氨杞精口服液對小鼠耐缺氧及抗疲勞作用的實驗研究

翟登奎(哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，哈爾濱 150001)

近年來，關(guān)于加速運動疲勞的消除，促進運動能力恢復(fù)的營養(yǎng)品和違禁藥物的研究，在運動人體科學(xué)領(lǐng)域非常活躍。有研究報道了有關(guān)中藥配方制劑及單體成分促進機體恢復(fù)的作用［1，2］。氨杞精口服液是由天然提取的氨基酸粉(含有20多種天然氨基酸)，加上具有滋補肝腎、益精明目作用的枸杞子及具有補氣養(yǎng)陰、健脾、潤肺、益腎作用的黃精共同組方，制成純天然的多功能的免疫制劑［3］。該藥主治氣血雙虛、扶正固本、肝腎不足、脾腎虛弱等各種臨床虛癥療效頗佳。臨床上適用于各種貧血、白血病、久病體弱、心肌炎、各型肝炎、肝炎后肝硬化、胃及十二指腸潰病、慢性結(jié)腸炎、慢性腎炎、慢性氣管炎、肺氣腫等癥，有明顯的輔助治療作用。能提高機體的免疫功能，減輕腫瘤患者因化療引起的食欲不振、白細(xì)胞計數(shù)減少等癥。本實驗從生物學(xué)的角度以小鼠為實驗動物，研究氨杞精口服液對小鼠耐缺氧、抗疲勞作用的影響。

1 材料與方法

1.1 藥品

氨杞精口服液由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院生產(chǎn)提供，批號:20090709。

1.2 實驗動物

昆明種小鼠，雌雄各75只，體質(zhì)量20～25 g，由黑龍江省中醫(yī)藥大學(xué)提供。

1.3 儀器

電子分析天平、721分光光度計、全自動生化分析儀、游泳箱(40 cm×55 cm×55 cm)。

1.4 方法

將150只小鼠隨機分為3組，每組50只?？瞻讓φ战M:給予低劑量容積0.9%氯化鈉注射液;低劑量組:給予氨杞精口服液 3.2 mL·kg-1;高劑量組:給予氨杞精口服液 6.3 mL·kg-1，qd，連續(xù)灌胃30 d后進行抗疲勞及耐缺氧實驗。

1.5 負(fù)重游泳試驗

每組10只小鼠末次灌胃30 min后，尾根部負(fù)荷小鼠體質(zhì)量5%的鉛絲，置于游泳箱中，水深32 cm，水溫30℃，記錄小鼠從游泳開始至死亡的時間。

1.6 耐缺氧實驗

每組10只小鼠末次灌胃1 h后，將小鼠逐只放進盛有鈉石灰10 g的250 mL密閉的廣口瓶中，瓶蓋涂以凡士林密封，觀察并記錄每組小鼠存活時間。

1.7 血清尿素氮測定

每組10只小鼠末次灌胃30 min后，將小鼠放于水溫30℃置于游泳箱中游泳90 min，休息60 min，將眼睛周圍的水擦拭干凈后摘眼球取血，離心取血清測定。

1.8 肝糖原、肌糖原測定

每組10只小鼠末次灌胃30 min后，將小鼠放于水溫30℃置于游泳箱中游泳90 min停止，立即處死小鼠取出肝臟及股四頭肌，放入液氮罐待測，按試劑盒說明書測定。

1.9 血乳酸的測定

每組10只小鼠末次灌胃30 min后，尾根部負(fù)荷小鼠體質(zhì)量5%的鉛絲，將小鼠放于水溫30℃置于游泳箱中負(fù)重游泳10 min停止，分別從游泳前、游泳之后0 min、游泳之后休息20 min的小鼠眼內(nèi)眥靜脈叢取血20 μL進行乳酸測定。

1.10 指標(biāo)測定方法

血乳酸、肝糖原、肌糖原、血清尿素氨等試劑盒購自南京建成生物工程研究所，操作按說明書進行。

1.11 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 氨杞精口服液對小鼠負(fù)重游泳、耐缺氧能力實驗

低、高劑量組小鼠負(fù)重游泳時間均明顯長于對照組(P﹤0.05)，表明該樣品具有延長小鼠的負(fù)重游泳時間的作用;低、高劑量組可以明顯延長小鼠在密閉缺氧條件下的存活時間，提高心腦耐缺氧能力，降低組織耗氧量，見表1。

表1 氨杞精口服液對小鼠負(fù)重游泳、耐缺氧實驗的影響(±s，n=10)Tab 1 Effects of Anqijing oral solution on loaded swimming and hypoxia-tolerance experiments(±s，n=10)

表1 氨杞精口服液對小鼠負(fù)重游泳、耐缺氧實驗的影響(±s，n=10)Tab 1 Effects of Anqijing oral solution on loaded swimming and hypoxia-tolerance experiments(±s，n=10)

注:與對照組相比:*P﹤0.01note:vs.control group:*P﹤0.01

組別 數(shù)目/只 負(fù)重游泳時間/s 耐缺氧時間10 606±135 960±150低劑量組 10 682±167 1356±228高劑量組 10 884±173* 1440±386對照組*/s

2.2 氨杞精口服液對小鼠血清尿素氮水平、肝糖原和肌糖原含量的影響

低、高劑量組小鼠游泳90 min，休息60 min后測定的血清尿素氮含量均低于對照組;低、高劑量組小鼠90 min游泳后肝糖原、肌糖原含量均明顯高于對照組，差異有顯著性(P﹤0.05)，表明氨杞精口服液具有延緩疲勞出現(xiàn)的作用，見表2。

表2 氨杞精口服液對小鼠血清尿素氮水平、肝糖原和肌糖原含量的影響(±s，n=10)Tab 2 Effects of Anqijing oral solution on serum concentrations of BUN，hepatic glycogen and muscle glycogen(±s，n=10)

表2 氨杞精口服液對小鼠血清尿素氮水平、肝糖原和肌糖原含量的影響(±s，n=10)Tab 2 Effects of Anqijing oral solution on serum concentrations of BUN，hepatic glycogen and muscle glycogen(±s，n=10)

注:與對照組相比:*P﹤0.05note:vs.control group:*P﹤0.01

組別 數(shù)目/只 血尿素水平/mmol·L-1肝糖原/mg·g-1肌糖原/mg·g -1 10 9.12±0.57 12.1±1.5 1.5±0.9低劑量組 10 8.73±0.62 15.6±4.5 1.7±0.4高劑量組 10 6.69±1.17 22.9±6.2* 2.1±0.7對照組*

2.3 氨杞精口服液對小鼠血乳酸含量的影響

運動后20 min內(nèi)血乳酸含量分別降低并趨于正常對照組，說明氨杞精口服液具有促進體力性疲勞消除的積極作用。

表3 氨杞精口服液對小鼠血乳酸含量的影響(±s，n=10)Tab 3 Effects of Anqijing oral solution on serum concentration of lactic acid(±s，n=10)

表3 氨杞精口服液對小鼠血乳酸含量的影響(±s，n=10)Tab 3 Effects of Anqijing oral solution on serum concentration of lactic acid(±s，n=10)

注:與對照組相比:*P﹤0.05note:vs.control group:*P﹤0.01

組別 數(shù)目/只 游泳前 游泳后10 25.1±4.5 44.5±4.8 30.3±6.7低劑量組 10 23.3±4.6 41.7±5.6 25.7±3.2高劑量組 10 22.9±4.5 35.1±4.1* 22.6±2.70 min 20 min對照組*

3 討論

氨杞精口服液的主要成分為氨基酸、枸杞、黃精等組成。氨基酸是生命機體的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，每個細(xì)胞的重要組成部分都要氨基酸的參與，是大分子蛋白質(zhì)的基本組成單位，是構(gòu)成動物營養(yǎng)所需蛋白質(zhì)的基本物質(zhì)。氨基酸的作用不僅可以合成機體的組織蛋白質(zhì)，轉(zhuǎn)變?yōu)橹匾衔?，如嘌呤、腎上腺素、甲狀腺素等，而且可以氧化分解產(chǎn)生能量，尤其是精氨酸是參與合成肌酸供給ATP能量的重要原料，沒有氨基酸就沒有生命。枸杞(lycium chinense)是茄科(solanacease)落葉小灌木的成熟果實，是我國傳統(tǒng)的中藥材，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》、《本草綱目》:“枸杞久遠(yuǎn)，補精氣不足，易容顏變白，明目安神，令人長壽”。主要藥效成分包括菜堿、多糖、硫胺素、核黃素、胡蘿卜素、抗壞血酸等，具有增強免疫、降血糖、造血及保肝作用。黃精(polygonatum sibiricum Red)又名老虎姜，太陽草、雞頭參，是百合科黃精屬多年生草本植物的干燥根莖，始載于《名醫(yī)別錄》李時珍引《神仙草芝經(jīng)》云:“黃精寬中益氣，使五臟調(diào)和，肌肉充盈，骨髓堅強，其力倍增，多年不老，顏色顯明，發(fā)白更黑，齒落更生?！逼浠瘜W(xué)成分主要有:黃精多糖、甾體皂苷、蒽醌類化合物、生物堿、強心苷、維生素和多種對人體有用的氨基酸等化合物。以上3種組成成分均具有抗疲勞作用［4-6］。

運動性疲勞即指由機體運動本身所引起的機體生理過程不能持續(xù)其機能在一特定水平上和(或)不能維持預(yù)定的運動強度的機體運動能力下降的現(xiàn)象［7］。其評價方法主要有2種:運動耐力試驗和檢測引起疲勞的生化指標(biāo)的改變［8］。測定機體持續(xù)運動直至力竭的時間可以反應(yīng)機體的耐力，運動耐力是反映機體疲勞最直觀的指標(biāo)，本實驗選擇了小鼠的負(fù)重游泳試驗，運動時正是由于生化改變才導(dǎo)致了疲勞感覺的發(fā)生，因此本實驗選擇運動時變化明顯、其變化程度與運動負(fù)荷和強度一致的4項生化指標(biāo)作為抗疲勞的評價指標(biāo)。本實驗結(jié)果表明氨杞精口服液的抗疲勞作用可能與增加肝糖原、肌糖原的儲備有關(guān);其次，乳酸是糖酵解的主要代謝產(chǎn)物，劇烈運動時，機體相對缺氧，糖酵解加快，乳酸大量堆積，導(dǎo)致疲勞。乳酸在體內(nèi)的積累取決于乳酸的產(chǎn)生與消除速度。因此，減少血乳酸的產(chǎn)生或加快血乳酸的消除，都可延緩疲勞發(fā)生和/或加速疲勞的消除。缺氧是一種緊張性刺激，可以引起機體產(chǎn)生各種應(yīng)激性反應(yīng)，生命活動中腦和心臟缺氧是小鼠常壓缺氧死亡的主要原因。

本實驗與其他實驗相比:小鼠負(fù)重游泳時間要長于枸杞口服液及黃精多糖［5，6］，血尿素氮水平基本接近于枸杞口服液，耐缺氧能力稍高于養(yǎng)正合劑［9］;給予小鼠連續(xù)灌胃氨杞精口服液30 d，能延長小鼠的負(fù)重游泳時間、耐缺氧時間，增加小鼠的肝糖原、肌糖原的儲備量，減少小鼠運動后的血乳酸曲線下面積，對小鼠的血清尿素氮無明顯影響，表明氨杞精口服液具有抗疲勞、耐缺氧功能。

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