復(fù)方苦參注射液對輔助化療非小細(xì)胞肺癌患者免疫功能的影響

左占杰，辛永祥，張洪波，李 偉，王 靜，王蛟龍，王建東(武警北京總隊(duì)醫(yī)院胸部腫瘤治療中心，北京100027)

肺癌是一種常見的惡性腫瘤，而非小細(xì)胞肺癌的發(fā)病率占肺癌的80%，由于早期缺乏特異性癥狀，就診時(shí)大多數(shù)患者已為Ⅲ～Ⅳ期，失去了手術(shù)機(jī)會，化療就成為其主要治療手段，而化療具有嚴(yán)重消化道反應(yīng)和其他不良反應(yīng)，且患者免疫功能低下，化療同時(shí)應(yīng)用中西醫(yī)結(jié)合的方法，可在一定程度上避免或減輕化療的不良反應(yīng)，提高患者的免疫功能。復(fù)方苦參注射液是以苦參、白茯苓為原料經(jīng)科學(xué)提煉而制成的，其主要成份為苦參堿，與細(xì)胞周期非特異性抗腫瘤藥聯(lián)用有協(xié)同增效作用，可預(yù)防化療藥的不良反應(yīng)，并能提高腫瘤患者免疫功能，起到增效減毒的功效［1］。筆者從2008年9月—2010年12月對146例肺癌患者常規(guī)化療過程中加用復(fù)方苦參注射液治療，用測定皮膚遲發(fā)型超敏反應(yīng)的方法［舊結(jié)核菌素皮試(OT)法］、巨噬細(xì)胞吞噬功能的測定，觀察治療前后機(jī)體細(xì)胞免疫能的變化，并選取同期單純采用常規(guī)化療的122例患者作對照，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

268例患者均因患非小細(xì)胞肺癌住院行輔助化療，化療前有明確的病理診斷及分期。分為治療組146例，男性82例，女性64例;年齡50～74歲，中位年齡65.3歲;病程1～6.5個(gè)月，平均(3.5±2.0)個(gè)月;臨床分期:Ⅱa期 30例，Ⅱb期 34例，Ⅲa期45例，Ⅲb期22例，Ⅳ期15例;病理類型:鱗癌56例，腺癌68例，腺鱗癌12例，大細(xì)胞癌6例。對照組122例，男性73例，女49例;年齡51～75歲，中位年齡63.8歲;病程1～6.0個(gè)月，平均(3.8±2.5)個(gè)月;臨床分期:Ⅱa期 25例，Ⅱb期 38例，Ⅲa39期例，Ⅲb期12例，Ⅳ期8例;病理類型:鱗癌42例，腺癌56例，腺鱗癌16例，大細(xì)胞癌8例。2組患者年齡、性別、病理及化療方案無顯著性差異(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 化療方法:2組化療采用化療4～6周期，方案為 GC(吉西他濱 +順鉑)、NC(長春瑞濱 +順鉑)、PC(紫杉醇 +順鉑)治療2周期評價(jià)療效。治療組加用復(fù)方苦參注射液，15 mL，1日1次，隨化療藥同時(shí)靜脈滴注。全部病例在治療前后測定OT皮試反應(yīng)能力及巨噬細(xì)胞吞噬率。

1.2.2 OT皮試:通常在前臂掌側(cè)，皮內(nèi)注射0.1 mL不同稀釋度(1∶100～1∶100000)的舊結(jié)核菌素，72 h后測定皮試點(diǎn)皮膚的紅腫、硬結(jié)的直徑大小。

1.2.3 巨噬細(xì)胞吞噬功能的測定(皮泡試驗(yàn)):用眼科鑷子取1 cm2大小的濾紙2張，蘸上10%中藥斑蝥乙醇浸出液放置在前臂屈側(cè)皮膚上，48 h后前臂皮膚上形成1個(gè)水泡，抽取水泡滲出液1～2 mL，置入含有2片蓋片的試管中，加入5%雞紅細(xì)胞懸液0.01 mL混勻，在37℃水浴作用30 min，每隔10 min搖動1次。取出雙層蓋片，0.9%氯化鈉注射液沖洗后以兩外側(cè)面平置載玻片上，干燥后固定，姬姆薩氏染色，在油鏡下觀察100個(gè)巨噬細(xì)胞吞有雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)。

1.2.4 正常標(biāo)準(zhǔn)的判斷:(1)OT反應(yīng):局部微紅疹，無硬結(jié)為陰性;紅疹、硬結(jié)直徑達(dá)5～10 mm為陽性;紅疹、硬結(jié)直徑＜5 mm為可疑。正常情況下，紅疹、硬結(jié)直徑大于 5 mm。(2)皮泡試驗(yàn)巨噬細(xì)胞吞噬百分比，參照正常值為(64.7±2.43)%。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包，計(jì)量資料采用方差分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 治療前后OT皮試反應(yīng)能力

觀察不同稀釋度1∶100～1∶100000的舊結(jié)核菌素0.1 mL皮內(nèi)注射引起的遲發(fā)型皮膚變態(tài)反應(yīng)。同一病例治療前后OT皮試反應(yīng)能力的對比，以陽性O(shè)T稀釋度增強(qiáng)的倍數(shù)表示:如治療前是1∶100，治療后為1∶500，則表示為5倍。治療組接受復(fù)方苦參注射液輔助治療后皮試反應(yīng)能力的增減變化:增加5倍以上11例(7.53%)，增加 ＞10倍53例(36.30%)，增加 ＞20倍56例(38.36%)，無變化20例(13.70%)，下降6例(4.11%)。對照組治療后皮試反應(yīng)能力的增減變化:增加5倍以上33例(27.05%)，增加 ＞10倍 38例(31.15%)，增加 ＞20倍14例(11.48%)，無變化 23例(18.85%)，下降 14例(11.48%)。治療后OT皮試反應(yīng)能力治療組顯著高于對照組(P ＜0.05)，見表1。

表1 2組治療前后OT皮試反應(yīng)能力比較Tab 1 Results of OT test in two groups before and after treatment

2.2 治療前后巨噬細(xì)胞吞噬率

觀察巨噬細(xì)胞吞噬率的增減變化，以治療前后分子數(shù)增強(qiáng)的多少來表示。治療組接受復(fù)方苦參注射液輔助治療后巨噬細(xì)胞吞噬率變化:下降11例(7.5%)，無變化6例(4.1%)，增加10%48例(32.8%)，增加20%66例(45.2%)，增加 30%15例(10.2%)。對照組治療后巨噬細(xì)胞吞噬率變化:下降13例(10.6%)，無變化 36例(29.5%)，增加 10%32例(26.2%)，增加 20%30例(24.5%)，增加 30%11例(9.0%)。治療后巨噬細(xì)胞吞噬率治療組顯著高于對照組(P＜0.05)，見表2。

表2 2組治療前后巨噬細(xì)胞吞噬率比較Tab 2 Macrophages’phagocytic rate of in two groups before and after treatment

2.3 治療前后Treg細(xì)胞水平的變化

調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞(Treg細(xì)胞、CD4+、CD25+、FoxP3+)是一類具有免疫調(diào)節(jié)功能的T細(xì)胞亞群，在維持機(jī)體免疫自穩(wěn)、調(diào)控免疫應(yīng)答方面起重要作用，在抗腫瘤免疫中，Treg發(fā)揮抑制效應(yīng)［2］。有研究提示，腫瘤患者 Treg細(xì)胞占全 T細(xì)胞的比例上升，Treg與CD8+T細(xì)胞相互接觸作用后抑制了CD8+T細(xì)胞的殺傷效應(yīng)［3］。本組采用流式細(xì)胞儀檢測技術(shù)檢測化療前后患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中Treg細(xì)胞水平的變化，治療組后Treg細(xì)胞表達(dá)水平顯著下調(diào)，由治療前的6.30±2.14降至4.03±1.41，而對照組無變化，分別為 6.34±2.25和6.62±1.87，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表3。

表3 2組治療前后Treg細(xì)胞百分率比較(±s，%)Tab 3 Percentages of Treg cells in two groups before and after treatment(±s，%)

表3 2組治療前后Treg細(xì)胞百分率比較(±s，%)Tab 3 Percentages of Treg cells in two groups before and after treatment(±s，%)

注:經(jīng)方差分析，F(xiàn)=11084，與其他組相比，*P＜0.05note:via F test，F(xiàn)=11084，*P ＜0.05

組別 n 化療前 化療后治療組 146 6.30±2.14 4.03±1.41*122 6.34±2.25 6.62±1.87對照組

3 討論

肺癌患者多伴有體質(zhì)虛弱，免疫功能低下，因此近年來臨床上多采用中藥輔助化療，提高患者免疫功能，以提高其治療效果及患者生存質(zhì)量。大量的實(shí)驗(yàn)研究表明:苦參具有明顯的止痛、抗癌、提高免疫力、止血等作用［4］。段萍等［5］對晚期非小細(xì)胞肺癌化療中使用復(fù)方苦參注射液統(tǒng)計(jì)血清 IgM、IgG含量明顯增高，與對照組相比有顯著性差異，提示復(fù)方苦參注射液輔助非小細(xì)胞肺癌化療可以減少不良反應(yīng)，提高機(jī)體的免疫功能和改善生活質(zhì)量。復(fù)方苦參注射液對B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的免疫功能有增強(qiáng)作用，因而使機(jī)體的體液免疫和細(xì)胞免疫功能都有增強(qiáng)，發(fā)揮抗癌作用［6］。因此復(fù)方苦參注射液對改善晚期肺癌化療患者細(xì)胞免疫功能有一定意義。王琳等［7］關(guān)于復(fù)方苦參注射液配合化療治療晚期非小細(xì)胞肺癌44例對化療后外周血CD3+、CD4+細(xì)胞的數(shù)量及CD4+/CD8+細(xì)胞比值均較化療前顯著下降，復(fù)方苦參注射液可提高臨床療效，降低化療不良反應(yīng)，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，改善生存質(zhì)量。OT皮試屬遲發(fā)型皮膚過敏反應(yīng)，是細(xì)胞免疫功能狀態(tài)的一種表現(xiàn)。我國人群普遍存在抗結(jié)核菌的基礎(chǔ)免疫力。因此，采用OT皮試測定細(xì)胞免疫功能活性是最有代表性的客觀指標(biāo)。巨噬細(xì)胞是細(xì)胞免疫力的重要組成部分，Treg在調(diào)控免疫應(yīng)答方面起重要作用。本研究表明，經(jīng)復(fù)方苦參注射液輔助治療后，通過監(jiān)測巨噬細(xì)胞吞噬率、OT皮試反應(yīng)能力及Treg細(xì)胞水平的變化，均較單純化療患者組有顯著差別，提示復(fù)方苦參注射液對提高非小細(xì)胞肺癌化療患者細(xì)胞免疫功能有顯著意義。因此，在肺癌患者的化療過程中聯(lián)合使用復(fù)方苦參注射液對肺癌患者免疫功能的恢復(fù)具有重要意義，值得臨床進(jìn)一步推廣使用。

［1］ 韓福才，康金秀，李麗珍，等.巖舒對肺癌患者免疫功能的影響［J］.山西醫(yī)藥雜志，1999，28(1):74.

［2］ Fontenot JD，Gavin MA，Rudensky AY.Foxp3 programs the development and function of CD4+CD25+regulatory T cells［J］.Nat Immunol，2003，4(4):330.

［3］ Born WK，Reardon CL，O’Brien RL.The function of gammadelta T cells in innate immunity［J］.Curr Opin Immunol，2006，18(1):31.

［4］ 陳建清，唐耀華，吳曉安.復(fù)方苦參注射液治療癌痛的療效觀察［J］.四川腫瘤防治，2002，15(4):236.

［5］ 段 萍，肖敏偉，肖 文，等.復(fù)方苦參注射液在晚期非小細(xì)胞肺癌化療中的增效減毒作用［J］.中國新藥雜志，2009，18(18):1760.

［6］ 石 彥，余佩武，曾冬竹，等.復(fù)方苦參注射液對胃癌術(shù)后化療患者免疫功能的影響［J］.藥學(xué)服務(wù)與研究，2006，6(3):183.

［7］ 王 琳，劉 華，謝賢和，等.復(fù)方苦參注射液配合化療治療晚期非小細(xì)胞肺癌44例［J］.陜西中醫(yī)，2009，30(12):1574.