抗敏止癢乳膏處方優(yōu)選的正交試驗(yàn)研究*

江蘇省南通市第四人民醫(yī)院(226005) 丁曉云

抗敏止癢乳膏處方優(yōu)選的正交試驗(yàn)研究*

江蘇省南通市第四人民醫(yī)院(226005) 丁曉云

目的優(yōu)選抗敏止癢乳膏處方中最佳藥物用量。方法 采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法進(jìn)行處方中各成分用量篩選，以鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)的小鼠痛閾提高百分率和抗炎實(shí)驗(yàn)的小鼠耳腫脹抑制率為考察指標(biāo)，確定乳膏的最佳處方并進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。結(jié)果 優(yōu)選的抗敏止癢乳膏的最佳處方為1 000 g乳膏中含鹽酸利多卡因20 g，撲爾敏5 g，冰片20 g，氯霉素10 g，驗(yàn)證試驗(yàn)中小鼠痛閾提高百分率和耳腫脹抑制率均＞60%，考察指標(biāo)結(jié)果達(dá)到要求。結(jié)論 優(yōu)選的抗敏止癢乳膏處方合理，可為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

抗敏止癢乳膏 正交設(shè)計(jì) 處方優(yōu)選

*：南通市社會(huì)發(fā)展科技計(jì)劃項(xiàng)目(No：S2007026)

本文根據(jù)瘙癢性皮膚病的發(fā)病機(jī)理以及臨床表現(xiàn)并結(jié)合多年的臨床治療經(jīng)驗(yàn)，運(yùn)用中西藥物進(jìn)行合理組方，研制了非激素類(lèi)復(fù)方外用制劑抗敏止癢乳膏，用于治療急慢性濕疹、神經(jīng)性皮炎和局限性瘙癢癥。為了選擇一個(gè)最佳處方的藥物用量，從而達(dá)到臨床療效好，副反應(yīng)小的治療目的，本文采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法〔1，2〕并以實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物的抗炎鎮(zhèn)痛作用，對(duì)抗敏止癢乳膏的處方進(jìn)行了優(yōu)選。

材 料

1.試驗(yàn)藥物

鹽酸利多卡因(江蘇濟(jì)川制藥有限公司，純度99.9%，批號(hào)：090531);撲爾敏(河南九勢(shì)制藥有限公司，純度：99.6%，批號(hào)：081013)，冰片(南通薄荷油廠有限公司，純度：99.5%，批號(hào)：090125);氯霉素(南京白敬宇制藥有限公司，純度：99.8%，批號(hào)：090907);抗敏止癢乳膏(南通市皮膚病性病防治所提供，規(guī)格：20g/盒，批 號(hào)：091107，091113，091119，091123，091127)。

2.試驗(yàn)動(dòng)物

昆明種小鼠，18～22 g，雌雄兼有(南通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證：SCXK2002-0019)。

實(shí)驗(yàn)方法

1.因素水平的確定

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)，抗敏止癢乳膏由鹽酸利多卡因、撲爾敏、冰片、氯霉素4種藥物和乳膏基質(zhì)組成，前三種藥物對(duì)疾病治療起主要作用，試驗(yàn)時(shí)每個(gè)因素安排4個(gè)水平，氯霉素主要起預(yù)防搔抓所致皮膚繼發(fā)性感染的作用，試驗(yàn)時(shí)安排2個(gè)水平。各因素具體試驗(yàn)的水平見(jiàn)表1。

表1 因素水平表(1000g乳膏中加入藥物的克數(shù))

2.各因素水平的選擇

表1是一個(gè)43×21的試驗(yàn)，擬選用L16(43×26)的正交表。因在表1中每個(gè)因素的水平都是由小到大按順序排列的，按正交表試驗(yàn)，所有的1水平要碰在一起，這種極端的組合易增加試驗(yàn)誤差，因此本文對(duì)起主要治療作用的前3個(gè)因素的水平進(jìn)行了隨機(jī)化處理，見(jiàn)表2。

表2 隨機(jī)化后各因素水平表

3.熱板法鎮(zhèn)痛試驗(yàn)〔3〕

(1)小鼠分組 將雌性小鼠置于(55±0.5)℃恒溫水浴上的金屬盆低熱板上測(cè)定痛閾值。選用痛閾值在20～30 s(疼痛反應(yīng)不規(guī)則者如過(guò)敏、遲鈍或喜跳動(dòng)的小鼠剔除不用)的小鼠80只，隨機(jī)分成16組，每組5只，分籠存放并編號(hào)。實(shí)驗(yàn)前1日給各組小鼠腹部剃毛，面積1 cm2。

(2)試驗(yàn)方法 根據(jù)人體常用推薦劑量0.05 g·cm-2，按體表面積換算出〔4〕小鼠用量為 0.032 mg·cm-2。按表3試驗(yàn)號(hào)對(duì)應(yīng)的處方用量制備的抗敏止癢乳膏給上述相應(yīng)編號(hào)的每只小鼠涂藥，共4次，每次用量0.032 mg·cm-2，前2次涂腹部去毛皮膚，后2次涂四足掌，用藥面積約1 cm2，每次用藥間隔30 min，給藥前測(cè)各小鼠2次痛閾值，取其平均值為正常痛閾值。各組小鼠在末次涂藥后90 min時(shí)分別測(cè)定痛閾值，求出每組動(dòng)物給藥后的痛閾提高百分率。為便于計(jì)算，結(jié)果均取5只小鼠的平均值。

4.對(duì)小鼠耳腫脹的影響〔4〕

(1)小鼠分組 選取小鼠80只，雌雄各半，隨機(jī)分為16組，每組5只，分籠存放并編號(hào)。

(2)試驗(yàn)方法 按表3試驗(yàn)號(hào)中對(duì)應(yīng)的處方量制備的抗敏止癢乳膏給上述相應(yīng)編號(hào)的每只小鼠右耳涂藥，共4 次，每次用量 0.032 mg·cm-2，面積約 2 cm2，每次用藥間隔30 m in，左耳作對(duì)照。末次給藥30 min后，各小鼠右耳以溫水洗去殘余藥物并擦凈，再給各小鼠雙耳涂二甲苯，每只0.05 mL，1.5 h后處死小鼠，用8 mm直徑打孔器將雙耳同部位打下圓耳片，稱(chēng)量重量，求出耳腫脹抑制率。為便于計(jì)算，結(jié)果均取5只小鼠的平均值。

5.評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

為了便于對(duì)最佳處方提供評(píng)價(jià)依據(jù)，本文對(duì)鎮(zhèn)痛和抗炎試驗(yàn)的數(shù)據(jù)分別進(jìn)行了分級(jí)量化評(píng)分。

(1)鎮(zhèn)痛試驗(yàn)量化評(píng)分〔5〕以小鼠痛閾提高百分率(%)=［(給藥后平均痛閾-給藥前平均痛閾)/給藥前平均痛閾］×100%為評(píng)價(jià)指標(biāo)，評(píng)價(jià)抗敏止癢乳膏的局部止痛、止癢效果，以y1表示效果。優(yōu)為y1≥60%，良為60% ＞y1≥50%，中為50% ＞y1≥25%，差為y1＜25%。

(2)抗炎試驗(yàn)量化評(píng)分〔6〕以小鼠右耳腫脹抑制率(%)=［(左耳平均質(zhì)量-右耳平均質(zhì)量)/左耳平均質(zhì)量］×100%為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)價(jià)抗敏止癢乳膏的局部抗炎效果，以y2表示效果。優(yōu)為 y2≥60%，良為60% ＞y2≥50%，中為 50% ＞y2≥25%，差為 y2＜25%。

6.正交試驗(yàn)結(jié)果

(1)正交試驗(yàn)方案與試驗(yàn)觀察結(jié)果 見(jiàn)表3。

(2)直觀分析 由表3看出，以鎮(zhèn)痛作用為評(píng)價(jià)指標(biāo)時(shí)，各因素對(duì)結(jié)果的影響大小順序?yàn)镃＞A＞B＞D，不同因素內(nèi)各水平對(duì)結(jié)果的影響強(qiáng)弱為：A1＞A4＞A2＞A3;B4＞B3＞B1＞B2;C3＞C1＞C2＞C4;D2＞D1;其最佳因素水平組合為A1B4C3D2。以抗炎作用為評(píng)價(jià)指標(biāo)時(shí)，各因素對(duì)結(jié)果的影響大小順序?yàn)镃＞B＞A＞D，不同因素內(nèi)各水平對(duì)結(jié)果的影響強(qiáng)弱為A2＞A3＞A4＞A1;B4＞B1＞B2＞B3;C3＞C2＞C1＞C4;D1＞D2;其最佳因素水平組合為A2B4C3D1。兩個(gè)指標(biāo)的差異為A因素和D因素，即鹽酸利多卡因和氯霉素的用量。

(3)方差分析 將表3中y1值和y2值進(jìn)行方差分析，結(jié)果見(jiàn)表4。

表3 試驗(yàn)方案與結(jié)果

表4 方差分析

由表4看出，當(dāng)以鎮(zhèn)痛作用為評(píng)價(jià)指標(biāo)時(shí)，因素C對(duì)結(jié)果有差異(P＜0.01)，因素A對(duì)結(jié)果也有差異(P＜0.05)，影響強(qiáng)度及最佳因素水平組合均與直觀分析結(jié)果相符。當(dāng)以抗炎作用為評(píng)價(jià)指標(biāo)時(shí)，因素B和因素C對(duì)結(jié)果都有差異(P＜0.05)，影響強(qiáng)度及最佳因素水平組合也與直觀分析結(jié)果相符。由表3的ˉR值可知，在抗炎試驗(yàn)中，A1為33.2，A2為37.2，兩者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，任取一項(xiàng)均能滿足實(shí)驗(yàn)要求，結(jié)合鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)結(jié)果與方差分析取A1較合適。考慮到D因素的2個(gè)水平雖對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有一定的影響，但從直觀分析和方差分析看出，差異都很小，根據(jù)臨床用藥經(jīng)驗(yàn)，D因素選取第1水平。綜合直觀分析和方差分析，最佳因素水平組合為A1B4C3D1。

6.優(yōu)選處方的驗(yàn)證

根據(jù)優(yōu)選結(jié)果，按最佳處方A1B4C3D1制備5批抗敏止癢乳膏，進(jìn)行小鼠鎮(zhèn)痛和抗炎作用試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 優(yōu)選處方的驗(yàn)證

由表5看出，最佳處方制備的抗敏止癢乳膏，在鎮(zhèn)痛試驗(yàn)中鎮(zhèn)痛作用明顯，痛閾提高百分率均＞60%，在抗炎試驗(yàn)中，耳腫脹抑制率均＞60%，都達(dá)到了預(yù)定評(píng)價(jià)指標(biāo)的要求。

討論與小結(jié)

由試驗(yàn)結(jié)果和分析可知，抗敏止癢乳膏的最佳處方為每1000 g乳膏中含鹽酸利多卡因20 g，撲爾敏5 g，冰片20 g，氯霉素10g。各因素選出的最佳水平除氯霉素在實(shí)驗(yàn)中只安排了2個(gè)水平，評(píng)定時(shí)2者選1以外，其余對(duì)治療起主要作用的3個(gè)因素的最佳水平都處于試驗(yàn)方案的中間，說(shuō)明試驗(yàn)方案中各因素水平的確定是合理的。

處方中所含鹽酸利多卡因?yàn)楸砻媛樽韯?，具有止痛止癢效果，冰片局部使用可產(chǎn)生清涼、止癢、消炎作用〔7〕，以上兩藥配伍使用，使鎮(zhèn)痛、止癢作用進(jìn)一步增強(qiáng)。

處方中的冰片能抑制3α-羥基甾醇脫氫酶，從而可使3β-羥基甾醇脫氫酶發(fā)揮更大的作用，促進(jìn)生成更多的氫化可的松，發(fā)揮抗炎作用〔7〕。撲爾敏具有拮抗組胺引起血管擴(kuò)張和通透性增加的作用，并且還具有拮抗5-羥色胺、慢反應(yīng)物質(zhì)等炎癥介質(zhì)作用〔8〕。本制劑的抗炎作用主要與冰片和撲爾敏有關(guān)。

氯霉素抗菌譜廣〔9〕，與具有溫和防腐、抑菌作用的冰片配伍使用，對(duì)防止搔抓所致繼發(fā)性皮膚細(xì)菌感染具有良好的預(yù)防作用。

本實(shí)驗(yàn)采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法優(yōu)選抗敏止癢乳膏的處方，以鎮(zhèn)痛試驗(yàn)的小鼠痛閾提高百分率和抗炎試驗(yàn)的耳腫脹抑制率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析計(jì)算，較好地優(yōu)選出抗敏止癢乳膏的處方，方法可行，收效滿意，為臨床應(yīng)用提高了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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ExperiMental Study of Formula Optim ization for Anti-allergic and Relieving Itching Cream

DingXiaoyun．4thpeople’shos-pitalofNantong(226006)，Jiangsu

Objective To choose the best formula for anti-allergic and relieving itching cream.MethodsOrthogonal experimentwas used to study the abirritation effect on rats and study the edema inhibition rate ofmouse ear.The best formulawas designed according to the result of these studies and do Validation test.ResultsThe formula was Lidocaine 20g，chlorpheniram inemaleate5g，borneol20g，chlormycetin 10g per1000g cream.ConclusionThe design of the formula was reasonable.

Anti-allergic and relieving itching cream;Formula optimization;Formula optimization