初篩實驗室HIV抗體檢測的質(zhì)量控制及影響因素分析

張潤林

（山西省太原市陽曲縣疾病預(yù)防控制中心，山西 太原 030100）

艾滋病是一種危害人類生命健康的傳染病，目前已成為全球關(guān)注的公共衛(wèi)生和社會問題，要了解和掌握HIV的感染情況，關(guān)鍵就是實驗室的檢測技術(shù)，新的監(jiān)測和檢測需求在不斷增加，而HIV抗體的檢測可作為對HIV感染者診斷和監(jiān)測的實驗室依據(jù)，也是目前獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS）診斷中最常用的方法，因此，提高實驗室檢測的準(zhǔn)確性，減少假陽性和假陰性反應(yīng)的發(fā)生，對診斷艾滋病十分重要，應(yīng)用HIV抗體質(zhì)控血清是對艾滋病初篩實驗室進行全面質(zhì)量評價的重要手段，現(xiàn)將本實驗室進行HIV室內(nèi)質(zhì)量控制的程序介紹如下。

1 試劑來源

1.1 外部對照質(zhì)控血清

衛(wèi)生部臨床檢驗中心試劑部提供的GBW（E）090050抗HIV 2NCU/mL并嚴(yán)格按照《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》2009年修訂版[1]制備或購買弱陽性對照血清（該試劑盒臨界值的2～3倍）、分裝保存。

1.2 HIV診斷試劑盒

由省級HIV實驗室提供，由珠海麗珠試劑股份有限公司生產(chǎn)的試劑，所用試劑盒及內(nèi)部對照質(zhì)控血清均在有效期內(nèi)使用。

2 實驗室設(shè)備校準(zhǔn)

2.1 北京普朗新技術(shù)有限公司制造的全自動ZMX-988B酶標(biāo)洗板機

本實驗室根據(jù)計量認(rèn)證質(zhì)量手冊的要求，經(jīng)省技術(shù)監(jiān)督監(jiān)測中心定期校準(zhǔn)（每年至少1次）。嚴(yán)格按照作業(yè)指導(dǎo)書操作規(guī)程進行自校準(zhǔn)檢查。每個工作日應(yīng)檢查洗板機管道是否通暢，是否有漏液現(xiàn)象，定期（每月至少1次）檢查洗滌時各孔是否與相應(yīng)的沖洗頭對位良好，負(fù)壓是否符合規(guī)定要求，并保留記錄。

2.2 上海博訊實業(yè)有限公司生產(chǎn)的SSW型電熱恒溫水槽

調(diào)節(jié)并控制溫度在（37±2）℃。每個工作日檢查記錄水浴箱溫度，并做好記錄。使用經(jīng)過計量部門校準(zhǔn)合格的溫度計測量。

2.3 BIORAD Model 680型酶標(biāo)儀、上海精益醫(yī)學(xué)儀器廠生產(chǎn)的可調(diào)微量移液器

均經(jīng)省技術(shù)監(jiān)督監(jiān)測中心檢定合格。酶標(biāo)儀根據(jù)儀器內(nèi)具有的校準(zhǔn)程序或使用校準(zhǔn)板，對濾光片的精密度進行校準(zhǔn)，并在檢定周期1年內(nèi)使用，每個工作日核對濾光片波長，對其檢測數(shù)據(jù)進行不確定度分析，從而確保其具有良好的重復(fù)性和線性范圍。移液器嚴(yán)格按照質(zhì)量手冊中作業(yè)指導(dǎo)書的操作規(guī)程定期進行校準(zhǔn)，每年至少校準(zhǔn)一次，發(fā)現(xiàn)異常情況應(yīng)隨時進行校準(zhǔn)，其精密度應(yīng)在廠家說明書規(guī)定的范圍內(nèi)。

3 操 作

3.1 嚴(yán)格按照作業(yè)指導(dǎo)書的操作規(guī)程進行操作。加入樣品量要準(zhǔn)確，不得混入血細(xì)胞，同時按照試劑說明書操作步驟每板設(shè)空白對照1孔（不加任何液體）、陰性對照3空、陽性對照2孔，質(zhì)控弱陽性對照血清1孔；嚴(yán)格掌握溫育時間，以免影響結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確性；置自動洗板機上洗滌，洗板時應(yīng)保證洗板機管路暢通，加液量均勻；不得隨意加減洗板次數(shù)（洗板次數(shù)少出現(xiàn)假陽性，洗板次數(shù)多又會使臨界弱陽性變成陰性而漏檢）；拍板（以墊紙不濕為宜）；在規(guī)定的時間內(nèi)置于酶標(biāo)儀讀數(shù)，雙波長450/630nm測OD值。檢測結(jié)果正常情況下陽性對照 OD值≥0.8，陰性對照OD值≤0.12，若實驗結(jié)果不符合這些要求，就應(yīng)檢查原因并重新進行檢測。不同批號試劑不得混用。

3.2 每一次實驗必須使用室內(nèi)質(zhì)控品，以便監(jiān)控實驗的重復(fù)性。對于我們基層HIV初篩實驗室來說，由于不是每天進行HIV抗體的檢測，對外部質(zhì)控血清在常規(guī)條件下連續(xù)檢測20次繪制出質(zhì)控圖后才能進入質(zhì)控狀態(tài)有很大難度，因此，我們采用了“即刻法”質(zhì)控，即在對同一外部質(zhì)控血清連續(xù)測定3次后，即可對第3次測定結(jié)果進行質(zhì)控，從而來保證檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

3.3 室內(nèi)質(zhì)控是實驗室內(nèi)部對所有影響檢測質(zhì)量的各個環(huán)節(jié)進行系統(tǒng)控制，以提高日常檢測工作前后的一致性。該質(zhì)量控制主要通過質(zhì)控圖來實現(xiàn)，在ELISA法檢測HIV試驗中，從第3次開始就可以對每次測定的外部質(zhì)控血清值進行統(tǒng)計，算出每次的SI上限值與SI下限值，查SI值表[1]，當(dāng)SI上限值與SI下限值＜N2s時，表示該數(shù)據(jù)處于控制范圍之內(nèi)，結(jié)果可靠可以繼續(xù)測定；當(dāng)SI上限值與SI下限值處于N2s與N3s之間時，表示該數(shù)據(jù)處于2s～3s范圍，處于“告警”狀態(tài)；當(dāng)SI上限值與SI下限有一值＞N3s時，表示該數(shù)據(jù)已在3s范圍之外，屬于“失控”狀態(tài)，應(yīng)重新測定該批樣品。實驗人員在實驗中出現(xiàn)告警或失控狀態(tài)時，應(yīng)予注意，并及時分析原始數(shù)據(jù)及對具體檢驗過程進行回顧性分析，可能是系統(tǒng)誤差、隨機誤差或外部質(zhì)控品穩(wěn)定性下降所致。查找出問題發(fā)生的原因，找出解除問題的方法后再繼續(xù)進行測定。

4 影響因素分析

4.1 “即刻法”室內(nèi)質(zhì)控是適宜于基層初篩HIV實驗室使用的一種較好的室內(nèi)質(zhì)量控制方法。為更好地做好室內(nèi)質(zhì)量控制，最好有專人負(fù)責(zé)質(zhì)量控制，制定質(zhì)量保證文件；篩查試劑必須經(jīng)食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)、批檢合格在有效期內(nèi)的試劑，建議長期和穩(wěn)定地使用一種敏感性和特異性高的試劑盒，如更換不同廠家的試劑盒或改用新批號試劑盒應(yīng)重新制作質(zhì)控圖，且使用新批號或不同廠家的試劑盒必須在質(zhì)控圖上注明使用日期。另外，更換檢測人員及更換包裝的外部對照質(zhì)控物必須重新繪制質(zhì)控圖。每次測定時，試劑盒及外部質(zhì)控血清從冰箱取出后均應(yīng)在室溫下（18～23℃）平衡30min再使用；購買來的外部對照質(zhì)控血清不能反復(fù)凍融，應(yīng)按實際實驗用量分裝、分類、標(biāo)記、封口、-20℃凍存于自動除霜冰箱中。一旦溶解，應(yīng)儲存于2～8℃的冰箱內(nèi)，并且每次使用前應(yīng)充分混勻。

4.2 室內(nèi)質(zhì)量控制是通過使用內(nèi)部對照質(zhì)控血清和外部對照質(zhì)控血清來進行質(zhì)量控制。試劑盒內(nèi)部對照用于判斷每次實驗的有效性，內(nèi)部對照結(jié)果無效，必須重新試驗。質(zhì)控弱陽性對照血清是為了監(jiān)控檢測的重復(fù)性和穩(wěn)定性而設(shè)置的，以該試劑盒臨界值（Cut-off）的2～3倍為宜。每一次實驗都必須使用外部對照質(zhì)控血清，并對檢測結(jié)果進行分析，質(zhì)控物的管間或瓶間變異必須小于監(jiān)測系統(tǒng)預(yù)期的變異（cv＜20%），確定其在允許范圍內(nèi)，方可發(fā)出標(biāo)本檢測報告，這樣做可使檢測者及時分析質(zhì)量控制圖中出現(xiàn)的各種原因，以采取相應(yīng)措施。4.3 出現(xiàn)以下問題，存在質(zhì)量隱患，應(yīng)引起重視：內(nèi)盒或試劑盒的物理損傷；在單包裝內(nèi)存在混雜物質(zhì)；標(biāo)簽出現(xiàn)錯誤、缺失或字跡模糊[特別是產(chǎn)品名稱或出產(chǎn)廠家名稱，批號和貨號，失效期和（或）生產(chǎn)日期]；泄露或污染；不適宜的存放條件等。

4.4 引起室內(nèi)質(zhì)控失控的原因很多。如儀器設(shè)備未經(jīng)檢定、校準(zhǔn)或測試、使用新批號和不同廠家的試劑及試劑接近失效期、購買不同廠家的外部質(zhì)控品及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)血清反復(fù)凍融、孵育時間和溫度不準(zhǔn)確、更換新的檢驗人員等，此時要及時查找原因并予以糾正。

4.5 通常把臨界值上下10%的范圍定為檢測結(jié)果灰區(qū)。對于檢測過程中出現(xiàn)的灰區(qū)標(biāo)本均應(yīng)進行重復(fù)測試，以減少假陽性和假陰性結(jié)果的出現(xiàn)，并對檢驗結(jié)果和過程進行記錄存檔。

4.6 質(zhì)量控制是監(jiān)視全過程，排除誤差，防止變化，維持標(biāo)準(zhǔn)化現(xiàn)狀的一個管理過程。要做好實驗室的質(zhì)量保證，單純靠室內(nèi)質(zhì)控是不行的，還要有行政支持，保證實驗室負(fù)責(zé)人和主要技術(shù)人員隊伍的穩(wěn)定，檢測技術(shù)人員需經(jīng)上崗培訓(xùn)和在崗持續(xù)培訓(xùn)。還要建立健全實驗室的各項規(guī)章制度，掌握質(zhì)量控制知識，保證標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量等全過程的質(zhì)量控制，并參加艾滋病確認(rèn)中心實驗室職能工作考核和能力驗證，從而提高檢驗質(zhì)量。

[1]中國疾病預(yù)防控制中心.全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范(2009年修訂版)[S].2009.