飼料維生素C、維生素E在水產(chǎn)動(dòng)物免疫作用中的研究進(jìn)展

浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 尹 娜 邵慶均

當(dāng)今水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)追求優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)，但在大規(guī)模高密度的養(yǎng)殖生產(chǎn)中往往會(huì)引起魚(yú)體的抗應(yīng)激能力下降，病害增多，成活率下降等問(wèn)題。維生素是魚(yú)體維持正常生命活動(dòng)和生長(zhǎng)所必須的微量營(yíng)養(yǎng)素。大量研究表明，維生素C（VC）和維生素E（VE）是對(duì)魚(yú)類(lèi)免疫系統(tǒng)影響最大的兩種維生素。

1 VC和VE的生理作用及機(jī)制

1.1 VC的生理作用及機(jī)制 VC是魚(yú)和蝦類(lèi)所必需的營(yíng)養(yǎng)成分之一，與激素合成、礦物質(zhì)吸收、新陳代謝有密切關(guān)系，并且能夠增強(qiáng)機(jī)體免疫力、預(yù)防壞血病、保護(hù)微血管、促進(jìn)傷口愈合。VC在甲殼生長(zhǎng)及蛋白質(zhì)代謝中也起重要的作用。

1.1.1 參與體內(nèi)的氧化還原反應(yīng) VC可脫氫成為脫氫抗壞血酸，在魚(yú)體內(nèi)脫氫抗壞血酸很容易被-SH基還原成還原型L-抗壞血酸自成一個(gè)氧化還原體系。Kanagu（2010）等試驗(yàn)表明，VC缺乏將導(dǎo)致新陳代謝紊亂。

1.1.2 免疫增強(qiáng)作用 VC能增強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物的免疫機(jī)能提高抗病力。其機(jī)制是VC對(duì)白細(xì)胞吞噬活性、抗體合成等都有激活作用。艾慶輝（2005）等研究表明，VC在一定范圍內(nèi)對(duì)體液免疫具有促進(jìn)作用，但是過(guò)量或不足都將引起抑制作用。VC還能提高水產(chǎn)動(dòng)物的抗應(yīng)激能力。

1.1.3 參與細(xì)胞間質(zhì)的形成 VC是脯氨酸羥基化酶的輔酶，有利于脯氨酸羥基化酶形成羥脯氨酸。由于羥脯氮酸是膠原蛋白中含量較多的成分，因此VC可促進(jìn)膠原蛋白的合成，有助于促進(jìn)膠原組織如骨、結(jié)締組織、軟骨、殼等細(xì)胞間質(zhì)的形成。Soliman等（1994）的研究證明，當(dāng)魚(yú)蝦攝人VC不足時(shí)，膠原蛋白的合成減少，引起毛細(xì)血管脆性增加，通透性增大，皮下、肌肉、胃腸黏膜出血，表現(xiàn)出壞血病癥狀。

1.1.4 對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的繁育性能的作用 目前VC影響?hù)~(yú)蝦繁殖力的作用機(jī)制尚不是很清楚?？赡苁窃诼焉蛇^(guò)程中或胚胎形成過(guò)程中由親體傳遞給后代然后隨著膠原的形成而消耗掉。

1.1.5 解毒作用 大劑量的VC可緩解鉛、砷、銅、苯及某些細(xì)菌毒素進(jìn)人體內(nèi)造成毒害。其原理是VC是強(qiáng)還原劑。能將體內(nèi)的氧化型谷胱甘肽轉(zhuǎn)變?yōu)檫€原型谷胱甘肽，還原型谷胱甘肽與重金屬離子結(jié)合而排出體外，保護(hù)了體內(nèi)活性琉基而解毒。

1.1.6 參加體內(nèi)其他代謝反應(yīng) VC參與葉酸轉(zhuǎn)變?yōu)樗臍淙~酸、酪氨酸代謝過(guò)程及腎上腺皮質(zhì)激素合成過(guò)程。VC是維持體內(nèi)許多羥化酶活性所必需的，并且參與脯氨酸、苯丙氨酸和賴(lài)氨酸等的羥基化反應(yīng)。此外，VC還能促進(jìn)腸道內(nèi)鐵的吸收。VC在消化道內(nèi)能還原高價(jià)鐵 （Fe3+）為低價(jià)鐵（Fe2+），維持其還原狀態(tài)，促進(jìn)腸道對(duì)鐵的吸收和鐵在魚(yú)體內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)和利用。VC還能與VE、Se等營(yíng)養(yǎng)成分協(xié)同作用，減輕水產(chǎn)動(dòng)物體脂的過(guò)氧化作用。

1.2 VE的生理作用及機(jī)制 VE是水產(chǎn)動(dòng)物重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，其主要功能是消除體內(nèi)多余的自由基，保護(hù)脂溶性細(xì)胞膜以及不飽和脂肪酸不被氧化，通過(guò)促進(jìn)和調(diào)理免疫細(xì)胞的功能來(lái)提高動(dòng)物體的免疫力。

1.2.1 抗氧化作用 VE的主要功能是非特異性的斷鏈抗氧化。VE作為斷鏈抗氧化劑可阻止自由基的反應(yīng)，從而避免氧自由基對(duì)細(xì)胞膜磷脂和血漿脂蛋白的攻擊。因此VE能夠保證細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能的完整性，同時(shí)也可以緩解氧自由基造成的應(yīng)激。王建梅等（2003）報(bào)道，VE是機(jī)體重要的抗氧化物質(zhì)。南美白對(duì)蝦餌料中VE的添加量為100 mg／kg時(shí)，能使蝦肝胰腺內(nèi)的VC和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）的含量顯著增加，發(fā)揮正常的抗氧化作用，增強(qiáng)南美白對(duì)蝦對(duì)鹽度突變的耐受力。

1.2.2 維持生育功能 VE具有調(diào)節(jié)動(dòng)物機(jī)體新陳代謝以及性腺中類(lèi)固醇類(lèi)激素生物合成的作用，有利于促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物的性腺發(fā)育。VE可以通過(guò)垂體前葉分泌促性腺激素調(diào)節(jié)性機(jī)能，增加卵巢機(jī)能，使卵泡黃體細(xì)胞增加，并且通過(guò)預(yù)防精子被氧化而直接對(duì)精子起保護(hù)作用。VE與動(dòng)物生殖腺發(fā)育關(guān)系最密切，對(duì)魚(yú)類(lèi)的產(chǎn)卵生理及卵質(zhì)等起著重要的作用。Lee和Shiau（2004）用添加不同劑量VC和VE的飼料投喂黃河鱸的研究表明，VE能夠改善黃河鱸雄魚(yú)精子的質(zhì)量。張國(guó)輝等（2006）研究表明，當(dāng)飼料中VE添加量達(dá)到200 mg／kg時(shí)，雌鱔的卵巢發(fā)育較好，性腺系數(shù)、產(chǎn)卵力和孵化率較高。雌鱔的繁殖性能明顯改善。

1.2.3 調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng) VE對(duì)魚(yú)類(lèi)免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用是近年來(lái)研究的熱點(diǎn)。VE對(duì)不同抗原介導(dǎo)的體液免疫有選擇性影響，研究表明這種影響具有劑量依賴(lài)性。Trushenski和Kohler（2007）的試驗(yàn)證明，VE可以影響免疫系統(tǒng)功能。一方面，VE可阻止過(guò)氧化反應(yīng)和自由基對(duì)淋巴網(wǎng)狀細(xì)胞的破壞作用，通過(guò)阻止花生四烯酸的氧化反應(yīng)影響氧化磷酸化關(guān)鍵酶以及通過(guò)改變淋巴細(xì)胞膜受體功能來(lái)抑制前列腺素合成，增強(qiáng)體液免疫功能；另一方面，VE能夠加強(qiáng)細(xì)胞免疫，提高細(xì)胞免疫能力增加嗜中性白細(xì)胞的數(shù)量。VE能有效地提高蝦蟹的抗應(yīng)激能力和免疫力。艾春香等（2008）報(bào)道，投喂添加了VE的飼料能顯著提高中華絨螯蟹血清中環(huán)氧丙烷（PO）的活性（P＜0.05或P＜0.01），且隨著VE添加量的增加，PO活性隨之升高，其免疫功能增強(qiáng)。

1.2.4 抑制血小板增殖、凝集和血細(xì)胞黏附 VE除了直接的抗氧化功能外，還有特異性的分子功能。它能抑制蛋白激酶C的活性。蛋白激酶C在血小板增殖和分化中起著重要的作用。 VE還可以上調(diào)胞漿磷脂酶A2和環(huán)氧合酶的表達(dá)，這兩種酶是花生四烯酸級(jí)聯(lián)反應(yīng)的限速酶，而花生四烯酸的過(guò)氧化反應(yīng)是形成前列環(huán)素所必需的。所以VE與前列環(huán)素的釋放有劑量依賴(lài)效應(yīng)。前列環(huán)素是強(qiáng)有力的血小板凝集抑制劑和血管舒張劑。血管內(nèi)皮細(xì)胞富含VE還可降低細(xì)胞間黏附因子和血管細(xì)胞黏附分子的表達(dá)從而抑制血細(xì)胞與內(nèi)皮的黏附。

2 水產(chǎn)動(dòng)物缺乏VC和VE的癥狀

2.1 水產(chǎn)動(dòng)物缺乏VC的癥狀 很多研究表明，VC能夠促進(jìn)魚(yú)類(lèi)的生長(zhǎng)發(fā)育，提高飼料效率，增加魚(yú)類(lèi)的免疫能力。如果魚(yú)飼料中VC不足，魚(yú)類(lèi)得不到充足的VC供給，引起VC的缺乏，表現(xiàn)為食欲不振，游泳緩慢，生長(zhǎng)緩慢，體型畸形等，嚴(yán)重時(shí)引起壞血病癥狀，導(dǎo)致生長(zhǎng)不良，免疫力低下，但不同種類(lèi)的魚(yú)之間有一定差異。Soliman等（1994）報(bào)道，羅非魚(yú)VC缺乏會(huì)出現(xiàn)驚厥、皮膚出血、突眼、尾鰭腐蝕、傷口愈合慢。網(wǎng)箱養(yǎng)殖的鯉魚(yú)，小部分鯉魚(yú)出現(xiàn)鰓蓋凹凸不平，呈拱狀形，嚴(yán)重者脊椎彎曲變軟，大部分鯉魚(yú)生長(zhǎng)緩慢、爛鰓、皮膚腐爛、體表出血、不易愈合、易感染水霉等疾病而死亡，成活率低。Chavzde等（1990）試驗(yàn)表明，鱺魚(yú)魚(yú)苗生長(zhǎng)減慢，鰓蓋變短，體色變黑，突眼，眼、頭、鰭出血，腹部腫脹，皮膚和鰭腐爛，鱗片脫落，脊柱側(cè)凸。鮭鱒魚(yú)類(lèi)飼喂含VC缺乏的飼料后，頭和鰭的支持軟骨異常，脊椎畸形，并在前期出現(xiàn)非特異癥狀如厭食、嗜睡、腹水以及出血性突眼癥。曾永亮（1998）報(bào)道對(duì)蝦在攝食缺VC的飼料后，出現(xiàn)生長(zhǎng)減慢、軟殼、蛻皮周期延長(zhǎng)等癥狀。Magarell和 Hunter（1999）報(bào)道，對(duì)蝦VC 缺乏可發(fā)生黑斑病，并在24～72 h內(nèi)死亡。癥狀表現(xiàn)為外殼下層、腹部、鰓甚至腸的結(jié)締組織發(fā)生黑色素化病變。李?lèi)?ài)杰（1998）試驗(yàn)表明，VC缺乏時(shí)對(duì)蝦蛻殼頻率降低，周期延長(zhǎng)，鰓渾濁，死亡率高。這是由于蝦殼硬化是經(jīng)一種外殼蛋白與苯醌的交聯(lián)作用形成的。苯醌是由酪氨酸酶催化，氧化苯酚產(chǎn)生，此過(guò)程必有VC參與。

2.2 水產(chǎn)動(dòng)物缺乏VE的癥狀 VE作為一種重要的營(yíng)養(yǎng)成分對(duì)維持動(dòng)物機(jī)體正常代謝過(guò)程和生理功能具有重要的作用，主要表現(xiàn)在抗氧化、抗不育、抗病力、抗應(yīng)激能力以及提高繁殖力和機(jī)體的免疫力等方面。研究表明，大西洋鮭（Poston等，1976）、斑點(diǎn)叉尾 （Wilson，1984）、虹鱒（Moccia，1984）、草魚(yú)（Takeuchi，1992）、羅非魚(yú)攝食 VE 缺乏的日糧后出現(xiàn)貧血、肌營(yíng)養(yǎng)不良、滲出性素質(zhì)、胰腺萎縮和肝臟臘樣質(zhì)沉著等病理變化。Watanabe和 Takashima（1970）報(bào)道，鯉在 VE 缺乏時(shí)會(huì)出現(xiàn)生長(zhǎng)不良和肌肉萎縮，嚴(yán)重時(shí)甚至導(dǎo)致死亡。

VE缺乏時(shí)，魚(yú)體對(duì)外界的免疫力下降，淋巴細(xì)胞對(duì)促細(xì)胞分裂素的反應(yīng)降低。VE能有效地提高蝦蟹的抗應(yīng)激能力及其免疫力。對(duì)已患病的蝦蟹群體，補(bǔ)充適量VE不僅可以降低蝦蟹死亡率，并且能促使其早日恢復(fù)健康 （Lee和Shiau，2004）。艾春香等（2008）報(bào)道，投喂添加了VE的飼料能顯著提高中華絨螯蟹血清中環(huán)氧丙烷（PO）活性（P ＜ 0.05 或 P ＜ 0.O1），且隨著 VE 添加量的增加，PO活性隨之升高增強(qiáng)其免疫功能。

3 VC和VE的免疫機(jī)制和抗病機(jī)制

已經(jīng)有大量的研究來(lái)評(píng)價(jià)飼料中VE和VC或者它們的混合物對(duì)魚(yú)類(lèi)免疫功能和魚(yú)類(lèi)抗病力方面的作用。 Ortuno（2001）和 Lim 等（2006）試驗(yàn)證明，飼料中如果缺乏VE和VC能夠降低魚(yú)類(lèi)的免疫反應(yīng)并且能夠增加魚(yú)類(lèi)被細(xì)菌感染的可能性。

3.1 VC的免疫機(jī)制 VC能增強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物的免疫。其機(jī)制是VC可能對(duì)白細(xì)胞吞噬活性、網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的功能、抗體合成等有激活作用。

VC之所以能夠提高魚(yú)類(lèi)的免疫力主要有以下幾個(gè)原因：（1）VC是細(xì)胞液中清除自由基的第一道屏障 （Chie 和 Hwang，2001）；（2）VC 能夠防治脂肪酸的過(guò)氧化，從而使細(xì)胞膜免受損害，有利于免疫功能的發(fā)揮（Ortuno 等，1999）；（3）VC 能夠保護(hù)VE使其正常發(fā)揮生理功能 （Munlero等，1998）；（4）VC 可以抑制組氨酸脫羧酶的誘導(dǎo)，從而減少組胺合成，提高魚(yú)類(lèi)免疫力。Li和Lovell（1985）發(fā)現(xiàn)，用不含VC的飼料投喂斑點(diǎn)叉尾鮰.其血清溶解紅細(xì)胞（SRBC）的溶血活性明顯低于投喂含VC的飼料。在飼料高水平VC組（3000 mg/kg），魚(yú)體血清補(bǔ)體的溶血活性是低水平組（30 mg/kg或 300 mg/kg）的 2 倍。 Hardie等（1991）等對(duì)大西洋鮭的研究也有類(lèi)似結(jié)果。大西洋鮭血清補(bǔ)體的溶血活性隨飼料VC水平的增加而增加。宋學(xué)宏等（2002）發(fā)現(xiàn)，異育銀鯽的血清補(bǔ)體活性隨飼料VC含量的增加而明顯提高。當(dāng)每千克飼料中VC含量600 mg時(shí)血清補(bǔ)體活性最高。Verlhac等（1996）發(fā)現(xiàn)，高水平VC的飼料能顯著提高虹鱒的溶菌酶活性和巨噬細(xì)胞的吞噬活力。

VC能夠影響?hù)~(yú)類(lèi)的免疫系統(tǒng)。但是針對(duì)不同魚(yú)類(lèi)，VC的最適添加量，亦即能夠刺激魚(yú)體產(chǎn)生最佳免疫反應(yīng)的VC量、處理時(shí)間、處理溫度和其他環(huán)境因子之間的關(guān)系等一系列問(wèn)題還有待進(jìn)一步研究。

3.2 VE的免疫機(jī)制和抗病機(jī)制 許多研究證明VE能提高水產(chǎn)動(dòng)物的免疫能力。一方面，VE能夠阻止過(guò)氧化反應(yīng)和自由基對(duì)淋巴網(wǎng)狀細(xì)胞的破壞作用，通過(guò)阻止花生四烯酸的氧化反應(yīng)影響氧化磷酸化關(guān)鍵酶和改變淋巴細(xì)胞膜受體功能來(lái)抑制前列腺素合成，增強(qiáng)體液免疫；另一方面，VE能加強(qiáng)細(xì)胞免疫，提高細(xì)胞免疫能力和增加嗜中性白細(xì)胞的數(shù)量。

陳璦和周玫（1985）研究證明，VE是脂溶性自由基鏈鎖反應(yīng)的阻斷抗氧化劑，其酚基上的氫原子在自由基反應(yīng)中作為供氫體阻斷自由基鏈鎖反應(yīng)，從而阻止脂質(zhì)過(guò)氧化。VE缺乏必然會(huì)導(dǎo)致魚(yú)體內(nèi)自由基鏈鎖反應(yīng)加劇，發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，其氧化產(chǎn)物如丙二醛能夠與肌肉蛋白質(zhì)結(jié)合引起蛋白質(zhì)分子內(nèi)或分子間交聯(lián)，導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性，結(jié)構(gòu)破壞，從而造成骨骼肌損傷。另一方面，VE缺乏可導(dǎo)致鯉魚(yú)胰腺變性、壞死和萎縮，而胰島分泌的胰島素能刺激靶細(xì)胞的葡萄糖氧化作用、糖原生成、ATP形成和脂肪生成，抑制蛋白質(zhì)的分解，促進(jìn)肌蛋白的合成，對(duì)骨骼肌營(yíng)養(yǎng)代謝具有重要的調(diào)節(jié)作用（張?jiān)雒鳎?984）。因此，胰腺的嚴(yán)重?fù)p傷必然會(huì)導(dǎo)致胰島素的分泌量減少，蛋白質(zhì)的合成受阻，而分解作用加強(qiáng)，表現(xiàn)為肌纖維萎縮、變細(xì)。由于以上這兩方面的原因所致，形態(tài)學(xué)上表現(xiàn)為特征性的“瘦背癥”。

4 VC和VE之間的關(guān)系

VE和VC是水產(chǎn)養(yǎng)殖生物中必要的營(yíng)養(yǎng)元素，并且是很重要的抗氧化劑。大量研究已經(jīng)證明這兩種維生素是營(yíng)養(yǎng)元素中參與免疫反應(yīng)的最主要的元素。它們單獨(dú)使用時(shí)都可以增強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物的免疫力，有很多研究已經(jīng)表明在免疫方面VC和VE之間具有節(jié)約作用。Sealey和Shiau等（2002）試驗(yàn)證明，它們?cè)谠鰪?qiáng)動(dòng)物免疫力方面具有協(xié)同作用。Shian和Hsu（2002）以羅非魚(yú)為試驗(yàn)對(duì)象，在最適VC水平和3倍的最適水平下，分別添加和不添加VE，結(jié)果表明在高水平的VC的條件下，即使不添加VE，試驗(yàn)魚(yú)的生長(zhǎng)和飼料轉(zhuǎn)化率與添加組之間也沒(méi)有顯著差異，這說(shuō)明VC對(duì)VE的節(jié)約效應(yīng)，二者的適宜含量可顯著提高魚(yú)類(lèi)的免疫力和抗病力。

Mediha（2008）研究表明，在鯰魚(yú)的生長(zhǎng)和飼料利用效率上VC和VE之間沒(méi)有顯著的關(guān)系。但是在缺乏VC造成的骨骼畸形方面，試驗(yàn)結(jié)果表明VE對(duì)VC具有節(jié)約作用。在基礎(chǔ)日糧中添加50 mg/kg或者500 mg/kg的VE能夠緩解VC的缺乏癥。

5 結(jié)論

VC和VE對(duì)提高水產(chǎn)動(dòng)物免疫功能，主要作用機(jī)理是通過(guò)提高水產(chǎn)動(dòng)物的非特異性免疫功能來(lái)增強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物的抗應(yīng)激、感染能力，從而提高其生產(chǎn)性能。這種免疫增強(qiáng)劑具有作用廣泛、特性穩(wěn)定、安全高效等的特點(diǎn)，適宜作為飼料添加劑來(lái)替代抗生素對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)。

[1]艾春香，陳立僑，劉曉玲，等.維生素E對(duì)中華緘螯蟹酚氧化酶、抗茵力和溶茵酶活性的影響[J].海洋與湖沼，2008，39（2）：119 ～ 122.

[2]艾慶輝，麥康森，王正麗，等.維生素C對(duì)魚(yú)類(lèi)營(yíng)養(yǎng)生理和免疫作用的研究進(jìn)展[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2005，29（6）：857 ～ 861.

[3]陳 璦，周玫.脂質(zhì)過(guò)氧化作用與疾病[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)雜志，1985，5（11）：704～706.

[4]李?lèi)?ài)杰.維生素C對(duì)中國(guó)對(duì)蝦的營(yíng)養(yǎng)和營(yíng)養(yǎng)作用及其最適劑型[J].糧食與飼料工業(yè)，1998，2：33 ～ 36.

[5]宋學(xué)宏.用生長(zhǎng)和非特異性免疫力評(píng)定異育銀鯽維生素C需要量[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2002，26：351 ～ 356.

[6]王建梅，王維娜，王安利，等.鹽度脅迫下維生素E對(duì)南美白對(duì)蝦體內(nèi)抗氧化物質(zhì)含量的影響[J].水產(chǎn)養(yǎng)殖，2003，5：33 ～ 36.

[7]曾永亮.網(wǎng)箱養(yǎng)鳊維生素缺乏癥的防治[J].江西水產(chǎn)科技.1998，3：29.

[8]張國(guó)輝，何瑞國(guó)，張世萍.維生素E對(duì)黃鱔繁殖性能的影響Ⅱ[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，25（2）：177 ～ 181.

[9]張?jiān)雒?病理生化學(xué)[M].北京：科學(xué)出版社，1984.210～220.

[10]Chavzde Martinez，Martinez，M C C de.Vitamin C requirement of the Mexican native cichlid cich lasomauroph thalmus[J].Aquaculture，1990，86（4）：409～416.

[11]Chie L T，Hwang D F.Effects of thermal stress and vitamin C in lipid perocidation and fatty acid composition in the liver of thomfish Teropon[J].Comp Biochem Physiol，2001，128B：9l～ 97.

[12]Hardie L J，F(xiàn)letcher T C，Secombes C J.The effect of dietary vitamin C on the immun e response of the Atlantic salmon （Sslmo salar） [J].Aqua，1991，95：201 ～ 204.

[13]Kanagu L，Senthikumar P，Stella C，et al.Effect of VC and VE and Glucan as immunomodulators in P.monodon Disease Management[J].Journal of Scientific Research，2010，6（5）：537 ～ 543.

[14]Lee M H，Shiau S Y.Vitamin E requirements of juvenile grass shrimp，Penaeus monodon，and effects on non-specific immune responses[J].Fish&Shellfish Immunology，2004，16（5）：475 ～ 485.

[15]Li Y，Lovell R T.Elevated levels of dietary ascorbic acid increase immune response in channel catfish[J].J Nutrition，1985，11（5）：123 ～ 131.

[16]Lim C，Yildirim-Aksoy M，Shelby R，et al.Influence of dietary levels of fish oil and vitamin E on growth and resistance of channel catfish to Edwardsiella challenge[J].Aquaculture，Book ofAbstracts，2006，23：167 ～ 169.

[17]Magarell P C，J r B Hunter.Black Death：An ascorbic deficiency disease in pan acid chrimp[J].Comp Biochemist Physic，l999，63 A：103 ～ 108.

[18]Mediha Yildirim-Aksoy，Chhorn Lim，Menghe H Li，et al.Interaction between dietary levels of vitamins C and E on growth and immune responses in channel catfish[J].Aquaculture Research，2008，39：1198 ～ 1209.

[19]Moccia R D，Hung S O，Slinger S T，et al.Effect of oxidized oil vitamin E and ethoxuquin on the histopathology and hematology of rainbow trout[J].Journal of Fish Diseases，1984，7（4）：269 ～ 282.

[20]Munlero V，Esteban A，Meseguer J.Effects of in vitro addition of exogenous vitamins C and E on gilthead seabream phagocytes[J].Vet Immunol Immunopathol，1998，66：185 ～ 199.

[21]Ortuno J，Cuesta A，Esteban M A.Effect of oral administration of high vitamin C and E dosages on the gilthead seabream （Sparus aurata L.） innate immune system[J].Veterinary Immunology and Immunopathology，2001，79：167～180.

[22]Ortuno J，Esteban A，Meseguer J.Effects of high dietary intake of vitamin C on nonspecific immune response of gilthead seabream[J].Fish Shellfish Immunol，1999，9：429 ～ 443.

[23]Poston H A，Combs G F，Leibovite L.Vitamin E and selenium interrelations in the diets of Atlantic salmon：gross，histological and biochemical deficiency signs[J].Journal of Nutrition，1976，106：892 ～ 940.

[24]Sealey W M，GatlinⅢ D M.vitro main pulations of vitamin C and vitamin E concentrations alter intracellular production of hybrid stipend bass（Morone chrysop Morone saratilis）head—kidney cells[J].Fish Shellfish Immunol，2002，12：131 ～ 140.

[25]Shian S Y，Hsu C Y.Vitamin E sparing effect by dietary vitamin C in juvenile hybrid tilapia，Oreochromis niloticus[J].Aquaculture，2002，210：335 ～342.

[26]Soliman A K，Jauncey K，Roberts R T.water soluble vitamin requirements of tilapia： ascorbic acid （vitamin C） requirement of Nile tilapia[J].Aquaculture and Fisheries Management，1994，25（3）：269 ～ 278.

[27]Takeuchi T，Watananbe K，Satoh H S.Requirement of grass carp fingerlings for alpha-tocopherol.Bulletion of the Japanese[J].Society of Scientific Fisheries，1992，58（9）：1743 ～ 1749.

[28]Trushenski J T，Kohler C C.Influence of stress or dietary natural-source vitamin E on nonspecific immunocompetence，tissue tocopherol composition，and post-slaughter fillet oxidative stability in sunshine bass[J].North Am J Aquaculture，2007，69：330 ～ 339.

[29]Verlhac V.Influence of dietary glucan and vitamin C on non-specific and specific immune responses of rainbow trout[J].Aqua，1996，143：123 ～ 133.

[30]Watanabe T，F(xiàn) Takashima.Requirement of young carp for tocopherol[J].Bulletion of the Japanese Society of Scientific Fisheries，1970，36：972 ～ 976.

[31]Wilson R P.Dietary vitamin E requirement of fingerling channel catfish[J].Journal of Nutrition，1984，114：2053 ～ 2058.