Galectin-3在胎膜早破孕婦胎膜中的表達(dá)及意義

榮衛(wèi)靈 ，王 南

1.湖南省東安縣人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖南東安 425900；2.中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院，湖南長(zhǎng)沙 410100

胎膜早破（premature rupture of fetal membranes，PROM）是臨產(chǎn)前胎膜發(fā)生破裂，分為足月前胎膜早破（preterm premature rupture of fetal membranes，PPROM）和足月胎膜早破（term premature rupture of membranes，TPROM）。在所有妊娠中PROM發(fā)生率為2.0%～3.5%，早產(chǎn)合并PROM占30%～40%，但其發(fā)病原因尚不完全明了[1]。宮內(nèi)感染（IAI）是其發(fā)病的最主要原因，占PPROM孕婦的25%～39%[2]。

Galectin-3是半乳糖凝集素家族成員之一，廣泛分布于多種組織，在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、黏附、凋亡方面起重要作用，并參與免疫調(diào)節(jié)[3]。Galectin-3在生殖領(lǐng)域的研究已逐漸被人們重視，但對(duì)于Galectin-3在絨毛膜羊膜炎及PROM中所發(fā)揮的作用尚無(wú)報(bào)道。本研究通過(guò)檢測(cè)Galectin-3在正常分娩孕婦胎膜及PROM孕婦胎膜中的表達(dá)及其變化，探討Galectin-3在PROM中所發(fā)揮的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

胎膜早破組：選取湖南省東安縣人民醫(yī)院婦產(chǎn)科2009年1月～2010年6月住院分娩的胎膜早破組50例，平均年齡（27.8.±3.1）歲；孕周 31+4～36+6周；其中，足月胎膜早破 26例（足月胎膜早破組），足月前胎膜早破24例（足月前胎膜早破組）。經(jīng)產(chǎn)后病理學(xué)檢測(cè)分為絨毛膜羊膜炎組和非絨毛膜羊膜炎組。對(duì)照組：選擇同期在湖南省東安縣人民醫(yī)院住院因社會(huì)因素剖宮產(chǎn)分娩的非胎膜早破的孕婦30例作為對(duì)照組，平均年齡（25.7±2.9）歲，孕 37～41 周。 所有病例均為初產(chǎn)婦，單胎，無(wú)內(nèi)外科合并癥及產(chǎn)科并發(fā)癥，近期無(wú)外傷和性交等誘因，年齡及孕次差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 胎膜早破診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]主訴陰道流液，pH試紙堿性變色，對(duì)可疑病例消毒后放窺陰器檢查見(jiàn)后穹隆有液體或手觸見(jiàn)宮頸口有羊水流出。

1.2.2 組織學(xué)絨毛膜羊膜炎[5]絨毛膜板及羊膜上白細(xì)胞呈彌散性聚集，白細(xì)胞浸潤(rùn)呈極性分布，中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)每高倍視野5～10個(gè)為輕度，11～30個(gè)為中度，＞30個(gè)為重度。

1.3 標(biāo)本收集及處理

所有產(chǎn)婦在胎盤胎膜娩出后立即直視下剪取距胎膜破口＞2 cm處的全層胎膜組織2塊，大小1 cm×1 cm，生理鹽水清洗表面羊水和血跡，固定于10%福爾馬林中，石蠟包埋，切片備用。

1.4 免疫組化

兔抗人Galectin-3多克隆抗體、免疫組化染色試劑盒SP-9000購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。石蠟切片脫蠟，蒸餾水沖洗3次，3%H2O2覆蓋10 min，滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，PBS漂洗5 min×3次，用枸櫞酸鈉進(jìn)行抗原修復(fù)20 min，PBS漂洗5 min×3次，滴加10%正常山羊血清孵育30 min，封閉非特異性抗原，滴加兔抗人 Galectin-3抗體（1∶50）37℃孵育2 h，PBS漂洗5 min×3次。滴加羊抗兔二抗37℃孵育15 min，滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液37℃孵育15 min，PBS漂洗5 min×3次，滴加DAB顯色劑顯色，應(yīng)用蘇木素復(fù)染2 min，沖洗，封片。顯微鏡下觀察，照相。

1.5 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

觀察陽(yáng)性反應(yīng)采用雙盲法，行半定量分析[6]。以光鏡下細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒者為陽(yáng)性。按染色強(qiáng)度評(píng)分：無(wú)色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；按陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比評(píng)分：陰性為0分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為 4分。 染色強(qiáng)度與陽(yáng)性百分比的乘積＞3為免疫反應(yīng)陽(yáng)性。并按乘積分?jǐn)?shù)分為 4 個(gè)等級(jí)：-（0，1，2 分）；+（3，4 分）；++（6，8 分）；+++（9，12分），根據(jù)兩位有經(jīng)驗(yàn)的病理科醫(yī)師雙盲計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)，將“-”、“+”判定為陰性，將“++”、“+++”判定為陽(yáng)性。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)結(jié)果均應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 16.0處理，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組Galectin-3的表達(dá)情況

Galectin-3蛋白的陽(yáng)性表達(dá)主要集中在絨毛膜滋養(yǎng)層胞質(zhì)及胞核中，以胞漿為主，呈棕色或黃色，在羊膜層和蛻膜層亦有少量表達(dá)，其在胎膜早破組表達(dá)明顯增強(qiáng)（圖1～2）。

在胎膜早破組與對(duì)照組比較，Galectin-3的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Galectin-3在足月前胎膜早破組與足月胎膜早破組均有表達(dá)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

2.2 Galectin-3表達(dá)與絨毛膜羊膜炎的關(guān)系

產(chǎn)后對(duì)全體孕婦行胎膜病理檢查，其中重度絨毛膜羊膜炎者16例，占20.0%，中度絨毛膜羊膜炎者14例，占17.5%，中重度絨毛膜羊膜炎患者均見(jiàn)于胎膜早破組；輕度絨毛膜羊膜炎者13例，占16.3%，其中胎膜早破組 11例（13.8%），對(duì)照組僅有2例（2.5%）。見(jiàn)表2。

與非絨毛膜羊膜炎組比較，Galectin-3在絨毛膜羊膜炎組絨毛膜滋養(yǎng)層、羊膜層和蛻膜層的表達(dá)明顯增加（圖3～4）。同時(shí)，隨著絨毛膜羊膜炎的病理分級(jí)不同，Galectin-3的表達(dá)的陽(yáng)性率也不同，且隨著病理炎癥程度的增加，其表達(dá)的陽(yáng)性率也增加。見(jiàn)表3。

表1 各組Galectin-3的表達(dá)情況

表2 兩組病理檢查結(jié)果比較（例）

3 討論

胎膜早破的發(fā)病機(jī)制至今尚未完全明確，一般認(rèn)為是多因素造成的[7-8]，但在胎膜早破中胎膜局部最基本的病理變化是炎癥和胎膜本身結(jié)構(gòu)改變，炎性反應(yīng)在胎膜早破發(fā)生中的作用越來(lái)越受到重視。

Galectin-3是一種β-半乳糖結(jié)合蛋白，主要存在于細(xì)胞質(zhì)中，但也可以在細(xì)胞核、細(xì)胞表面或者細(xì)胞外，其功能具有多樣性[9]。現(xiàn)已證實(shí)Galectin-3參與許多生理和病理過(guò)程，包括細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞黏附、炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)、腫瘤轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)移及細(xì)胞凋亡。近來(lái)的研究表明其在急性炎癥反應(yīng)及固有性免疫的調(diào)節(jié)中作為一種細(xì)胞因子發(fā)揮著重要的作用[10-11]。

表3 Galectin-3的表達(dá)與絨毛膜羊膜炎的關(guān)系

本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化的方法檢測(cè)胎膜早破組和對(duì)照組胎膜中Galectin-3的表達(dá)情況，結(jié)果表明Galectin-3在PROM組胎膜中的表達(dá)明顯高于對(duì)照組。且Galectin-3的表達(dá)與絨毛膜羊膜炎有關(guān)，炎癥程度越高，Galectin-3的表達(dá)陽(yáng)性率越高，表明PROM與絨毛膜羊膜炎密切相關(guān)。

多項(xiàng)研究表明PROM與感染有關(guān)[12]，而Galectin-3正是在免疫調(diào)節(jié)、炎性反應(yīng)中發(fā)揮了重要作用。Galectin-3被認(rèn)為是一種促炎因子，在炎癥的急性期，Galectin-3可能發(fā)揮著減弱細(xì)胞間黏附、促壞死細(xì)胞脫落的作用；而到炎癥晚期，Galectin-3高表達(dá)時(shí)，它將促進(jìn)細(xì)胞間細(xì)胞-基質(zhì)間黏附。在炎癥反應(yīng)中，Galectin-3主要在兩個(gè)方面扮演了重要的角色：①存在于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核的Galectin-3呈現(xiàn)強(qiáng)大的促炎作用，促進(jìn)炎性細(xì)胞活化，抑制免疫細(xì)胞凋亡，促進(jìn)炎癥反應(yīng)[13]。②在細(xì)胞核高表達(dá)的Galectin-3促進(jìn)細(xì)胞增殖，加速細(xì)胞的損傷修復(fù)[14]。

目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)有關(guān)Galectin-3表達(dá)與PROM相關(guān)的報(bào)道，但筆者通過(guò)本實(shí)驗(yàn)證實(shí)Galectin-3的陽(yáng)性表達(dá)與PROM存在一定的相關(guān)性，且Galectin-3的陽(yáng)性表達(dá)率隨PROM患者絨毛膜羊膜炎炎癥程度的增加而增加。我們推測(cè)PROM患者胎膜中Galectin-3表達(dá)增加與白介素、IFN-γ釋放相關(guān)，且Galectin-3表達(dá)的增加促進(jìn)了細(xì)胞間細(xì)胞-基質(zhì)間的黏附，促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶的合成，從而降解細(xì)胞外基質(zhì)，使胎膜變薄，導(dǎo)致胎膜破裂的發(fā)生。

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