運(yùn)動(dòng)與復(fù)方丹參合劑聯(lián)合應(yīng)用對(duì)去卵巢大鼠骨體積和骨量的影響

陳鴻生 宋冰 張兆強(qiáng)

1 廣東醫(yī)學(xué)院體育部（廣東 湛江 524023） 2 湛江師范學(xué)院基礎(chǔ)教育學(xué)院 3 廣東醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室

補(bǔ)充雌激素是防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的主要措施之一，但基于雌激素對(duì)心血管系統(tǒng)及乳腺、子宮的毒副作用，在臨床使用中具有一定的局限性。植物性雌激素以其對(duì)子宮乳腺相對(duì)較小的副作用［1，2］，在絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的防治中逐漸受到人們的關(guān)注。但一般植物中雌激素的含量較低，服用劑量和療效需進(jìn)一步研究，通過聯(lián)合應(yīng)用其他措施能否加強(qiáng)植物性雌激素的療效值得探討。運(yùn)動(dòng)對(duì)骨質(zhì)疏松的防治作用已得到公認(rèn)。丹參中所含的丹參酮有雌激素活性。本研究用去卵巢的方法建立大鼠骨質(zhì)疏松模型，用丹參配以淫羊藿、牡蠣等制成復(fù)方丹參合劑，觀察運(yùn)動(dòng)與復(fù)方丹參合劑聯(lián)合應(yīng)用對(duì)去卵巢大鼠骨體積和骨量的影響，以了解運(yùn)動(dòng)能否加強(qiáng)復(fù)方丹參合劑的作用，從而為骨質(zhì)疏松癥防治措施的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

健康4月齡Sprague-Dawley（SD）雌性大鼠48只（廣東醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證書編號(hào)：粵檢證字2002A013號(hào)），體重325±15 g，動(dòng)物編號(hào)，采用抽簽法隨機(jī)分成6組：正常對(duì)照組、假去卵巢組、去卵巢組、去卵巢＋復(fù)方丹參合劑組、去卵巢＋運(yùn)動(dòng)組、去卵巢＋復(fù)方丹參合劑＋運(yùn)動(dòng)組，每組8只。實(shí)驗(yàn)期間，各組大鼠自由攝食標(biāo)準(zhǔn)固體飼料（廣東省衛(wèi)生廳南海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心生產(chǎn)），自由飲水。各組大鼠照明、通風(fēng)、溫度、濕度等飼養(yǎng)環(huán)境條件相同。

1.2 去卵巢動(dòng)物模型的建立

去卵巢組、去卵巢＋復(fù)方丹參合劑組、去卵巢＋運(yùn)動(dòng)組和去卵巢＋復(fù)方丹參合劑＋運(yùn)動(dòng)組大鼠用10 g/L戊巴比妥鈉溶液腹腔麻醉（3.0 ml/kg體重），無菌條件下，經(jīng)腹部正中線切口，切除雙側(cè)卵巢。切下的卵巢經(jīng)組織學(xué)鑒定確認(rèn)。假去卵巢組手術(shù)過程及操作與上述各組相同，但不切除卵巢，只切除腹腔內(nèi)一小塊脂肪組織，經(jīng)組織學(xué)鑒定確認(rèn)。

1.3 動(dòng)物給藥

去卵巢＋復(fù)方丹參合劑組和去卵巢＋復(fù)方丹參合劑＋運(yùn)動(dòng)組大鼠給予復(fù)方丹參合劑溶液灌胃。復(fù)方丹參合劑由丹參、淫羊藿、牡蠣等多種藥物的醚和水提取物混合制成。將復(fù)方丹參合劑原液用蒸餾水稀釋4倍后，按10 ml/kg體重的劑量于去卵巢手術(shù)后第2天開始灌胃，每天1次，持續(xù)11周。

1.4 動(dòng)物運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練

去卵巢＋運(yùn)動(dòng)組和去卵巢＋復(fù)方丹參合劑＋運(yùn)動(dòng)組于去卵巢術(shù)后第7天開始，在YD-1型大鼠專用跑臺(tái)［3］上進(jìn)行中等強(qiáng)度［4］運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練，每周5天，每天45 min，速度16 m/min，跑道傾角0，持續(xù)10周。

1.5 標(biāo)本收集與測(cè)定

各組大鼠分別于實(shí)驗(yàn)后第11周末動(dòng)脈放血處死，取左股骨，剝凈軟組織，測(cè)量以下指標(biāo)：

（1）骨直徑：在量取左股骨的長(zhǎng)度后，分別于右股骨的近端1/3點(diǎn)、中點(diǎn)、遠(yuǎn)端1/3點(diǎn)，用游標(biāo)卡尺量取其最大外徑及最小外徑，將6個(gè)數(shù)值相加后平均，作為骨直徑的數(shù)值。

（2）骨體積：根據(jù)阿基米德（Archimedes）原理，浸沒在液體中的不規(guī)則物體的體積等于其排開液體的體積。將左股骨置于裝有蒸餾水的量筒中，并使其完全浸沒，通過量筒中液體所示刻度的前后變化測(cè)量右股骨的體積（cm3）。

（3）骨濕重：左股骨剝凈軟組織后，即置于1/100000分析天平上稱重。

（4）骨干重：左股骨稱濕重后置烤箱中，于110oC溫度下烤48 h至恒重，于1/100000分析天平上稱骨干重。

（5）骨灰重：左股骨稱干重后將其炭化，后在箱式電阻爐（SX 2-4-10型）中700℃ 6 h使其灰化，用1/100000分析天平稱灰重。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。各組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多個(gè)均數(shù)間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA），P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

表1顯示，去卵巢組大鼠骨直徑、骨體積、骨濕重、骨干重、骨灰重等均較假去卵巢組顯著降低（P < 0.01）。假去卵巢組大鼠各項(xiàng)指標(biāo)與正常對(duì)照組比較均無顯著性差異（P > 0.05）。去卵巢＋復(fù)方丹參合劑組大鼠骨直徑、骨體積、骨濕重、骨干重、骨灰重等較去卵巢組均顯著增加（P < 0.01），但仍顯著低于假去卵巢組（P < 0.01）。去卵巢＋運(yùn)動(dòng)組大鼠骨直徑、骨體積、骨濕重、骨干重、骨灰重等均較去卵巢組顯著增加（P < 0.01），但仍顯著低于假去卵巢組（P < 0.01）。去卵巢＋復(fù)方丹參合劑＋運(yùn)動(dòng)組大鼠骨直徑、骨體積、骨濕重、骨干重、骨灰重等均較去卵巢＋復(fù)方丹參合劑組和去卵巢＋運(yùn)動(dòng)組顯著增加（P < 0.01）。去卵巢＋復(fù)方丹參合劑＋運(yùn)動(dòng)組大鼠骨直徑、骨體積、骨濕重、骨干重、骨灰重等與假去卵巢組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P> 0.05）。

表1 各組大鼠骨體積和骨量比較

3 討論

去卵巢大鼠模型是一種高轉(zhuǎn)換型骨質(zhì)疏松模型，已被公認(rèn)為“金標(biāo)準(zhǔn)”模型。在本實(shí)驗(yàn)中，去卵巢組與假去卵巢組大鼠比較，骨直徑、骨體積、骨濕重、骨干重、骨灰重等指標(biāo)均顯著降低，說明去卵巢可使大鼠骨體積和骨量下降。假去卵巢組大鼠與正常對(duì)照組大鼠比較，各項(xiàng)指標(biāo)均無顯著性差異，說明手術(shù)本身對(duì)大鼠骨體積和骨量無明顯影響，也說明去卵巢組大鼠與假去卵巢組大鼠各項(xiàng)指標(biāo)的差異是切除卵巢引起的。

復(fù)方丹參合劑由丹參、淫羊藿、牡蠣等多種藥物的醚和水提取物混合制成?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》認(rèn)為牡蠣“久服強(qiáng)骨節(jié)，……”?！逗Ｋ幈静荨氛J(rèn)為牡蠣“久服補(bǔ)腎正氣，……”。丹參為中醫(yī)活血化瘀要藥。丹參中含有的丹參酮有雌激素活性，對(duì)免疫功能有促進(jìn)作用。淫羊藿有雄激素樣作用，含微量元素鋅、錳、鐵等，能促進(jìn)垂體分泌生長(zhǎng)激素。牡蠣殼含80%～95%的鈣鹽（碳酸鈣、磷酸鈣、硫酸鈣）和鎂、鐵、硅、鋁等元素［5］。去卵巢大鼠給予復(fù)方丹參合劑溶液灌胃后，對(duì)由于去卵巢所引起的大鼠骨礦鹽丟失和骨元素代謝紊亂有改善作用，但其作用與劑量有關(guān)，小劑量組效果并不理想［6，7］。本研究觀察到，去卵巢大鼠給予復(fù)方丹參合劑溶液灌胃后，其骨直徑、骨體積、骨濕重、骨干重、骨灰重等指標(biāo)均較去卵巢組顯著增加，但仍顯著低于假去卵巢組，說明復(fù)方丹參合劑對(duì)去卵巢大鼠骨體積和骨量雖有一定改善作用，但效果不甚理想，與上述文獻(xiàn)報(bào)道相似。

運(yùn)動(dòng)對(duì)骨代謝的影響及其在骨質(zhì)疏松癥中的防治作用已受到眾多關(guān)注。單純運(yùn)動(dòng)或運(yùn)動(dòng)和雌激素聯(lián)合應(yīng)用可改善去卵巢大鼠骨生物力學(xué)性能［8］，增加去卵巢大鼠股骨骨密度，提高骨硬度和增強(qiáng)骨的抵抗變形能力［9］。Tromp 等［10］和 Renno 等［11］的研究證實(shí)，機(jī)械負(fù)荷或運(yùn)動(dòng)能使去卵巢大鼠骨量和骨密度增加。適宜強(qiáng)度游泳運(yùn)動(dòng)對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育期大鼠骨發(fā)育、骨組織形態(tài)和結(jié)構(gòu)力學(xué)特性有促進(jìn)作用［12，13］。跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)能通過刺激骨形成、抑制骨吸收而促進(jìn)生長(zhǎng)期大鼠脛骨骨量積累［14］。Kemmler等［15］和 Engelke等［16］研究發(fā)現(xiàn)，運(yùn)動(dòng)能抑制絕經(jīng)后婦女受力部位骨密度下降，增加骨直徑和骨礦物質(zhì)含量。運(yùn)動(dòng)可提高青春前期和青春期受試者的骨量［17］。本研究結(jié)果顯示，去卵巢大鼠給予中等強(qiáng)度的運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練后，其骨直徑、骨體積、骨濕重、骨干重、骨灰重等指標(biāo)均較去卵巢組顯著增加，但仍顯著低于假去卵巢組，說明運(yùn)動(dòng)雖然對(duì)改善去卵巢大鼠骨體積和骨量有一定作用，但效果還不甚理想。

前已述及，單純使用復(fù)方丹參合劑或給予運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對(duì)改善去卵巢大鼠骨體積和骨量有效果但均不甚理想。本研究發(fā)現(xiàn)，去卵巢＋復(fù)方丹參合劑＋運(yùn)動(dòng)組大鼠骨直徑、骨體積、骨濕重、骨干重、骨灰重等指標(biāo)均較單純使用復(fù)方丹參合劑組或單純給予運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組顯著增加，說明運(yùn)動(dòng)與復(fù)方丹參合劑聯(lián)合應(yīng)用對(duì)改善去卵巢大鼠骨體積和骨量的作用優(yōu)于單純使用復(fù)方丹參合劑或單純給予運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練，表明運(yùn)動(dòng)和復(fù)方丹參合劑對(duì)去卵巢大鼠骨體積和骨量的改善作用有協(xié)同效應(yīng)。去卵巢組大鼠采用中等強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練與復(fù)方丹參合劑聯(lián)合干預(yù)后，其骨直徑、骨體積、骨濕重、骨干重、骨灰重等與假去卵巢組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明大鼠骨體積和骨量基本上恢復(fù)至對(duì)照水平。

綜上所述，運(yùn)動(dòng)對(duì)復(fù)方丹參合劑改善去卵巢大鼠骨體積和骨量的效應(yīng)有加強(qiáng)作用。臨床上使用復(fù)方丹參合劑治療骨質(zhì)疏松癥時(shí)，可考慮聯(lián)合應(yīng)用適量運(yùn)動(dòng)，以增強(qiáng)療效。

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