氯霉素-羥丙基-β-環(huán)糊精滴眼液抑菌實(shí)驗(yàn)研究

裴小捷，凌沛學(xué)，王鳳山

(1.山東大學(xué) 藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250012;2.山東省生物藥物研究院，山東 濟(jì)南 250101)

氯霉素滴眼液是治療敏感細(xì)菌引起的結(jié)膜炎、角膜炎、沙眼等外眼感染的首選藥[1]。但氯霉素對溫度具有較高的敏感性，溫度升高易引起氯霉素水解生成氯霉素二醇物，從而造成本品含量減少、藥效降低。為此將其制成環(huán)糊精包合物，改善藥物的溶解度與穩(wěn)定性[2]。本實(shí)驗(yàn)探討了氯霉素-羥丙基-β-環(huán)糊精滴眼液與其他處方氯霉素滴眼液對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌抑菌作用的差別。

1 材料

氯霉素-玻璃酸鈉滴眼液(山東博士倫福瑞達(dá)制藥有限公司);氯霉素滴眼液(滄州光明藥業(yè)有限公司)。

金黃色葡萄球菌(ATCC 6538)、大腸埃希菌(ATCC 8099)(山東省疾病預(yù)防控制中心菌種室)。

2 方法

2.1 供試液的制備

取氯霉素 0.25 g，羥丙基-β-環(huán)糊精 6.0 g，配以輔料依地酸二鈉、玻璃酸鈉、苯扎溴銨、硼酸、硼砂，加注射用水至100 mL制成氯霉素-羥丙基-β-環(huán)糊精滴眼液。依據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(NCCLS)標(biāo)準(zhǔn)，將3組滴眼液調(diào)整為每20 μL含藥量為 30 μg。

2.2 細(xì)菌懸液的制備[3]

取金黃色葡萄球菌(ATCC 6538)、大腸埃希菌(ATCC 8099)分別接種于營養(yǎng)瓊脂斜面，置36℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)18 h后取出，吸取稀釋液5 mL加入斜面試管內(nèi)，反復(fù)吹吸，洗下菌苔后吸取菌懸液至另一無菌試管，反復(fù)吹打均勻[4]。然后將菌懸液按嚴(yán)格無菌操作程序進(jìn)行 10－1，10－2，10－3……倍比稀釋，每一稀釋級接種2個平皿，分別吸取1.0 mL加入無菌平皿內(nèi)，向每個平皿傾倒40～45℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基15～20 mL，輕輕振搖使供試液與培養(yǎng)基充分混合均勻，待瓊脂凝固后，置于36℃培養(yǎng)箱內(nèi)倒置培養(yǎng)24 h，計數(shù)，以菌落數(shù)50～100 cfu的平板為準(zhǔn)，每個稀釋級2個平板生長菌落數(shù)平均值作為結(jié)果，使菌懸液的含菌量為5×105～5×106cfu/mL。

2.3 試驗(yàn)菌的接種

制備好的菌懸液在15 min內(nèi)使用，用無菌棉拭子蘸取濃度為5×105～5×106cfu/mL試驗(yàn)菌懸液，在管壁上旋轉(zhuǎn)擠壓幾次，去掉過多菌液，用拭子涂布整個營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板表面，每涂抹1次，將平板轉(zhuǎn)動60°，涂布3次，最后將棉拭子繞平板邊緣涂抹1周，保證涂布均勻，置室溫干燥5 min。

2.4 抑菌片的制備[3]

直徑6 mm的濾紙片，經(jīng)121℃ 20 min高壓滅菌后，置120℃干燥2 h，備用。取處理好的濾紙片放入潔凈平皿內(nèi)，每個濾紙片滴加供試液20 μL(含藥量為30 μg)為試驗(yàn)樣片;陰性對照樣片滴加生理鹽水20 μL，置無菌室晾干后在有干燥劑的容器內(nèi)低溫(－10℃以下)保存，少量放4℃?zhèn)溆谩?/p>

2.5 抑菌劑樣片貼放

待平板上的水分被瓊脂完全吸收后再貼紙片。每個染菌平板貼放3片，陰性對照(1片)放在平皿中心，共4片，紙片貼好后須在15 min內(nèi)放36℃生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)。18～24 h后讀取結(jié)果，選均勻而完全無菌生長的抑菌環(huán)測量，抑菌環(huán)的邊緣以肉眼見不到細(xì)菌明顯生長為限。有的菌株可出現(xiàn)蔓延生長，進(jìn)入抑菌環(huán)，這都不作為抑菌環(huán)的邊緣。用數(shù)顯游標(biāo)卡尺測量抑菌環(huán)的直徑(包括貼片)，并記錄測量數(shù)據(jù)。每次實(shí)驗(yàn)每個供試液組分別作3個平板。

2.6 判定標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)NCCLS標(biāo)準(zhǔn)，對采集的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，陰性對照組應(yīng)無抑菌環(huán)產(chǎn)生，否則試驗(yàn)無效[5]。

2.7 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包，行×列表的χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異有顯著性意義。

3 結(jié)果

3.1 金黃色葡萄球菌為試驗(yàn)菌

3組滴眼液做抑菌環(huán)實(shí)驗(yàn)，每個滴眼液組重復(fù)實(shí)驗(yàn)90次，結(jié)果見表1。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，各組間無顯著差異(P ＞0.05)。

表1 3組滴眼液對金黃色葡萄球菌的抑菌作用Tab.1 The bacteriostatic action of three different eye drops on Staphylococcus aureus

3.2 大腸埃希菌為試驗(yàn)菌

3組滴眼液做抑菌環(huán)實(shí)驗(yàn)，每個滴眼液組重復(fù)實(shí)驗(yàn)90次，結(jié)果見表2。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，各組間無顯著差異(P ＞0.05)。

表2 3組滴眼液對大腸埃希菌的抑菌作用Tab.2 The bacteriostatic action of three different eye drops on Escherichia coli

4 討論

氯霉素滴眼液對熱和光敏感。羥丙基-β-環(huán)糊精是一種安全、穩(wěn)定的輔料，對熱、堿和光穩(wěn)定，與難容性藥物包合后能增加藥物溶解度[6]，對角膜刺激性小，適合作眼科藥物增溶劑。目前在眼部給藥中的應(yīng)用已涉及依諾沙星、地塞米松、雙氯芬酸鈉等藥物。

對氯霉素-羥丙基-β-環(huán)糊精滴眼液進(jìn)行了穩(wěn)定性考察，結(jié)果表明，羥丙基-β-環(huán)糊精作為穩(wěn)定劑與氯霉素形成包合物，可以有效地保護(hù)氯霉素結(jié)構(gòu)中的酰胺鍵，從而抑制氯霉素水解，降低二醇物生成。抑菌試驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)過羥丙基-β-環(huán)糊精包裹的氯霉素滴眼液無論是對革蘭陽性菌金黃色葡萄球菌還是對革蘭陰性菌大腸埃希菌均有良好的抑菌效果，且與玻璃酸鈉-氯霉素滴眼液和氯霉素滴眼液的抑菌能力相比無明顯差異。加入羥丙基-β-環(huán)糊精可增加氯霉素滴眼液的穩(wěn)定性且不影響其抑菌能力。

[1]凌沛學(xué).眼科藥物與制劑學(xué)[M].北京:中國輕工業(yè)出版社，2010:16-17，194-195.

[2]郭維兒.β-環(huán)糊精增強(qiáng)氯霉素滴眼液穩(wěn)定性研究[J].西北藥學(xué)雜志，1998，13(3):114.

[3]中華人民共和國衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司.消毒技術(shù)規(guī)范[S].2002.

[4]王桂亭，宋艷艷，王志波，等.大蒜液體外抑菌作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].預(yù)防醫(yī)學(xué)論壇，2006，12(2):131-133.

[5]施光鋒，翁心華，陳為歡，等.5種常用β內(nèi)酰胺類抗生素的體外抗菌活性比較[J].上海醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2000，27(1):61-62.

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