GC-MS法測定松茸中主要脂肪酸的含量

劉 剛，王 輝，周本宏

武漢大學(xué)人民醫(yī)院藥學(xué)部，湖北武漢 430060

松茸（Tricholoma matsutake Sing.）亦稱松蕈、松口蘑，是一種珍貴的可食用真菌[1-2]，屬于口蘑科、口磨屬（Tricholoma）的一個種。具有強身、理氣、止痛、益腸胃、治療糖尿病、抗腫瘤等功效[2-3]。松茸在世界上分布范圍很廣，主要分布于朝鮮、日本、加拿大、美國和北歐國家。在我國主要分布在東北吉林省，西南地區(qū)的云南、四川、西藏。松茸香氣宜人，菌肉肥厚，味道鮮美，含有大量的蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、礦物質(zhì)元素和微量元素，具有很高的營養(yǎng)價值和藥用價值[4-5]，曾被譽為“食用菌之王”[6]。近年來國內(nèi)外對松口蘑的研究已有許多報道，大多是有關(guān)馴化培養(yǎng)、產(chǎn)品粗加工、資源保護等方面的研究[7-8]，但對于松茸脂肪酸方面的研究較少。本文研究了松茸中脂肪酸種類及含量，為進(jìn)一步揭示其藥用和保健作用，更好地開發(fā)和利用該植物資源提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

島津GC-14A氣相色譜儀（日本），VGMM-7070H質(zhì)譜儀（英國），索氏提取器；石油醚、氫氧化鈉、甲醇、正己烷等試劑均為分析純，購于武漢博大試劑公司。松茸（購于云南）經(jīng)武漢大學(xué)人民醫(yī)院張洪教授鑒定為口蘑科、口磨屬松茸。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品制備

取松茸粉末約5.0 g，精密稱定，置索氏提取器中，加100 ml石油醚，提取8 h。減壓回收石油醚，得到總脂。精密稱取總脂約4 mg，加入 1 ml 1.5%NaOH甲醇溶液，振蕩 2 min，置于60℃水浴條件下回流30 min，冷卻。向甲酯化后的溶液中加0.5 ml左右的蒸餾水，然后用9 ml正己烷分三次萃取，合并萃取液。

2.2 氣相色譜條件

色譜柱為SE-54石英毛細(xì)管色譜柱 （30 m×0.32 mm），采用程序升溫，柱溫180℃以2℃/min升溫至210℃，再以1℃/min升溫至220℃，接著以 10℃/min升溫到 250℃，保留 2 min；進(jìn)樣溫度 230℃，載氣為氮氣，進(jìn)樣量 0.2 μl，分流比 25∶1，測定時間共30 min。

2.3 質(zhì)譜條件

VGMM-7070H質(zhì)譜儀，分辨率為600，EI電離源，電子能量70 eV，離子源溫度200℃，連接器溫度為250℃，溶劑延遲 3.5 min，掃描質(zhì)量范圍 50～600 amu，電子倍增器電壓1 200 V。

2.4 結(jié)果

按照上述實驗條件進(jìn)樣，得到松茸脂肪酸氣相色譜圖，見圖1。對總離子流圖中各峰經(jīng)質(zhì)譜掃描后得到質(zhì)譜圖，通過Xcalibur工作站NIST標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫進(jìn)行檢索，與文獻(xiàn)的質(zhì)譜數(shù)據(jù)對照，確認(rèn)各化合物，按峰面積歸一化法計算各化合物在總脂中的相對含量，見表1。

表1 松茸脂肪酸組成Tab.1 Fatty acid compositions ofTricholoma matsutakeSing.

筆者將松茸中脂肪酸的含量與其他幾種口蘑屬真菌做比較[9]（表2），幾種口蘑屬真菌脂肪酸中不飽和脂肪酸的含量都在65%以上，松茸不飽和脂肪酸的含量達(dá)到85.3%。

3 討論

由實驗結(jié)果可以看出，松茸中油酸的含量非常高，而亞油酸的含量不到油酸含量的一半，與其他幾種同屬真菌有較大差異，雖然這一特性對脂肪含量較低的松茸營養(yǎng)價值評價并不重要，但是亞油酸和油酸的比值卻是區(qū)別同屬不同種植物的一個重要參數(shù)，對植物分類具有重要意義。需要指出的是，在真菌脂肪酸的研究中，還沒有發(fā)現(xiàn)奇數(shù)碳原子的脂肪酸，具體原因還有待進(jìn)一步研究[10]。

此外，松茸中不飽和脂肪酸的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于飽和脂肪酸，這與文獻(xiàn)報道的不飽和脂肪酸在食用菌脂肪酸中占絕對優(yōu)勢的結(jié)論一致[11]。其中油酸、亞油酸和棕櫚酸的含量占脂肪酸的93.4%，而肉豆蔻酸、棕櫚油酸和硬脂酸的含量非常低。油酸、亞油酸等可有效地清除人體血液中的垃圾，延緩衰老，還有降低膽固醇的含量和血液黏稠度，預(yù)防高血壓、動脈粥樣硬化和腦血栓等心腦血管系統(tǒng)疾病的作用[12]。

從松茸脂肪酸的組成與含量分析來看，松茸具有較高的營養(yǎng)價值和醫(yī)療保健功效，有較高的開發(fā)價值，本研究結(jié)果將為松茸的藥用、食用等方面的進(jìn)一步開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

表2 菌類脂肪酸組成比較（%）Tab.2 Comparison of fatty acids compositions of mushrooms

[1]劉培貴,袁明生,王向華,等.松茸松口蘑群生物資源及其合理利用與保護[J].自然資源學(xué)報,1999,14(3)：245-252.

[2]周選圍.松茸資源研究概況[J].食用菌學(xué)報,2002,9(1)：50-56.

[3]郭愛蓮.珍貴食用菌松茸的研究概況[J].西北輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報,1996,14(3)：111-114.

[4]Gang L,Hui W,Benhong Z,et al.Compositional analysis and nutritional studies of Tricholoma matsutake collected from Southwest China[J].J Med Plant Res,2010,4(12)：1222-1227.

[5]劉剛,王輝,周本宏.松茸氨基酸含量的測定及營養(yǎng)評價[J].中國食用菌,2007,26(5)：51-52.

[6]劉萍,陶文沂,尹光耀,等.松口蘑及其活性物質(zhì)研究進(jìn)展[J].食用菌報,2001,8(4)：54-58.

[7]傅祿敏.松口蘑的研究熱點[J].食用菌學(xué)報,2003,10(3)：49-50．

[8]Gurein L,Alexis V,Lu M,et al．Growth stimulation of a Shimlike,mycorrhiza forming,mycelium of Tricholoma matsutake on solid substrates by nonionic surfaetants or vegetable oil[J].Mycological Progress,2003,2(1)：37-44.

[9]Senatore F,Dini A,Cerri R,et al.Chemical constituents of some Tricholomataceae[J].Biochem Syst Ecol,1987,15：639-641.

[10]Senatore F.Fatty acid and free amino acid content of some mushrooms[J].J Sci Food Agr,1990,51：91-96.

[11]Kalac P.Chemical composition and nutritional value of European species of wild growing mushrooms：A review [J].Food Chem,2009,113：9-16.

[12]胡銳,李寶莉.傳統(tǒng)藥物中脂肪酸的藥理活性和現(xiàn)代研究[J].中外醫(yī)療,2008,(27)：135-136.