黑線倉鼠及其白化突變系血液生理生化值的測定與分析

趙 爽，王冬平，劉 曉，李桂軍，曾 林，白杰英

（軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心，北京 100071）

黑線倉鼠（Cricetulus barabensis）俗稱中國地鼠，屬于哺乳綱/真獸亞綱/嚙齒目/倉鼠科/倉鼠亞科/倉鼠屬的一種動物。1919年我國學(xué)者謝恩增首次將黑線倉鼠引入實驗室進(jìn)行醫(yī)學(xué)研究，用于肺炎球菌的檢定［1］。雖然在倉鼠家族中黑線倉鼠的使用不如金黃地鼠廣泛，但是黑線倉鼠作為實驗動物，自身有許多優(yōu)良特性：睪丸大、頰囊發(fā)達(dá)、染色體數(shù)目少、自身傳染性疾病少、脾和腦的重量相對較大等［2］。

作者信息在黑線倉鼠的馴育與研究方面開展較早，從1983年開始野生黑線倉鼠的馴化研究，在馴育過程中獲得了黑線倉鼠的白化突變品系，并建立了黑線倉鼠白化突變系（A：CHA）［3］。黑線倉鼠及其白化突變系（以下稱：白化黑線倉鼠）本身是非常理想的疾病模型動物。但動物本身生理生化值尚未有明確報道，這使該實驗動物在生命醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用受到一定的限制。本研究旨在測定黑線倉鼠及白化黑線倉鼠的血液生理生化正常值，以供研究人員參考。同時，比較黑線倉鼠與白化黑線倉鼠，以及倉鼠與小鼠在血液生理生化值方面的差異，為黑線倉鼠及其白化突變系更好的開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

黑線倉鼠及白化黑線倉鼠，體重為18～20 g，每種動物雌雄各20只，購自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心［SCXK-（軍）2007-004］。實驗動物分組編號：雌性黑線倉鼠用BF表示；雄性黑線倉鼠用BM表示；雌性白化黑線倉鼠用WF表示；雄性白化黑線倉鼠用WM表示。

1.2 儀器設(shè)備和主要試劑

CX5PRO全自動生化測定儀，由美國 Beckman公司生產(chǎn)，所用試劑均為 Beckman公司原裝試劑。血球計數(shù)為日本光電MEK-7222K全自動血細(xì)胞分析儀（應(yīng)用本儀器調(diào)試的動物參數(shù)），及配套試劑。

1.3 血液樣品制備

眼眶靜脈取血，EDTA-2K抗凝血及全血，抗凝血用于血液生理指標(biāo)測定。全血5000 rpm離心2 m in，吸取上清液，用于血清生化指標(biāo)測定。

1.4 血液生理生化值測定

生理值：白細(xì)胞計數(shù)（WBC）、紅細(xì)胞計數(shù)（RBC）、血紅蛋白（HGB）、紅細(xì)胞比積（HCT）、平均紅細(xì)胞體積（MCV）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量（MCH）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（MCHC）、血小板計數(shù)（PLT）、血小板比積（PCT）、血小板體積分布寬度（PDM）。白細(xì)胞分類計數(shù)及百分比：嗜堿性粒細(xì)胞（BAS）、嗜酸性粒細(xì)胞（EOS）、中性粒細(xì)胞（NEUT）、淋巴細(xì)胞（LYM）、單核細(xì)胞（MON）。

生化值：總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、ALB/GLB、總膽固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、血糖（GLU）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP）、肌酸激酶（CK）、乳酸脫氫酶（LD）、淀粉酶（AMY）、AST/ALT、總膽紅素（TBIL）、尿素氮（BUN）、尿酸（URIC）、肌酐（Crea）、BUN/Crea、磷（P）、鈉（Na）、鉀（K）、氯（Cl）、鈣（Ca）、鎂（Mg）、二氧化碳（CO2）、陰離子間隙（AG）、滲透壓（OSM）。

1.5 數(shù)據(jù)分析

用SPSS10.0軟件包對所測得的數(shù)據(jù)進(jìn)行 t檢驗分析。

2 結(jié)果

2.1 血液生理值測定

測試結(jié)果顯示黑線倉鼠的嗜酸性粒細(xì)胞絕對值、嗜堿性粒細(xì)胞絕對值、嗜酸性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)差異顯著（P＜0.05）；白化黑線倉鼠的單核細(xì)胞的絕對值、嗜堿性粒細(xì)胞的絕對值、單核細(xì)胞絕對值差異顯著。雄性黑線倉鼠和白化黑線倉鼠的WBC、淋巴細(xì)胞絕對值、單核細(xì)胞絕對值、嗜堿性粒細(xì)胞絕對值、淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)、單核細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)、中性粒細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)、嗜堿性粒細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)差異顯著；雌性黑線倉鼠和白化黑線倉鼠的平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度、嗜堿性粒細(xì)胞絕對值差異顯著。（見表1）

2.2 血清生化值測定

測試結(jié)果顯示黑線倉鼠的血糖、總蛋白、甘油三酯、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、肌酐、差異顯著（P＜0.05），谷草轉(zhuǎn)氨酶、氯、二氧化碳和滲透壓存在極顯著差異（P＜0.01）；白化黑線倉鼠的乳酸脫氫酶、磷、鈉和鈣差異顯著（P＜0.05）。雌性黑線倉鼠和白化黑線倉鼠的血糖、堿性磷酸酶和陰離子間隙差異顯著（P＜0.05），其滲透壓、鈣、氯、鈉間差異極顯著（P＜0.01）；雄性黑線倉鼠和白化黑線倉鼠的二氧化碳差異顯著（P＜0.05），其鈉、尿酸、堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶、膽固醇和總蛋白間異極顯著（P＜0.01）。（見表2）

表1 黑線倉鼠及白化黑線倉鼠血液生理值測定Tab.1 Blood biochemical parameters in Cricetulus barabensis and Albinomutant

表2 黑線倉鼠及白化黑線倉鼠血清生化值測定Tab.2 Serum biochem ical parameters in Cricetulus barabensis and Albino mutant

注：P＜0.05，0.01表示黑線及白化倉鼠本身雌雄之間差異顯著或極顯著P＜0.05，0.01表示黑線及白化倉鼠之間比較差異顯著或極顯著。（雌雄分別比較）。

Note：P＜0.05，0.01means there is significant different between male and female in Cricetulus barabensis and Albino mutant；P* ＜0.05，0.01means there is obvious different between Cricetulus barabensis and Albinomutant.（Compared male and female respectively）

3 討論

實驗動物血液生理生化值是生物醫(yī)學(xué)研究的基礎(chǔ)指標(biāo)，是臨床醫(yī)療和科學(xué)研究的重要依據(jù)。不同品系（種）的動物血液正常生理生化值存在較大差異［4-7］，每個品系（種）的血液指標(biāo)都有其相對穩(wěn)定值，這也是區(qū)別各品系（種）的一個指標(biāo)［8］。黑線倉鼠及其白化突變系出自同一品系，具有相同的遺傳背景［3］，其本質(zhì)區(qū)別可通過分子標(biāo)記等技術(shù)進(jìn)行區(qū)別和鑒定。這兩種實驗動物在生物醫(yī)學(xué)研究中卻大有用途，它們是一對天然的對照組合，對于研究毛發(fā)發(fā)生機(jī)制、生長因子及其受體機(jī)制、白化機(jī)理、毛囊結(jié)構(gòu)等具有得天獨厚的優(yōu)勢，測定其生理生化值也將有助于其研究和應(yīng)用。

黑線倉鼠與白化黑線倉鼠大部分生理生化值與大、小鼠無明顯差異［5，6］，同種動物雌雄個體間在少數(shù)幾個指標(biāo)存在一定差異，如嗜堿性粒細(xì)胞的絕對值、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、血糖等，這可能與性別有關(guān)。而黑線倉鼠與其白化突變系之間的差異很值得注意：兩者雌雄間的嗜堿性粒細(xì)胞絕對值、堿性磷酸酶均存在極顯著差異，這或許與白化黑線倉鼠的變異有一定關(guān)系，這兩個指標(biāo)有助于將白化黑線倉鼠作為特殊動物模型的開發(fā)。另一個值得注意的特點是：黑線倉鼠與白化黑線倉鼠的血小板計數(shù)（PLT）均高于其它動物2～3倍［5-7］。血小板（PLT）增多是一種臨床常見的血液學(xué)表現(xiàn)，血小板量和質(zhì)的異常均可導(dǎo)致岀血性疾?。?-10］。而黑線倉鼠與白化黑線倉鼠血小板的異常表現(xiàn)可能有助于其作為血液病學(xué)研究的良好模型，此項研究正在進(jìn)一步證實中。

［1］K lumpp H，Lydia MF，F(xiàn)laviane CVB，Mario M.Experimental model in hamster（Mesocricetus auratus）to study heterologous graft of scars and cutaneous diseases in plastic surgery［J］.Acta Cir Bras，2004，19：68-78.

［2］James GF，Benett JC，F(xiàn)ranklin ML.Laboratory Animal Medicine［M］.Chapter 5：140-143.

［3］遇秀玲，鄭振鋒.白化黑線倉鼠解剖學(xué)與組織學(xué)特性的比較研究［J］.中國實驗動物學(xué)雜志，1991，3：60-62.

［4］Friedrich G，Soriano P.Promoter traps in embryonic stem cell：a genetic screen to identity and mutate developmental genes inmice［J］.Genes Dev.1991，5：1513-1523.

［5］王冬平，李慕，尚世臣，等.不同日齡SPF級KM小鼠血液生理生化正常指標(biāo)的探討［J］.實驗動物科學(xué)，2008，25 （4）：5-9.

［6］詹純列，肖育華，李新春，等.普通級、SPF級 SD、W istar大鼠血液生化值的測定與比較［J］.中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2004，14（2）：94-96.

［7］楊鋒，王紅星，何永亮，等.實驗Beagle犬血液學(xué)及血液生物化學(xué)參考值的探討［J］.中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2004，14（6）： 355-358.

［8］婁成民.實驗動物質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)與檢驗檢測技術(shù)實用手冊［M］.貴陽：貴州科技出版社，2003：1168.

［9］李偉皓，劉永春，王彩云，等.血小板參數(shù)對血小板增生性疾病的鑒別診斷價值［J］.檢驗醫(yī)學(xué)，2009，24（1）：57-59.

［10］金萊，胡慧仙，何芳，等.血小板參數(shù)與成人急性白血病相關(guān)性研究［J］.中國臨床保健雜志，2010，13（1）：84-85.