HPLC法測定徐長卿藥材和丹皮酚注射液中丹皮酚的含量

郭琳 郭東軍

(錦州市食品藥品檢驗所 遼寧錦州 121000)

HPLC法測定徐長卿藥材和丹皮酚注射液中丹皮酚的含量

郭琳 郭東軍

(錦州市食品藥品檢驗所 遼寧錦州 121000)

目的 建立徐長卿藥材和丹皮酚注射液中丹皮酚的含量測定方法。方法 色譜柱:Venusil XBP-C18(200mm×4.6mm,5μm);流動相:甲醇—水(70∶30,v/v);流速:1.0mL·min-1;檢測波長:274nm。結(jié)果 丹皮酚在0.03225～12.9μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9999),藥材和丹皮酚注射液樣品的平均回收率分別為97.8%和98.6%,RSD分別為1.2%和1.3%。結(jié)論 本法快速、準(zhǔn)確,可有效控制徐長卿藥材和丹皮酚注射液的內(nèi)在質(zhì)量。

徐長卿 丹皮酚注射液 HPLC

徐長卿為我國的傳統(tǒng)中藥,始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,為摩蘿科植物徐長卿的干燥根及根莖[1]。丹皮酚[2]又名牡丹酚,化學(xué)名為2-羥基-4-甲氧基-苯乙酮,易揮發(fā),易溶于多種有機溶劑。目前對于牡丹皮中丹皮酚的研究較多[3],其藥理作用已較為明確,具有鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛、抗菌消炎的功效[4]。本文建立了一種簡便、經(jīng)濟的HPLC法測定藥材及其注射液中丹皮酚的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

FL2000液相色譜儀;FL9500工作站(溫嶺福立分析儀器有限公司);Venusil XBP-C18色譜柱。

1.2 試藥

丹皮酚對照品(中國藥品生物制品檢定所,110708-200505);丹皮酚注射液(市售);徐長卿藥材(市售);甲醇為色譜純;水為超純水;其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Venusil XBP-C18(200mm×4.6mm,5μm);流動相:甲醇—水(70∶30,v/v);流速:1.0mL·min-1;檢測波長:274nm;AUFS:0.6;柱溫:室溫(30℃);進樣量:20μL。

表1 徐長卿藥材的回收率結(jié)果(n=3)

表2 丹皮酚注射液的回收率結(jié)果(n=3)

表3 不同產(chǎn)地徐長卿中的丹皮酚含量測定結(jié)果(n=3)

表4 不同批號的丹皮酚注射液中的丹皮酚含量測定結(jié)果(n=3)

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

2.2.1 丹皮酚系列對照品溶液制備 精密稱取丹皮酚對照品12.9mg,置于100mL量瓶中,用甲醇定容成129.0μg·mL-1儲備液。精密量取儲備液適量,甲醇定容成丹皮酚系列對照品溶液,濃度為0.03225、0.0645、0.3225、1.29、3.225、6.45、12.9μg·mL-1。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取上述系列溶液20μL進樣,以峰面積為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo)進行回歸分析,得到線性方程:A=114896X- 2172.31,r=0.9999,線性范圍為0.03225～12.9μg·mL-1。

2.3 分析方法的確證

2.3.1 供試品溶液的制備 精密稱取藥材粗粉0.5g。置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇30mL,稱定重量。超聲處理30min后,放冷,再稱定重量,用甲醇補足重量,搖勻,取續(xù)濾液將殘渣洗滌數(shù)次,合并續(xù)濾液。精密量取1mL,置100mL量瓶中,用甲醇定容至刻度,即得。取丹皮酚注射液(10mg∶2mL)0.5mL,置10mL量瓶中,用甲醇定容后,再取0.5mL至50mL量瓶中,用甲醇定容至刻度,即得。

2.3.2 精密度試驗 取藥材與注射液供試品溶液20μL,按色譜條件重復(fù)進樣6次,RSD分別為1.0%和0.85%,表明精密度良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗 分別于0,1,4,12,24,48h時間點,取同一供試品溶液20μL進樣測定,RSD分別為1.1%和1.6%,表明藥材的甲醇提取液與注射液的甲醇液在48h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.4 回收率試驗 精密稱取藥材粗粉50mg,共9份,分3組,置10mL量瓶中,各組分別精密加入丹皮酚對照品溶液(34.6μg·mL-1)0.5,1.0,1.5mL和甲醇3mL,超聲處理30min后,過濾。另將丹皮酚注射液稀釋成2.34μg·mL-1供試品溶液,各取1mL置10mL量瓶中,共9份,分3組,各組分別精密加入丹皮酚對照品溶液(2.84μg·mL-1)1,2,3mL,用甲醇定容。取20μL按色譜條件進樣,測得平均回收率。結(jié)果見表1、2。

2.4 樣品測定

用本法對3個產(chǎn)地徐長卿藥材及同一廠家3個批號的丹皮酚注射液中丹皮酚進行含量測定,結(jié)果見表3、4。

3 討論

實驗中考察了0.02、0.2、0.6、0.8AUFS時丹皮酚標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍,結(jié)果以0.6AUFS時丹皮酚有較寬的線性范圍,為進一步建立體內(nèi)丹皮酚的含量分析方法奠定基礎(chǔ)。測定結(jié)果表明,不同產(chǎn)地的徐長卿和不同批號的丹皮酚注射液中丹皮酚含量均有一定差異。提示在選擇藥材進行加工時,應(yīng)注意藥材與制劑質(zhì)量的密切關(guān)系。

目前,有關(guān)丹皮酚的含量測定方法有許多,但大多是對藥材牡丹皮及其復(fù)方制劑中的丹皮酚而言。本文建立了徐長卿藥材中的丹皮酚的提取優(yōu)化和HPLC測定,為中藥復(fù)方中含徐長卿的制劑提供了一種可行的定性定量方法。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(2005)一部[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:200～201.

[2]孫文基,謝世昌.天然藥物成分定量分析[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2003：345.

[3]吳波.中藥牡丹皮的研究-牡丹皮中丹皮酚的含量測定[M].北京:藥學(xué)學(xué)報,1966,13(2):145.

[4]呂成明,劉海燕.丹皮酚的藥理作用研究進展[J].醫(yī)藥導(dǎo)報,2005,2(24):142～143.

Determination of Paeonol Content in Cynanchum Paniculatum and Paeonol Injection by HPLC

GUO Lin GUO Dongjun
Jinzhou Institute for Food and Drug Control,Jinzhou,Liaoning 121001,China

Objective To establish a method for the determination of paeonol in Cynanchum paniculatum and Paeonol injection.Methods Venusil XBP-C18(200mm×4.6mm,5μm)column and methanol-water(70∶30,v/v)as mobile phase were used.The flow rate was 1.0 mL·min-1,The UV detection wavelength was set at 247 nm.Results The calibration curve was linear in the range from 0.03225 to 12.9μg·mL-1,with r =0.9999. The recovery was 97.8% and 98.6%,and RSD was 1.2% and 1.3%.Conclusion This method is rapid and accurate,it can effectively control interal quality of Cynanchum paniculatum and Paeonol injection.

Cynanchum paniculatum;Paeonol injection;HPLC

R284

A

1674-0742(2011)10(b)-0014-02

2011-07-14