹節(jié)人參粉末10 g，加入乙醚(料液比1 g∶40 ml)，超聲波提取4 h，棄去乙醚液，取殘?jiān)鼡]發(fā)乙醚，加甲醇(料液比1 g∶40 ml)超聲波提取4 h，取甲醇提取液，揮發(fā)干燥。提取物加去離子水50 ml溶解后置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇萃取5次，每次30 ml，合并正丁醇萃取液。正丁醇萃取液先用1%氫氧化鈉溶液洗滌3次，每次50 ml，棄去堿液，再用正丁醇洗滌3次，每次50 ml，棄去水液。取正丁醇萃取液，蒸干，加甲醇溶解，即得竹節(jié)人參總皂苷粗提液［6］。

1.3 竹節(jié)人參皂苷的純化及質(zhì)譜分析

竹節(jié)人參總皂苷粗提液過0.45 μm過濾器，濾過液上機(jī)進(jìn)行HPLC分離。色譜柱:ZORBAX SB－C18(150 mm ×2.1 mm，5 μm);柱溫:35℃;流動(dòng)相:0.1%醋酸水溶液(A)和乙腈(B)，梯度洗脫〔(0～20 min，(17% ～20%)B;20～21 min，(20% ～24%)B;21～30 min，(24% ～29%)B;30 ～40 min，(29% ～33%)B;40～45 min，(33% ～41%)B;45 ～57 min，(41% ～55%)B;57～58 min，(55% ～90%)B;58～63 min，95%B;63～64 min，(95% ～17%)B;64～70 min，17%B〕，流速 0.6 ml·min－1，蒸發(fā)光散射檢測器，蒸發(fā)溫度40℃，載氣為壓縮空氣，壓力0.34 MPa，增益系數(shù)為1。對每一個(gè)皂苷組分進(jìn)行自動(dòng)收集，同時(shí)進(jìn)行質(zhì)譜分析。

質(zhì)譜分析條件:micrOTOF QⅡ型質(zhì)譜儀采用ESI離子源;掃描方式:負(fù)離子;流速 0.3 ml·min－1;噴霧氣體60 kPa及干燥氣體(6.0 L·min－1)均為氮?dú)?N2);干燥溫度220℃;毛細(xì)管電壓3500 V，毛細(xì)管出口電壓－170.0 V;以氬氣作為碰撞氣體對各個(gè)物質(zhì)進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離電壓在30～50 eV間變化，掃描質(zhì)荷比(mass－to－charge ratio，m/z)范圍為 50 ～3000。

1.4 竹節(jié)人參皂苷樣品溶液的制備

精密稱取純化的竹節(jié)人參皂苷Rg1，Re，Rf，F(xiàn)3，Rg2和 Rd，用無血清培養(yǎng)液(含 0.1%DMSO)溶解后，依次稀釋配制成 0.32，0.64，1.28，2.56 和5.12 g·L－1梯度的樣品溶液，針式過濾器除菌后使用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.5 細(xì)胞培養(yǎng)

人胚肝細(xì)胞L－O2采用RPMI 1640培養(yǎng)基(加10%滅活FBS，不含抗生素)置于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中飽和濕度培養(yǎng)，2 d換液1次。實(shí)驗(yàn)中所用細(xì)胞均處于對數(shù)生長期，活細(xì)胞數(shù)大于95%。

1.6 MTT法檢測L-O2細(xì)胞存活率

取對數(shù)生長期細(xì)胞 L－O2經(jīng)胰酶消化后，用RPMI 1640培養(yǎng)液吹打配成細(xì)胞1×108L－1懸液，加入 96 孔培養(yǎng)板，每孔 100 μl，在 5%CO2，37℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。待細(xì)胞完全貼壁后，分別加入6種人參皂苷 100 μl，終濃度分別為 0.16，0.32，0.64和1.28 g·L－1，每組 8 孔;正常對照孔(含細(xì)胞 100 μl)加入含0.1%DMSO 的無血清培養(yǎng)液100 μl;空白對照孔(不含細(xì)胞)加入等量的含人參皂苷無血清培養(yǎng)液，用于MTT測定調(diào)零。培養(yǎng)箱中孵育48 h后，加入 20 μl MTT 5 g·L－1，繼續(xù)培養(yǎng) 4 h，去上清液，加入DMSO 150 μl，在搖床上振動(dòng)搖勻，在酶標(biāo)儀570 nm波長下測得各孔吸光度(absorbance，A)值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。按下式計(jì)算肝細(xì)胞的存活率。存活率(%)=(實(shí)驗(yàn)組A570nm－正常對照組A570nm)/正常對照組A570nm×100%。

1.7 選擇損傷人胚肝細(xì)胞L-O2乙醇濃度

在96孔培養(yǎng)板中加入1×108L－1L－O2細(xì)胞懸液，每孔100 μl。待細(xì)胞完全貼壁后，實(shí)驗(yàn)孔分別加入100 μl乙醇溶液，終濃度分別為 25，50，75，100，200，400和 800 mmol·L－1，正常對照孔加入含0.1%DMSO 的無血清培養(yǎng)液100 μl，空白對照孔加入等量的含人參皂苷無血清培養(yǎng)液。每組8孔。培養(yǎng)箱中孵育48 h后，按1.6方法測定各孔A值。按下式計(jì)算對肝細(xì)胞的抑制率。抑制率(%)=(正常對照組A570nm－實(shí)驗(yàn)組A570nm)/正常對照組A570nm×100%，以確定損傷L－O2細(xì)胞的乙醇濃度。

1.8 乙醇損傷的人胚肝細(xì)胞L-O2存活的測定

在96孔培養(yǎng)板中加入L－O2細(xì)胞1×108L－1懸液100 μl。待細(xì)胞完全貼壁后，實(shí)驗(yàn)孔加入50 μl乙醇溶液，終濃度為 200 mmol·L－1，同時(shí)加入 50 μl竹節(jié)人參皂苷樣品液，終濃度分別為0.16，0.32，0.64 和1.28 g·L－1，每個(gè)濃度設(shè) 8 個(gè)復(fù)孔，并設(shè)正常對照組(細(xì)胞，未加乙醇)、乙醇損傷模型組(細(xì)胞，加乙醇，不加藥物)和空白對照孔(不含細(xì)胞，用于MTT測定調(diào)零)。培養(yǎng)箱孵育48 h，按1.6方法測定各孔A值。按1.7方法計(jì)算對肝細(xì)胞的抑制率。

1.9 肝細(xì)胞 L-O2 MDA含量、SOD活性和GSH-Px活性的測定

取對數(shù)生長期的細(xì)胞經(jīng)胰酶消化后，分別用RPMI 1640培養(yǎng)液吹打制成細(xì)胞1×109L－1懸液，分別加入24孔培養(yǎng)板，在5%CO2，37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h，待細(xì)胞完全貼壁后，按1.8方法加入乙醇終濃度200 mmol·L－1和 Rg10.16，Rf 0.64 和 Re 1.28 g·L－1，每個(gè)濃度設(shè)4個(gè)復(fù)孔，并設(shè)正常對照組(細(xì)胞未加乙醇)和乙醇損傷模型組(細(xì)胞加乙醇，不加藥物)。培養(yǎng)箱孵育48 h后收集細(xì)胞，用生理鹽水配置成相同細(xì)胞濃度，超聲波破碎后，按MDA，SOD和GSH－Px測定試劑盒方法測定MDA含量、SOD活性和GSH－Px活性。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 竹節(jié)人參皂苷的組成和結(jié)構(gòu)鑒定

由圖1所示，從人工種植的竹節(jié)人參中分離獲得6個(gè)皂苷組分，通過標(biāo)準(zhǔn)品比對，結(jié)合高效液相色譜－電噴霧電離－質(zhì)譜(high performance liquid chromatography－electrospray ionization－mass spectroscope，HPLC－ESI－MS)分析，認(rèn)為分別是 Rg1，Re，Rf，F(xiàn)3，Rg2和Rd，其分子結(jié)構(gòu)圖及基團(tuán)見圖2和表1，ESI－MS和相應(yīng)的碰撞誘導(dǎo)解離(collision induced dissociation，CID)數(shù)據(jù)見表 2，其中 ESI－MS－CID 圖譜以Re為例(圖3)。

利用四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜分析(以人參皂苷Re為例)，在ESI/MS一級(jí)質(zhì)譜檢測中，加合離子

圖1 高效液相色譜-電噴霧電離-質(zhì)譜分析竹節(jié)人參皂苷粗提物.峰1:Rg1;峰2:Re;峰3:Rf;峰4:F3;峰5:Rg2;峰6:Rd.Fig.1 High performance liquid chromatography-electrospray ionization-mass spectroscope profile of saponins from P.japonicus.

圖2 竹節(jié)人參皂苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)式.R1，R2和R3見表1.Fig.2 Chemical structures of saponins from P.japonicus.

［M－H］－為人參皂苷－氫離子、［M+AcO］－為人參皂苷+醋酸根，即m/z 945，1005.5分別代表Re的945［M－H］－和 1005.5［M+AcO］－;在(－)－ESI/MS 二級(jí)質(zhì)譜檢測中，負(fù)離子CID產(chǎn)生系列脫糖碎片離子，m/z 945，799，783，637和475分別代表 Re的945［M－H］－，799［M－Rha－H］－，783［M－Glc－H］－，637［M－Glc－Rha－H］－和 475 ［M－2Glc－Rha－H］。

表1 竹節(jié)人參皂苷結(jié)構(gòu)式基團(tuán)Tab.1 Structural information on saponins from P.japonicus

表2 電噴霧電離-質(zhì)譜(ESI-MS)和碰撞誘導(dǎo)解離(CID)竹節(jié)人參皂苷分析結(jié)構(gòu)Tab.2 Electrospray ionization-mass spectroscope(ESI-MS)and corresponding collision induced dissociation(CID)data in the negative ion mode of saponins from P.japonicus

圖3 人參皂苷Re ESI-MS圖譜(A)和CID圖譜(B).Fig.3 ESI-MS spectrum(A)and CID spectrum(B)of saponin Re from P.japonicus obtained in the negative ion mode.

2.2 竹節(jié)人參皂苷對正常人胚肝細(xì)胞L-O2增殖的影響

由圖4可知，不同竹節(jié)人參皂苷單體與細(xì)胞L－O2共孵育48 h，其對正常L－O2細(xì)胞增殖的影響明顯不同，其中Rg1和Re表現(xiàn)出明顯的促肝細(xì)胞L－O2增殖的作用(P ＜0.05，P ＜0.01);Rf濃度在0.16 ～0.64 g·L－1時(shí)具有促肝細(xì)胞 L－O2 增殖的作用，其中 Rf 0.64 g·L－1組細(xì)胞增殖率達(dá) 28.5%(P＜0.01)，但隨著濃度的升高則表現(xiàn)出一定的抑制作用(P ＜0.05);Rd在濃度高于0.16 g·L－1時(shí)，具有明顯的抑制肝細(xì)胞L－O2增殖的作用，Rd 0.16 g·L－1時(shí)抑制率高達(dá) 49.7%(P ＜ 0.01);F3＞ 0.64 g·L－1時(shí)則顯著抑制細(xì)胞 L－O2 生長(P ＜ 0.01)，F(xiàn)30.64 g·L－1時(shí)抑制率達(dá) 31.1%;Rg20.16 ～ 1.28 g·L－1對肝細(xì)胞 L－O2 則無明顯作用。

圖4 竹節(jié)人參皂苷對正常人胚肝細(xì)胞L－O2增殖的影響.于對數(shù)生長期的人胚肝細(xì)胞分別加入不同濃度的人參皂苷，正常對照孔加入等量含0.1%DMSO的無血清培養(yǎng)液，培養(yǎng)48 h后用MTT法測定A570 nm.±s，n=8.*P＜0.05，＊＊P＜0.01，與正常對照組(0)比較.Fig.4 Effect of saponins from P.japonicus on normal L-O2 cells.

2.3 竹節(jié)人參皂苷對乙醇損傷肝細(xì)胞的保護(hù)作用

當(dāng)乙醇濃度較低時(shí)(＜50 mmol·L－1)，其對肝細(xì)胞L－O2并不表現(xiàn)出抑制作用，相反可以促進(jìn)細(xì)胞增殖，可能是由于細(xì)胞L－O2以乙醇作為能量從而加速了細(xì)胞增殖;隨著濃度的不斷升高，乙醇對細(xì)胞L－O2表現(xiàn)出明顯的抑制作用，其IC50約為200 mmol·L－1(圖 5)。因此，本研究采用乙醇 200 mmol·L－1制備乙醇損傷細(xì)胞模型。

圖5 乙醇對人胚肝細(xì)胞L-O2的損傷.于對數(shù)生長期的人胚肝細(xì)胞分別加入乙醇50～1600 mmol·L－1，培養(yǎng)48 h.±s，n=8.Fig.5 Injury to L-O2 cells induced by ethanol.

圖6 竹節(jié)人參皂苷對乙醇損傷肝細(xì)胞L-O2的保護(hù)作用.于對數(shù)生長期的人胚肝細(xì)胞分別加入乙醇溶液終濃度為200 mmol·L－1，同時(shí)分別加入終濃度為0.16～1.28 g·L－1竹節(jié)人參皂苷，培養(yǎng)48 h后用MTT法測定 A570 nm.± s，n=8.＊＊P ＜0.01，與正常對照組比較;#P ＜0.05，##P ＜0.01，與乙醇損傷模型組(0)比較.Fig.6 Protective effect of saponins from P.japonicus against ethanol-induced cytotoxicity on L-O2 cells.

由圖6可知，不同竹節(jié)人參皂苷單體對乙醇損傷肝細(xì)胞 L－O2的作用不同，其中在 Rg1和 F30.16 g·L－1時(shí)可顯著降低乙醇對細(xì)胞 L－O2的損傷(P＜0.01)，但隨濃度的增加其保護(hù)作用逐漸降低;Rf ＜0.64 g·L－1時(shí)對乙醇損傷肝細(xì)胞L－O2的保護(hù)作用逐漸增大，但 Rf＞0.64 g·L－1時(shí)則表現(xiàn)出明顯的毒性作用(P ＜0.01);Re 0.16 ～1.28 g·L－1可減輕乙醇對肝細(xì)胞L－O2的抑制，對乙醇損傷肝細(xì)胞L－O2具有明顯的保護(hù)作用(P＜0.01);Rg2對乙醇損傷肝細(xì)胞L－O2無明顯影響;Rd則可增強(qiáng)乙醇對肝細(xì)胞 L－O2的損傷(P ＜0.01)，Rd濃度 ＞0.32 g·L－1時(shí)，可使細(xì)胞 L－O2 幾乎全部死亡。

2.4 竹節(jié)人參皂苷Rg1，Rf和Re對肝細(xì)胞L-O2內(nèi)液MDA含量、SOD和GSH-Px活性的影響

根據(jù)上述結(jié)果篩選出對乙醇損傷肝細(xì)胞具有一定保護(hù)作用的竹節(jié)人參皂苷Rg1，Rf和Re，進(jìn)一步測定其對肝細(xì)胞 L－O2 MDA含量、SOD和 GSH－Px活性的影響，發(fā)現(xiàn) Rg10.16 g·L－1，Re 1.28 g·L－1和 Rf 0.64 g·L－1具有明顯的抗氧化作用，能夠清除肝細(xì)胞內(nèi)乙醇代謝產(chǎn)生的 MDA，增加 SOD和GSH－Px的活性(表5)。

3 討論

肝臟作為體內(nèi)乙醇代謝的最主要器官，主要通過乙醇脫氫酶和微粒體乙醇氧化酶系統(tǒng)進(jìn)行氧化代謝。乙醇在肝細(xì)胞內(nèi)通過細(xì)胞色素P450CYP2E1在鐵離子參與下氧化成為乙醛，同時(shí)產(chǎn)生大量的氧應(yīng)激產(chǎn)物如OH－，O2÷和H2O2等自由基，這些自由基可激活磷脂酶及脂質(zhì)過氧化反應(yīng)來降低膜磷脂，改變其通透性和流動(dòng)性，從而改變與膜結(jié)合的酶、受體和離子通道的微環(huán)境，影響其功能［7－9］。本研究發(fā)現(xiàn)，乙醇與人胚肝細(xì)胞L－O2共孵育，當(dāng)乙醇的濃度較低時(shí)(＜50 mmol·L－1)，其對 L－O2 細(xì)胞存活并不表現(xiàn)出抑制作用，相反可以促進(jìn)細(xì)胞增殖，這可能是由于L－O2細(xì)胞以乙醇作為能量從而加速了細(xì)胞增殖;隨著乙醇濃度的不斷升高，乙醇對 L－O2細(xì)胞存活表現(xiàn)出明顯的抑制作用，推測乙醇可能在代謝過程中產(chǎn)生了大量的氧應(yīng)激產(chǎn)物，從而影響了細(xì)胞的生長和增殖。

表5 竹節(jié)人參皂苷Rg1，Rf和Re對肝細(xì)胞L-O2內(nèi)丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)，谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性的影響Tab.5 Effect of saponins Rg1，Rf and Re from P.japonicus on the malondialdehyde(MDA)level，superoxide dismutase(SOD)and glutathione peroxidase(GSH-Px)activities in ethanol-induced hepatic cells L-O2

有研究表明，一定劑量的竹節(jié)參總皂苷可顯著提高運(yùn)動(dòng)后小鼠肝臟和腦組織中SOD和GSH活性，降低MDA含量，能直接清除自由基，并抑制脂質(zhì)過氧化作用，表明竹節(jié)人參總皂苷能促進(jìn)機(jī)體內(nèi)源性抗氧化物質(zhì)的產(chǎn)生，抑制MDA生成，是具有開發(fā)價(jià)值的天然抗氧化產(chǎn)物［10］。劉紅等［11－13］通過脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物含量、MDA含量、前列腺素E2含量、SOD活性、GSH－Px活性和乳酸脫氫酶活性等指標(biāo)測定，發(fā)現(xiàn)竹節(jié)人參提取物能通過消除和抑制大、小鼠體內(nèi)氧自由基的產(chǎn)生，提高組織的抗氧化能力，對胃、腦和心肌等組織器官缺血再灌注損傷起到保護(hù)作用。

本研究應(yīng)用HPLC－ELSD從竹節(jié)人參總皂苷分離純化獲得了6個(gè)人參皂苷單體，應(yīng)用ESI－MS鑒定其為 Rg1，Re，Rf，F(xiàn)3，Rg2和 Rd;通過不同竹節(jié)人參皂苷單體與正常肝細(xì)胞L－O2共孵育48 h，測定發(fā)現(xiàn)竹節(jié)人參皂苷單體Rg1和Re表現(xiàn)出明顯的促進(jìn)L－O2 細(xì)胞增殖的作用;Rf ＜0.64 g·L－1時(shí)具有促進(jìn)肝細(xì)胞L－O2增殖的作用，隨著濃度的增加表現(xiàn)出一定的毒性作用;在濃度 ＞0.16 g·L－1時(shí)，Rd 具有顯著的抑制 L－O2細(xì)胞增殖的作用，且 Rd 0.16 g·L－1時(shí)抑制率高達(dá)49.7%;F3 在濃度高于 0.64 g·L－1時(shí)則顯著抑制L－O2生長，抑制率達(dá) 43.3%;Rg20.16 ～1.28 g·L－1對肝細(xì)胞 L－O2 則無明顯作用。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)，Re對乙醇損傷的L－O2細(xì)胞具有明顯的保護(hù)作用;Rf＜0.64 g·L－1時(shí)對乙醇損傷的L－O2 細(xì)胞具有明顯的保護(hù)作用，但 Rf＞0.64 g·L－1時(shí)則表現(xiàn)出明顯的毒性作用;在 Rg1和 F30.16 g·L－1時(shí)可降低乙醇對肝細(xì)胞 L－O2損傷，但隨著劑量增加則表現(xiàn)出一定的毒性;Rg2對乙醇損傷的肝細(xì)胞L－O2無明顯保護(hù)作用，但亦未表現(xiàn)出明顯的毒性作用;Rd則可加強(qiáng)乙醇對L－O2細(xì)胞的損傷，在濃度大于0.32 g·L－1時(shí)，可使 L－O2 細(xì)胞幾乎全部死亡。分析肝細(xì)胞內(nèi)液相關(guān)生化指標(biāo)MDA，SOD和GSH－Px發(fā)現(xiàn)，Rg1，Rf和 Re具有明顯的抗氧化性能，能夠清除肝細(xì)胞內(nèi)乙醇代謝產(chǎn)生的MDA，提高抗氧化酶SOD和GSH－Px的活性，這可能是其保護(hù)乙醇性L－O2細(xì)胞損傷的一個(gè)重要原因。不同人參皂苷單體對乙醇損傷肝細(xì)胞的保護(hù)作用有待進(jìn)一步研究。

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