78例NSCLC血清VEGF表達(dá)臨床意義分析

劉新姿 錢(qián)曉萍 王朝霞 王科明 劉寶瑞 胡文靜 王立峰 楊陽(yáng) 禹立霞

1.南京醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院腫瘤科，江蘇 南京 210011；2.南京大學(xué)附屬鼓樓醫(yī)院腫瘤中心，江蘇 南京 210008

血管形成在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用，已成為腫瘤治療的新靶點(diǎn)之一。血管形成受血管刺激因子與抑制因子間平衡的調(diào)控，同時(shí)也涉及多種其他因子，如凋亡相關(guān)因子、生長(zhǎng)素、生物酶和黏附因子等[1]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是一種重要的促血管形成因子，是目前已知最有效最特異的因子，它通過(guò)與血管內(nèi)皮細(xì)胞上的相應(yīng)受體結(jié)合，能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)，同時(shí)可增強(qiáng)血管通透性使內(nèi)皮細(xì)胞遷移，抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，激活蛋白酶致使細(xì)胞外基質(zhì)降解，有利于新生血管生長(zhǎng)及延伸[2]。近年來(lái)許多學(xué)者應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)NSCLC患者腫瘤組織中的VEGF表達(dá)，發(fā)現(xiàn)VEGF有助于預(yù)測(cè)患者預(yù)后，但是目前關(guān)于NSCLC患者血清VEGF變化的研究尚不是很多。筆者采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)了78例非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者化療前血清VEGF水平，并探討了其與療效、預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集筆者所在醫(yī)院腫瘤科2001年12月～2006年1月住院的臨床資料完整的NSCLC患者78例，經(jīng)病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)證實(shí)，均為初治患者。其中男44例，女34例；年齡28～76歲，中位年齡60歲。腺癌50例，鱗癌22例，其他6例（包括腺鱗癌3例，大細(xì)胞癌2例，肉瘤樣癌1例）。依據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟1997年修訂的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，本組患者Ⅰ、Ⅱ期10例，Ⅲ、Ⅳ期67例，分期不明1例。其中遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者包括肺轉(zhuǎn)移12例，骨轉(zhuǎn)移10例，肝轉(zhuǎn)移3例，腦轉(zhuǎn)移5例，肺骨轉(zhuǎn)移5例，腎上腺轉(zhuǎn)移3例，肺腎上腺轉(zhuǎn)移1例，骨腦轉(zhuǎn)移5例，骨腎上腺轉(zhuǎn)移1例，心包轉(zhuǎn)移2例。化療前功能狀態(tài)KPS評(píng)分≥70分，預(yù)計(jì)生存期＞3個(gè)月。所有患者均在化療前抽取靜脈血清標(biāo)本，每份血10 μL。

1.2 治療方案

所有患者均采取新一代含鉑兩藥聯(lián)合方案為主的一線化療，21 d為1個(gè)周期，化療2～6個(gè)周期。NP（蓋諾+順鉑）方案，GP （鍵擇+順鉑）方案，TP（艾素+順鉑）方案，劑量為健擇（GEM）800 mg/m2，d1、d8，順鉑（DDP）60 mg/m2分 5 d 用，蓋諾（NVB）25 mg/m2，d1、d8，艾素（TXL）75 mg/m2，d1、d8。

1.3 檢測(cè)方法

VEGF酶聯(lián)免疫分析試劑盒為美國(guó)LIFEKEY生物醫(yī)學(xué)技術(shù)公司產(chǎn)品。采用ELISA法，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。血清VEGE＞125 pg/mL視為陽(yáng)性，血清VEGF≤125 pg/mL視為陰性。

1.4 療效評(píng)價(jià)

按2000年RECIST實(shí)體瘤標(biāo)準(zhǔn)，分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、穩(wěn)定（SD）和進(jìn)展（PD）。疾病進(jìn)展時(shí)間（TTP）為化療開(kāi)始至疾病進(jìn)展的時(shí)間。CR+ PR計(jì)算總有效率。生存期（OS）為從開(kāi)始化療至死亡或末次隨訪的時(shí)間。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，率的比較采用x2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法檢驗(yàn)，用Kaplan-Meier生存曲線及Log-Rank檢驗(yàn)比較其預(yù)后意義，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 VEGF在NSCLC患者血清中的表達(dá)

78例NSCLC患者血清VEGF水平，其中24例陽(yáng)性，54例陰性，陽(yáng)性率為30.8%。

2.2 NSCLC患者血清VEGF與臨床特征的關(guān)系

經(jīng)x2檢驗(yàn)，VEGF表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否、遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移與否以及腫瘤TNM分期密切相關(guān)（P＜0.05）。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者VEGF陽(yáng)性率（43.9%，18/41）明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（17.6%，6/31）；有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者VEGF陽(yáng)性率（45.8%，22/48）較無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者顯著升高（6.67%，2/37）；TNM分期中Ⅲ、Ⅳ期者VEGF陽(yáng)性率（38.5%）較Ⅰ、Ⅱ期者顯著升高（0.0%），以上均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。NSCLC患者血清VEGF與患者的性別、年齡無(wú)關(guān)（P ＞0.05）。VEGF在腺癌中的陽(yáng)性率（34%）高于鱗癌（18.2%），但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 肺癌VEGF與臨床特征間的關(guān)系

2.3 NSCLC患者血清VEGF與化療療效及生存期的關(guān)系

78例患者共接受化療248個(gè)周期，均可評(píng)價(jià)療效，無(wú)一例完全緩解，PR 20例，SD 40例，PD 18例。VEGF陽(yáng)性者的化療有效率為4.2%（1/24），陰性患者為35.2%（19/54），后者顯著高于前者（P＜0.05）。見(jiàn)表2。隨訪至2006年9月30日，13例患者失訪，其中5例血清VEGF陽(yáng)性，8例VEGF陰性。從Kaplan-Meier生存曲線看，VEGF表達(dá)陽(yáng)性組的生存曲線高于VEGF陰性組，但Log-Rank檢驗(yàn)，兩者總體生存未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著性差異（P=0.0741，圖1）。VEGF升高患者的生存期為2～57個(gè)月，中位生存期20個(gè)月，95%CI為（8.8～31.2個(gè)月）；1年生存率為63.6%，2年生存率為32.7%，3年生存率為16.4%。VEGF正?；颊叩纳嫫跒?～51個(gè)月，中位生存期36個(gè)月，95%CI為（11.3～60.7個(gè)月）；1年生存率為79.7%，2年生存率為52.1%，3年生存率為44.6%，兩者3年生存率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)。見(jiàn)表3。78例患者有77例統(tǒng)計(jì)了TTP，1例未計(jì)入，為VEGF陽(yáng)性表達(dá)。VEGF高表達(dá)和低表達(dá)患者的中位TTP均為8個(gè)月，95%CI分別為1.6～14.4個(gè)月，4.8～11.2個(gè)月，兩者TTP差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.2802）。見(jiàn)圖2。

以乘積極限法計(jì)算VEGF表達(dá)陽(yáng)性及陰性患者的1年、2年、3年累積生存率及兩組的中位生存期。陰性組累積生存率及中位生存期較陽(yáng)性組為高，提示VEGF為負(fù)性預(yù)后因子。見(jiàn)表3。

表2 NSCLC患者VEGF與化療療效的關(guān)系

表3 NSCLC患者VEGF與生存期的關(guān)系

圖1 VEGF表達(dá)對(duì)NSCLC患者生存曲線的影響

圖2 血清VEGF表達(dá)與TPP分析

3 討論

腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移首先依賴于血管的生成，血管的形成過(guò)程是促進(jìn)因子和抑制因子作用的結(jié)果。VEGF是血管生成過(guò)程最重要的正向調(diào)控因子，與多種腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)[3]。VEGF在許多腫瘤中表達(dá)上調(diào)，導(dǎo)致腫瘤微環(huán)境促血管生成和抑制血管生成因子的失衡，從而促進(jìn)血管化作用和生長(zhǎng)[4-5]。

NSCLC循環(huán)VEGF水平的臨床意義是有爭(zhēng)論的。Jiang等[6-10]報(bào)道，血清VEGF在原發(fā)性NSCLC中表達(dá)增高，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組表達(dá)顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，而且隨著腫瘤分期的進(jìn)展，其水平逐漸增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示與腫瘤進(jìn)展與轉(zhuǎn)移有關(guān)。筆者的研究也支持以上結(jié)果。而另一些研究顯示相反的結(jié)果，70例SCLC或NSCLC患者并未發(fā)現(xiàn)血清VEGF水平與腫瘤分期或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況有顯著相關(guān)性[11-14，21]。

目前還沒(méi)有報(bào)道顯示血清VEGF與NSCLC不同組織類型（鱗癌、腺癌、大細(xì)胞癌）有相關(guān)性[6-8]，支持了筆者的發(fā)現(xiàn)。

筆者的研究結(jié)果表明，VEGF在非小細(xì)胞肺癌患者血清中的表達(dá)與患者的性別、年齡無(wú)關(guān)（P＞0.05），而與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否、遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移與否以及腫瘤的TNM分期密切相關(guān)（P＜0.01）。即隨著臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的進(jìn)展，血清VEGF陽(yáng)性率可出現(xiàn)明顯升高。這一結(jié)果說(shuō)明VEGF在肺癌的生物學(xué)演進(jìn)上扮演了重要角色，是肺癌惡性生物學(xué)行為的重要標(biāo)記。在高度惡性、處于進(jìn)展階段的肺癌中，腫瘤組織增生活躍，分泌大量的VEGF入血，是血清中檢測(cè)到高水平VEGF的重要原因，而VEGF能夠增加內(nèi)皮細(xì)胞磷脂酶C的活性，通過(guò)肌醇酯水解促進(jìn)第2信使產(chǎn)生，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，同時(shí)增殖了的內(nèi)皮細(xì)胞又可分泌多種促腫瘤生長(zhǎng)物質(zhì)，VEGF通過(guò)以上方式與腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移緊密聯(lián)系[15]。筆者認(rèn)為，肺癌患者血清VEGF高表達(dá)，在排除創(chuàng)傷和炎癥的前提下，可能提示腫瘤的活躍生長(zhǎng)及潛在轉(zhuǎn)移。

有報(bào)道，通過(guò)免疫組化方法檢測(cè)NSCLC與正常肺組織的VEGF與微血管密度的表達(dá)，研究發(fā)現(xiàn)兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，NSCLC的微血管密度隨VEGF表達(dá)增強(qiáng)而增多，VEGF表達(dá)與肺癌分化程度、分期和預(yù)后密切相關(guān)，VEGF高表達(dá)者易轉(zhuǎn)移，生存期短，提示VEGF參與肺癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程，其表達(dá)強(qiáng)度可作為判斷預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)[17]。

治療前NSCLC患者血清VEGF的預(yù)后價(jià)值還不十分清楚，仍有爭(zhēng)議。在大多數(shù)研究中，血清VEGF對(duì)生存期無(wú)預(yù)后影響[14，21]。在肺癌中，一些報(bào)道指出血清VEGF高表達(dá)與腫瘤大小以及預(yù)后相關(guān)[9，18-20]。Laack等[7]發(fā)現(xiàn)血清VEGF高水平表達(dá)患者生存期顯著長(zhǎng)于低表達(dá)患者，118例NSCLC患者單因素分析中發(fā)現(xiàn)血清VEGF表達(dá)水平是重要的預(yù)后因子。

筆者的研究結(jié)果顯示，VEGF正?；颊叩纳嫫趦?yōu)于VEGF升高患者，接近統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.0741），可能是由于本研究患者病例較少，可進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行研究。VEGF高表達(dá)和低表達(dá)組的1年、2年生存率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.01），但是從兩者的生存曲線看，VEGF陽(yáng)性組高于陰性組，陽(yáng)性組和陰性組3年生存期差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。以上結(jié)果提示，血清VEGF水平升高晚期NSCLC患者，其生存期縮短，預(yù)后差。將血清VEGF水平作為判斷晚期NSCLC患者預(yù)后，可能具有一定的價(jià)值。

本研究還顯示，78例NSCLC患者經(jīng)新一代療效類似的含鉑方案化療后評(píng)價(jià)療效，PR 20例，SD或PD 58例，有效率為25.6%。VEGF高表達(dá)和低表達(dá)患者的有效率分別為4.17%、35.2%，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），這表明NSCLC患者血清VEGF水平增高與患者的治療反應(yīng)性存在顯著的負(fù)相關(guān)。這些結(jié)果直接或間接的顯示鉑類的治療對(duì)較少產(chǎn)生VEGF的NSCLC是有效的?？傊?，NSCLC患者VEGF低表達(dá)可能預(yù)示對(duì)鉑類反應(yīng)好。

綜上所述，血清VEGF可作為NSCLC患者腫瘤轉(zhuǎn)移、化療敏感性及預(yù)后的一個(gè)良好的預(yù)測(cè)指標(biāo)，且ELISA測(cè)定血清VEGF檢測(cè)方便，既容易又可重復(fù)，價(jià)格便宜，且創(chuàng)傷性達(dá)到最低，臨床應(yīng)用價(jià)值很大。

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