免疫調(diào)節(jié)因子B7-H4及其與婦科腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展

蔣莊亮綜述 王建中審校

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是多因素、多步驟的復(fù)雜過程，腫瘤免疫是其重要因素，而腫瘤細(xì)胞中共同刺激分子B7-CD28家族分子的高表達(dá)可使腫瘤細(xì)胞免于機(jī)體的免疫監(jiān)視。B7-H4是新近發(fā)現(xiàn)的B7-CD28家族新成員，現(xiàn)就B7-H4的發(fā)現(xiàn)、分子結(jié)構(gòu)、功能及其與婦科腫瘤的關(guān)系作一綜述。

1 B7-CD28超家族

共同刺激分子主要包括3個(gè)家族:CD28超家族、TNF-TNFR超家族、B7-CD28超家族。B7-CD28超家族隨新共同刺激分子的發(fā)現(xiàn)家族成員也不斷增加，B7-H4［1］是其中之一，該分子作用T細(xì)胞調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。T細(xì)胞的激活依賴2個(gè)途徑:T細(xì)胞受體介導(dǎo)的信號(hào)和共刺激體信號(hào)［2］。B7-CD28家族成員能提供正性和負(fù)性共同信號(hào)。APC表面的共同刺激分子提供的共同刺激信號(hào)是T細(xì)胞調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的第二信號(hào)。Greenwald等［3］認(rèn)為這些分子向外周組織提供了調(diào)節(jié)T細(xì)胞激活和耐受的新途徑。Files等［1］認(rèn)為它們?cè)谡{(diào)節(jié)抗腫瘤免疫反應(yīng)中T細(xì)胞的抑制和激活起到重要作用。共同刺激分子與淋巴細(xì)胞上的相應(yīng)受體相結(jié)合發(fā)揮它們“同刺激”或“同抑制”的作用。Crispen等［4］認(rèn)為B7-H4或在腫瘤進(jìn)展中使轉(zhuǎn)化癌前細(xì)胞免于細(xì)胞免疫監(jiān)視，從而惡化。上述觀點(diǎn)表明它或是某些腫瘤的標(biāo)記并與腫瘤免疫逃逸有關(guān)，B7-CD28家族可能應(yīng)用于腫瘤的免疫治療［5］。

2 B7-H4結(jié)構(gòu)及功能機(jī)制

2.1 B7-H4分子的發(fā)現(xiàn)及結(jié)構(gòu)

Tringler等［6］將B7-H4初步定性為新基因編碼的膜糖蛋白，通過RT-PCR分析200例組織樣本，發(fā)現(xiàn)B7-H4在乳腺癌和卵巢癌中過表達(dá)，而在正常組織中表達(dá)卻明顯不同;并確定DDO110 與 B7-H4(B7x或 B7S1)同源［6］。這與 Salceda等［7］觀點(diǎn)一致。2003年有文獻(xiàn)報(bào)道［8］發(fā)現(xiàn)B7-H4即 DD-O110。B7-H4可通過抑制T細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子的產(chǎn)生和細(xì)胞周期的進(jìn)程，負(fù)性調(diào)節(jié)T細(xì)胞免疫［5］。

B7-H4屬于B7-CD28共信號(hào)分子家族/免疫球蛋白超家族，含胞內(nèi)區(qū)，胞外區(qū)，跨膜區(qū)［9］。人 B7-H4的 eDNA 約1.8 kb，位于染色體1P11.1，在基因組上跨越66 kb，含有6個(gè)外顯子和5個(gè)內(nèi)含子［10］。有文獻(xiàn)認(rèn)為人染色體20p11.1有一假基因(pseudogene)，可能這個(gè)可變的B7-H4基因組DNA被認(rèn)為是B7-H4的假基因。有文獻(xiàn)報(bào)道B7-H4是GPI偶聯(lián)蛋白，而B7-CD28家族其他分子則為Ι型跨膜糖蛋白，這與很多報(bào)道不符。

2.2 B7-H4的主要功能

根據(jù)T淋巴細(xì)胞雙信號(hào)學(xué)說:至少有2個(gè)信號(hào)參與T淋巴細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)，MHC-肽復(fù)合物提供的特異性信號(hào)和APC細(xì)胞上的共同刺激分子提供的信號(hào)。B7-H4對(duì)T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)至關(guān)重要［5］。APC B7-H4與抗CD3+和 CD8+的刺激下的TCR相結(jié)合發(fā)揮著以下作用:①主要通過抑制CD4+T細(xì)胞使T細(xì)胞的細(xì)胞增殖周期停滯在G0/G1;②抑制抗腫瘤效應(yīng)性細(xì)胞因子的釋放;③抑制了CD8+對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷，盡管B7-H4對(duì)CD8+的抑制不是很明顯［11］。

2.2.1 B7-H4與細(xì)胞因子 Kryczek等［12］認(rèn)為 T細(xì)胞通過APCs產(chǎn)生高水平的白介素-10(IL-10)，阻斷B7-H4，以調(diào)節(jié)T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。體外實(shí)驗(yàn)表明IL-10在T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫抑制中作用次要，而體內(nèi)實(shí)驗(yàn)則說明IL-10在其中的作用是必要的，類似小鼠中的B7-H4的融合蛋白，人類APC B7-H4由IL-10誘導(dǎo)負(fù)性調(diào)節(jié)T細(xì)胞反應(yīng)，以B7-H4為靶點(diǎn)可能是在體內(nèi)恢復(fù)T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)的新策略。CD28作為T細(xì)胞上的1個(gè)主要的共同刺激受體，已被普遍接受［13］。除 TCR外，通過APCs上的CD28的配體與CD28結(jié)合誘導(dǎo)了最佳的T細(xì)胞活化。B7-H4與T細(xì)胞表面的受體(TCR)結(jié)合抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)抑制Th1細(xì)胞來源的細(xì)胞因子白介素-2(IL-2)，白介素-4(IL-4)，IL-10 和IFN-γ 分泌。這與 Sugamata等［14］的觀點(diǎn)一致。同時(shí)IL-10，IL-6的增加可誘導(dǎo)單核細(xì)胞等的APC以自分泌的途徑表達(dá)B7-H4，而GM-CSF(集落刺激因子)，IL-4則抑制APC表達(dá)B7-H4，抑制腫瘤細(xì)胞B7-H4的表達(dá)。此外干擾素(IFN)對(duì)誘導(dǎo)B7-H4的表達(dá)可能有影響。在腫瘤細(xì)胞中還未發(fā)現(xiàn)有IL-4，IL-6，IL-10，GM-CSF調(diào)節(jié)B7-H4的表達(dá)。在正常組織中B7-H4通常檢測(cè)不到，但是炎癥分泌因子包括白介素-6(IL-6)和IL-10在巨噬細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)會(huì)使其上調(diào)［16］?？扇苄訠7-H4抑制同種反應(yīng)性細(xì)胞毒性T細(xì)胞的產(chǎn)生［15］。盡管B7-H4的受體仍未確定，但是Krambeck等［8］認(rèn)為體外用B7-H4轉(zhuǎn)誘導(dǎo)小鼠腫瘤細(xì)胞或B7-H4 Ig蛋白的研究顯示B7-H4可遞呈抑制信號(hào)到T細(xì)胞，從而抑制CD4+和CD8+T細(xì)胞增殖細(xì)胞周期進(jìn)展和IL-2的產(chǎn)生。

2.2.2 B7-H4與中性粒細(xì)胞 Kyung等［11］發(fā)現(xiàn) B7-H4通過抑制中性粒細(xì)胞的生長(zhǎng)來負(fù)性調(diào)節(jié)，此外還抑制源于骨髓的中性粒細(xì)胞祖細(xì)胞Gr-1+CD11b增殖和分化，結(jié)果還顯示B7-H4抑制中性粒細(xì)胞的細(xì)胞周期進(jìn)程，因此B7-H4可解釋這些因子的拮抗作用。這與Zhu等［9］的研究幾乎一致:B7-H4中性粒細(xì)胞對(duì)于感染反應(yīng)是1個(gè)內(nèi)源性負(fù)性調(diào)節(jié)體，還可以提高先天免疫的作用，并對(duì)其操控提供新靶點(diǎn)。

2.2.3 B7-H4與T細(xì)胞 B7-H4與受體結(jié)合后的T細(xì)胞免疫抑制作用即使通過CD28協(xié)同刺激也不能逆轉(zhuǎn)。但也有研究表明可通過外源性的IL-2依賴機(jī)制部分逆轉(zhuǎn)。Choi等［10］研究得出中性化的單克隆抗體(mAb)提高抗原(Ag)特異性的T細(xì)胞反應(yīng)，以阻斷內(nèi)源性的B7-H4，免疫活化細(xì)胞表面上的B7-H4能抑制經(jīng)過Ag刺激的T細(xì)胞增殖。因此可在外周組織負(fù)性調(diào)節(jié)T細(xì)胞免疫。Kryczek等［16］把腫瘤巨噬細(xì)胞中的B7-H4分為B7-H4+和B7-H4-。B7-H4+和B7-H4-都是在劑量依賴途徑上明顯地抑制T細(xì)胞的增殖，前者是后者的2～6倍。有觀點(diǎn)表明腫瘤間質(zhì)巨噬細(xì)胞(TAM)上的B7-H4介導(dǎo)了腫瘤免疫逃逸:巨噬細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞，呈遞腫瘤相關(guān)抗原誘導(dǎo)機(jī)體的免疫應(yīng)答;而也有觀點(diǎn)認(rèn)為TAM參加了腫瘤的發(fā)生發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移。在腫瘤環(huán)境下高濃度IL-6和IL-10的表達(dá)，是因腫瘤T細(xì)胞以巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)IL-6和IL-10產(chǎn)生，因此在卵巢癌中T細(xì)胞和B7-H4+呈正相關(guān)［17］。此外，B7-H4 表達(dá)在突觸細(xì)胞(DC)［3］上，而 DC表面的定向修改可以為T細(xì)胞提供有益信號(hào)。DC-R會(huì)減少B7-1(CD80)等因子的表達(dá)，而B7-H4除外，若下調(diào)共同刺激因子和 MHC，可以減少 GvHD 的發(fā)病率［17］。Krambeck等［4］實(shí)驗(yàn)證明通過阻斷內(nèi)源性的B7-H4可提高同種抗原免疫后小鼠的脾臟細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的活性。Kryczek等［16］對(duì)103例卵巢癌患者研究發(fā)現(xiàn)T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中B7-H4表達(dá)與疾病呈負(fù)相關(guān)。

3 B7-H4與婦科腫瘤

3.1 卵巢癌

Tringler等［18］通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在漿液性卵巢癌，子宮內(nèi)膜樣卵巢癌，透明性細(xì)胞卵巢癌中B7-H4的表達(dá)很高，而在正常組織中表達(dá)呈陰性或極低。有研究發(fā)現(xiàn)，卵巢癌患者(22/26)腹水中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞發(fā)現(xiàn)有大量B7-H4表達(dá)，后續(xù)的大樣本的研究顯示B7-H4在卵巢癌漿液性腺癌中有高表達(dá)，而低度惡性的腫瘤或正常組織B7-H4為低表達(dá)或陰性［19］。大量實(shí)驗(yàn)表明B7-H4在卵巢癌中高表達(dá)，且有可能成為新的標(biāo)志物。這與Choi［10］，Ye 等［20］觀點(diǎn)一致。Kryczek 等［16］指出，卵巢癌中 B7-H4+腫瘤巨噬細(xì)胞形成1種新的抑制性細(xì)胞群，阻斷B7-H4或減少B7-H4陽性的腫瘤巨噬細(xì)胞或?qū)⒊蔀榧訌?qiáng)T細(xì)胞腫瘤免疫的新策略。Simon等［19］通過敏感性雙重單克隆抗體夾心實(shí)驗(yàn)(ELISA)分析了2500例卵巢癌B7-H4蛋白水平的表達(dá)，首次報(bào)道了DD-100(B7-H4)作為1個(gè)新的卵巢癌血清標(biāo)志物。

3.2 子宮內(nèi)膜癌

子宮內(nèi)膜癌早期發(fā)病手術(shù)治療預(yù)后很好，但晚期治療預(yù)后不佳，因此尋找與之相關(guān)的分子靶點(diǎn)顯得極為重要。Miyatake等［21］研究發(fā)現(xiàn)B7-H4廣泛表達(dá)在子宮內(nèi)膜癌組織上，其中腫瘤細(xì)胞高度惡性腫瘤陽性率比低度惡性腫瘤或正常組織要高得多。在正常的、增生、癌的子宮內(nèi)膜組織進(jìn)展中B7-H4染色的比例和強(qiáng)度是漸增的。Galazka等［22］發(fā)現(xiàn)，增加B7-H4陽性巨噬細(xì)胞亞群數(shù)量能抑制T淋巴細(xì)胞中FOXP3+陽性細(xì)胞亞群的數(shù)量，這一發(fā)現(xiàn)證明B7-H4使腫瘤細(xì)胞能夠逃逸腫瘤細(xì)胞免疫的監(jiān)視。因此B7-H4可能成為子宮內(nèi)膜癌治療的新靶點(diǎn)。

3.3 宮頸癌

Hu等［23］經(jīng)ELISA夾心法檢測(cè)50例宮頸癌患者和40例子宮肌瘤患者的血清可溶性B7-H4(sB7-H4)水平，發(fā)現(xiàn)對(duì)照組50例健康者與子宮肌瘤患者血清sB7-H4水平無顯著差異，而宮頸癌患者血清B7-H4水平顯著高于前兩組，因此提示sB7-H4與宮頸癌發(fā)病相關(guān)，或是宮頸癌的1種較好的腫瘤標(biāo)志物。目前B7-H4在宮頸癌中的研究還不是很多。

總之，B7-H4是近年的研究熱點(diǎn)，關(guān)于它的發(fā)現(xiàn)、分子結(jié)構(gòu)、功能及與婦科腫瘤中的關(guān)系都有較多的研究。但B7-H4的受體，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制以及B7-H4在腫瘤免疫中沒明確的問題等都有待進(jìn)一步研究。B7-H4與T細(xì)胞的關(guān)系很可能為腫瘤的免疫治療找到1個(gè)新途徑，B7-H4很可能為其提供1個(gè)新的靶點(diǎn)。

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